淋巴细胞亚群在人鼻病毒感染儿童毛细支气管炎中的临床意义

杨斌，邵雪君，朱宏

（苏州大学附属儿童医院检验科，江苏 苏州 215000）

淋巴细胞是机体适应性免疫功能的主要承担者，其各亚群间的相互协调、相互制约，进而形成稳定的免疫应答反应。外周血中成熟的T淋巴细胞主要包括表达CD4+辅助性T细胞及表达CD8+抑制性T细胞两个亚群，并且两者处于一个动态平衡及相互调节状态；而B淋巴细胞则是体液免疫的主要参与者，产生的免疫球蛋白是抵抗病毒及细菌等病原微生物的直接作用机制；另外，NK细胞是机体固有免疫反应的主要参与者。本研究的目的主要是对HRV感染所致毛细支气管炎患儿的外周血淋巴细胞亚群进行检测，并将HRV与RSV感染毛细支气管炎患儿及正常健康儿童的外周血中淋巴细胞亚群的比例变化进行性对比分析，以便更好的认识不同HRV感染的毛细支气管炎患儿的免疫应答状态，为临床诊断和治疗儿童HRV感染毛细支气管炎提供客观的理论依据。

1 方法

1.1 研究对象 选择2016年1月-2019年7月在苏州大学附属儿童医院呼吸科住院的2岁以下毛细支气管炎患儿32例，其中HRV阳性9例，RSV阳性的患儿23例，所有患儿经呼吸道病毒检测时，都仅发现一种病毒感染，而且均表现为第一次喘息，其诊断标准符合《诸福棠实用儿科学》第7版[19]，并排除其他喘息性疾病、先天性心脏病、免疫功能缺陷、先天性气道发育畸形、神经肌肉疾病及遗传性疾病等。随机选取同期2岁以下门诊体检健康儿童24例，其中男14例，女10例。分组：按照病原学检测结果分为HRV感染组、RSV感染组及正常对照组。

1.2 试剂和仪器 CD3-FITC/CD8-APC-Cy7/CD45PerCPCy5.5/CD4-PC7/CD16+ CD56- PE 荧光单克隆抗体试剂盒（北京同生时代生物技术有限公司）；流式细胞仪用红细胞裂解液（BD，美国）；量程范围适用于20、100 μL、1 mL的移液器及一次性吸头；涡旋振荡器； 低速离心机； 流式细胞分析（FACS canto II，BD，美国）。

1.3 检测方法

1.3.1 标本采集 入院后当天采集外周静脉血2 mL，肝素钠抗凝送检。

1.3.2 淋巴细胞亚群测定 使用流式细胞仪（FACS canto II，BD，美国）检测标本，操作参照试剂盒说明书：（1）在流式管底部加入20 μL CD3-FITC/CD8-APC-Cy7/CD45PerCP-Cy5.5/CD4-PC7/CD16+CD56-PE/试剂于试管底部；（2）采用反向移液吸取50 μL混匀的肝素抗凝血，加入管底，避免血液碰到管壁。（3）轻轻涡动混匀约3 s，室温避光孵育15-25 min。（4）向管内加入450 μL 1×流式细胞仪用溶血剂。（5）轻轻涡动混匀10 s，室温避光孵育15 min。（6）上机检测，淋巴细胞亚群结果由BD Canto软件自动获取，测定CD3+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+、CD19+、CD16+CD56+细胞相对计数及CD4+/CD8+。

1.4 统计方法 本实验所有数据均采用SPSS 24.0进行统计分析，正态分布计量资料以（Mean±SD）表示；采用单因素方差分析进行统计分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

三组间淋巴细胞亚群比例的差异比较，如表1所示：HRV感染组、RSV感染组及正常对照组之间CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值存在明显差异，F值分别为：4.452，25.151，19.004，P值均＜0.05。其中，HRV感染的毛细支气管炎患儿的CD3+T细胞在三组比较中表达最低，而RSV感染者CD3+CD8+T细胞比例及CD4+/CD8+比值均高于HRV感染患儿。CD3+CD4+T细胞、CD3-CD19+B细胞和CD3-CD16+CD56+NK细胞比例的差异则无明显差异，F值分别为：2.598，2.467，1.109（P值均＞0.05）。

表1 HRV和RSV感染的毛细支气管炎患儿及正常对照组三者间淋巴细胞亚群比例比较（Mean±SD）

3 讨论

病毒是引起儿童毛细支气管炎的主要病原之一，其病理改变主要包括炎症细胞浸润；粘膜充血、水肿，可伴有上皮细胞坏死脱落；粘液分泌增加和平滑肌痉挛等[1]。临床上常表现为发热、咳嗽、喘憋，这些症状较难与肺炎的症状相区别，为此有人称之为喘憋性肺炎。病毒性毛细支气管炎多见于2岁以下儿童，相关流行病学调查研究显示[2.3]，0-1岁婴幼儿的发病率约18%-32%，1-2岁幼儿的发病率为9%-17%，现已成为临床一个巨大负担。引起毛细支气管炎的病毒谱较为广泛，包括呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）、HRV、人博卡病毒（human bocavirus，HBoV）、人偏肺病毒（human metapneumovirus,HMPV）、副流感病毒（parainfluenza virus，Pinf）、腺病毒（adenovirus，ADV）和流感病毒（influenzavirus，Inf）等，其中RSV和HRV是儿童毛细支气管炎最主要的两种病原体[4]。相关研究显示[5]，1岁以内毛细支气管炎患儿以RSV感染为主，1岁以上患儿HRV感染上升为最主要地位。

儿童呼吸道系统尚未发育成熟，并且自身的免疫系统也在不断完善之中，所以较为容易被呼吸道病毒入侵，引起呼吸道感染。检测淋巴细胞亚群有助于了解机体免疫状况及一些疾病的监测。最常检测的亚群包括T细胞（CD3+）、B细胞（CD19+）、NK细胞（CD16+CD56+）、辅助性T细胞（CD4+）和抑制性T细胞（CD8+）等。

本次研究发现，HRV感染的毛细支气管炎患儿相较正常健康儿童，外周淋巴细胞亚群变化主要表现为CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞比例明显下降，CD3-CD19+B细胞比例和CD4+/CD8+比值则明显上升， 为此，HRV感染毛细支气管炎患儿的淋巴细胞亚群存在明显的比例失衡，进而表现出不同程度的免疫功能紊乱。