分子诊断技术结合传统分离方法在致泻性大肠杆菌检测中的运用分析

谭寅凤

（吉林市人民医院，吉林 吉林 130021）

致泻性大肠杆菌（DEC）是引起腹泻的主要致病菌，根据其侵袭性及毒性，临床将其分为5类，分别为：致病性大肠杆菌（EPEC）、产毒性大肠杆菌（ETEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）和聚集性大肠杆菌（EAEC）。随着诊疗技术的不断提高，将分子诊断技术与传统的分离方法相结合，能提高致泻性大肠杆菌引起食物中毒的病原菌检出率[1]，有利于临床对症采取治疗措施，提高疾病治愈率，促使患者早日康复。下面对500份粪便样本实施致泻性大肠杆菌检测，采用荧光PCR法联合传统分离方法，分析致泻性大肠杆菌阳性率及各相关病原菌检出率，具体研究内容如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源 2018年6月-10月选取我省几个具有代表性监测医院送检的的500份粪便样本，均为腹泻患者。

1.2 试剂与仪器 培养基：GN增菌液；试剂盒：荧光诊断试剂盒购自上海之江生物科技有限公司；仪器：荧光PCR仪，型号为Rotor-gene 6000（Corbett）。

检测方法：采集的粪便采用GN增菌液，共收集1 mL增菌液，以13000 r/min进行离心处理，时间为2 min，去尽上清，混合入100 μL DNA提取液，置入沸水10 min，以13000 r/min进行离心处理，时间为5 min，取上清，以此作为RT-PCR反应的模板DNA。荧光PCR的反应体系及扩增程度严格按照说明书流程实施操作，其程度为，置入37oC环境中2 min，置入94oC环境中2 min，置入93oC环境中15 s转换成60oC环境中60 s，共循环40次。

2 结果

2.1 500 份粪便样本病原菌检出情况 500份粪便样本，致泻性大肠杆菌检出95份，检出率为19.00%，各种病原菌检出率EPEC最高，为8.20%，其次为EAEC，7.00%，EIEC为2.40%，ETEC为1.40%，无EIEC500份粪便样本，致泻性大肠杆菌检出95份，检出率为19.00%，各种病原菌检出率EPEC最高，为8.20%，其次为EAEC，7.00%，EIEC为2.40%，ETEC为1.40%，无EIEC。

表1 病原菌检出分布时间

2.2 病原菌检出分布时间 致泻性大肠杆菌6月份检出率最高，为39.10%，其次为7月份，占16.58%，EPEC、ETEC、EIEC及EAEC均6月份检出率最高，可见6月是疾病的高发期，详见表1。

3 讨论

致泻性大肠杆菌与普通致病大肠杆菌形态及生化特征无明显却别，因此容易出现混淆的情况，只能从血清学角度进区分。食品标准GB 4789公布，致泻性大肠杆菌银从血清凝聚方面入手，将国际上常见种类加以分类，确定血清型后实施毒力试验，但该种检测方式耗时长且浪费人力物力，病原菌阳性检出率也不高，不利于病原检测工作的开展。随着分子生物技术的发展，其运用到各种疾病的检测中，荧光PCR法在临床使用范围广泛，将其与传统分离方法相结合，能快速获得诊断结果，且灵敏性极高，能提高操作人员工作效率，使其劳动强度降低，简单省时，具有极高的临床使用价值[2]。通过本次研究结果可知500份粪便样本，致泻性大肠杆菌检出95份，检出率为19.00%，各种病原菌检出率EPEC最高，为8.20%，其次为EAEC，7.00%；致泻性大肠杆菌6月份检出率最高，为39.10%，其次为7月份，占16.58%，EPEC、ETEC、EIEC及EAEC均6月份检出率最高，可见6月是疾病的高发期，满足腹泻病的流行病学特点。

综上所述，采用荧光PCR法联合传统分离方法检测致泻性大肠杆菌准确率高，其次，EAEC及EPEC是致泻性大肠杆菌的主要病原菌。