补肾活血方对促排卵PCOS大鼠子宫内膜整合素ανβ3的表达调节

邓琳琳

南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473000

研究表明，无论是自然妊娠还是辅助生殖技术后妊娠，多囊卵巢综合征（PCOS）患者的自然流产率均高于健康女性[1]。因此寻求改善PCOS患者子宫内膜容受性的途径成为解决其生殖障碍的关键。本实验通过动物实验，验证补肾活血方是否能对促排卵PCOS模型大鼠的子宫内膜容受性产生正面作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组 6周龄雌性SD大鼠30只，体质量220～240g。采购于河南省动物实验中心，生产许可证号SCXK（豫）2013-0001，适应性喂养3天（温度20～26℃，湿度40～60%，光照10小时/天）。随机分为正常组10只和建模组20只，正常组予以1%CMC溶液灌胃，模型组以来曲唑溶液连续灌胃21天。尾静脉取血行血清学检测，确定建模结果。将建模成功的PCOS大鼠随机分为对照组10只和方剂组10只，分别予以克罗米芬溶液、补肾活血方配合克罗米芬溶液灌胃，同时继续给与正常组1%CMC溶液灌胃，5天后寰椎脱臼法处死取子宫内膜。

1.2 实验药品及制备 来曲唑片（芙瑞，2.5mg/片，江苏恒瑞医药股份有限公司），溶于1%CMC溶液中，以1mg/kg·d给大鼠灌胃。克罗米芬片（枸橼酸氯米芬胶囊，50mg/粒，广州康和药业有限公司），溶于1%CMC溶液中，以5mg/kg·d给大鼠灌胃。补肾活血方（中药颗粒制剂，深圳三九医药公司）包含：菟丝子颗粒 0.5 克/包、桑寄生颗粒1克/包、续断颗粒1.5克/包、当归颗粒3克/包、熟地颗粒3克/包、丹参颗粒1.5克/包、白芍颗粒1克/包、黄芪颗粒1克/包、山茱萸颗粒1克/包、紫河车颗粒1克/包、盐杜仲颗粒 1克/包、制香附颗粒1克/包混合并加入30ml的沸水，充分溶解后以10ml/kg·d给大鼠灌胃。

1.3 检测方法 放免法测定大鼠血清性激素水平；免疫组化法检测大鼠子宫内膜上雌激素受体（ER）和孕激素（PR）受体的表达情况；RT-PCR法检测整合素ανβ3 mRNA在大鼠子宫内膜上的表达差异。

1.4 统计学处理 所有数据均运用SPSS17.0统计学软件处理。计量资料以均数±标准差（Mean±SD）表示，均数比较用t检验；计数资料进行卡方检验。统计学检验水准α=0.05。P＜0.05为差异具有统计学意义,P＜0.01为具有极显著性差异。

2 结果

2.1 各组大鼠子宫内膜ER、PR的表达结果 ER、PR表达于子宫内膜细胞的胞核（见图1），利用计算机图像分析技术，检测各物质表达的平均光密度，表达其阳性率，结果如下：

图1 各组大鼠子宫内膜ER、PR的表达情况

利用计算机图像分析技术，通过检测各物质表达的平均光密度，表达其阳性率，结果见表1。

表1 各组大鼠子宫内膜ER、PR的表达情况

正常大鼠子宫内膜ER、PR的表达低于其他组（P＜0.05），在PCOS大鼠中，方剂组的ER、PR的表达低于对照组（P＜0.05），与正常组相似（P＞0.05）。

2.2 各组大鼠子宫内膜整合素ανβ3 mRNA的表达 用RTPCR检测各组大鼠子宫内膜整合素ανβ3 mRNA的表达，结果分别是：正常组1.52±0.35；对照组1.27±0.21；方剂组1.33±0.48。整合素ανβ3 mRNA在正常组的表达量最高（P＜0.05），且在方剂组表达高于对照组（P＜0.05）。

3 讨论

PCOS在中医古典文献中并无明确记载，但根据临床表现，PCOS当属中医学中“闭经”、“月经后期”及“不孕症”的范畴[2]。中医学者将其划分为三种证型：“肾虚血瘀型”、“脾虚痰湿型”和“痰瘀互结型”，其中“肾虚血瘀型”是最为常见的。考虑肾主生殖，故中医多采用“补肾”疗法来提高患者成孕。西医则通过做人工周期和促排卵作为解决PCOS患者排卵障碍的一线疗法，虽然经过治疗大多数患者能顺利的排卵和受精，但受精卵的低着床率却制约了妊娠的成功[3]。改善子宫内膜的容受性，提高着床几率成为治疗育龄期PCOS患者的关键所在。

目前研究较多的是整合素ανβ3，它在增殖期内膜中几乎无表达，而在分泌期中表达呈阳性[4]，尤其是在胚泡植入前这段时间，表达量最高，说明它与内膜的容受性密切相关，参与调节胚胎着床[5]。而我们发现PCOS模型大鼠子宫内膜的整合素ανβ3的表达量是降低的，说明内膜允许胚胎着床的能力下降。在经过补肾活血方的治疗后，ανβ3的表达量有所增加，证明此方剂可以有效改善PCOS模型大鼠子宫内膜的容受性。

激素的作用在胚胎着床过程中广为人知，影响子宫内膜容受性的主要激素就是来源于卵巢的雌、孕激素，这两种激素通过各自的受体进行调节。有研究表明，子宫内膜整合素的表达受增加的雌/孕激素比值调节，其中孕激素受体在植入窗期子宫内膜的腺上皮内表达下降[6]。这与我们观察到的结果基本一致。所以说，孕激素的变化对子宫内膜整合素ανβ3的表达调节更为重要。

综上所述，补肾活血方可以调节促排卵PCOS大鼠子宫内膜上雌孕激素受体含量，并增加整合素ανβ3的表达，从而改善PCOS大鼠子宫内膜容受性，可以用来提高受精卵的着床几率，降低生殖障碍。