王晓艳,林广宇,张 宇,杨 静*
1.辽源市动物疫病预防控制中心,吉林辽源 136200;2.吉林省牧业信息中心,吉林长春 130062
近年来,随着养殖业的不断发展,禽类细菌性疾病感染现象日趋增多。鸡大肠杆菌作为养禽过程中常见的一种致病菌,血清型多达200余种。在养殖实践中,由于抗生素类药物使用不规范,耐药菌株不断产生,耐药性不断增强,导致治疗难度不断加大。鸡大肠杆菌病特别是败血型大肠杆菌病,具有发现难、发病快、治疗难、死亡率高的特点,所以在诊疗过程中,药敏实验尤为重要。正确的药敏实验,不仅可以快速、精准的指导我们选择出抗菌效果好的抗生素,更能减少养殖户的经济损失,达到更好的禽群治疗效果。
吉林省磐石市六和乡养殖户吴某家中饲养了80日龄海兰褐青年蛋鸡14 000只,在2020年10月中旬,鸡群有轻微呼吸道症状,采食量饮水量均正常,鸡只陆续出现急性死亡,死亡鸡只身体僵硬,羽毛整齐。初期发病时,每天死亡1~3只,吴某没有在意。发病5 d后,每天死亡多达30余只。鸡群无明显病状,每间隔数小时就会发现死亡鸡只。
通过解剖发现,鸡心脏和肝脏表面有一层淡黄色纤维素性渗出物,形成心包炎和肝周炎,肺脏轻微淤血,第一只气管有少量分泌物,个别鸡只腹膜有半熟蛋黄样渗出,形成腹膜炎。鸡嗉囊、肌胃内均有未消化饲料,初步诊断为败血型大肠杆菌感染。采集心脏、肝脏、脾脏等数个病料,做下一步诊断。
无菌采集病禽的心、肝、脾等实质性器官,涂片革兰氏染色,可见大量革兰氏阴性小杆菌,故对病料做麦康凯培养基培养。培养12~15 h后,发现培养基上有红色菌落出现,确定该病菌为大肠杆菌,结合临床出现的败血症状,确定为败血型大肠性杆菌病。
事先制作完成的营养琼脂培养基,将病料表面灭菌后无菌切开,取将切开的病料均匀涂布于营养琼脂培养基表面,涂层要均匀,且不易过厚,再将涂完病料的培养皿倒置备用。
按药品使用说明剂量的比例,取20 mL蒸馏水配制药品溶液(浓度为正常使用量的30倍),将50片相同大小的空白试纸片放入溶液中混匀,再以35~37 ℃烘干。上述过程重复操作2次后,把自制药敏试纸片封装备用。
取出自制药敏实验试纸片,有序粘贴在涂完病料的培养皿上,每个平皿粘贴5~7个自制药敏实验试纸片,每两个试纸片之间的距离应在24~26 mm之间,同时作好记录。
将制作完成的培养皿倒置,放入恒温培养箱中10~12 h,期间要注意保持恒温培养箱的湿度在35%~40%之间,如果没有湿度计,可以将培养皿放入湿盒中,再放入培养箱。6 h以后,每隔2 h观察一次细菌繁殖情况,并做好相关记录。
细菌培养结束后,测量抑菌环的大小,记录相关实验数据。氨基糖甙类和喹诺酮类抑菌环直径16 mm, 为高度敏感。氯霉素类抑菌环直径10 mm,属中度敏感。磺胺类抑菌环2 mm,属不敏感药物。
因该户鸡群为14 000只80日龄的青年蛋鸡,根据氨基糖甙类和喹诺酮类高敏的实验结果,选择用10%的恩诺沙星15袋(每袋100 g)治疗,方法是:每天饮水1次,每次集中饮水2~3 h,5 d为一个疗程。同时,为了进一步加快治疗进程,增强鸡体抵抗力,我们在饲料中大剂量拌入益生菌,连续拌料5 d。通过此种治疗方法,鸡群在用药2 d后,死亡率迅速下降;在用药第5天,再未发现有死亡鸡只出现,鸡群基本痊愈。