食品中脱氢乙酸的测定

暴会蕊 郭会芝

摘 要：目的：用液相色谱法对不同食品中脱氢乙酸的测定进行验证。方法：经50 g·L-1氢氧化钠溶液调样品pH提取脱氢乙酸，经离心、过柱净化、洗脱、过膜，用紫外检测器测定样品中的脱氢乙酸。结果：标准曲线有良好的线性关系（R2=1），最低检出浓度为0.44 μg·mL-1，测定样品的相对标准偏差为2.65%～8.36%，加标回收率为79.2%～111.2%。结论：该方法操作简单，检测灵敏度高，干扰少，结果准确。

关键词：液相色谱法;蛋糕;橙汁饮料;脱氢乙酸

Abstract：Objective： To verify the determination of dehydroacetic acid in different foods by liquid chromatography. Methods： Dehydroacetic acid was extracted by adjusting the pH of the sample with 50 g·L-1 sodium hydroxide solution， purified by centrifugation， column， elution and membrane， and the dehydroacetic acid in the sample was determined by UV detector. Results： The standard curve had a good linear relationship （R2=1）， the lowest detection concentration was

0.44 μg·mL-1， the relative standard deviation of the samples was 2.65%～8.36%， and the recovery rate of spiked samples was 79.2%～111.2%. Conclusion： The method is simple， sensitive and accurate.

Key words：Liquid chromatography; Cake; Orange juice beverage; Dehydroacetic acid

中图分类号：R155.5

脱氢乙酸是一种低毒高效的防腐剂，在酸、碱条件下均有一定的抗菌作用。尤其是对霉菌的抑制作用最强，是一种有效的消毒剂。自1940年发现其具有抗菌性，就被用作防腐剂，脱氢乙酸及其一些衍生物已用于食品、纺织、造纸、橡胶、塑料、档案以及工艺美术品等工业品的防腐防霉。目前，脱氢乙酸测定方法主要是氣相色谱法、液相色谱法、液相色谱-串联质谱法。本文选用液相色谱法对食品中的脱氢乙酸进行测定。

1 材料及方法[1]

1.1 原理

用氢氧化钠溶液提取试样中的脱氢乙酸，经脱脂，去蛋白处理，过膜，用Thermo U3000紫外检测器测定，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器

Thermo U3000配紫外检测器，十万分之一天平，粉碎机。

1.2.2 试剂

甲醇（色谱纯）、0.02 mol·L-1乙酸铵溶液、50 g·L-1氢氧化钠溶液、10%甲酸溶液、120 g·L-1硫酸锌溶液、70%甲醇溶液、正己烷（色谱纯）、脱氢乙酸标准品（编号：21680，批号：171011，含量：99.90%）、脱氢乙酸钠标准品（编号：BW4067，批号：T160352，含量：99.40%）、脱氢乙酸标准溶液（编号：SB05-261-2011，批号：201902，含量：1 000 ?g·mL-1），所有标准品均在有效期内。

1.3 色谱条件

色谱柱：依利特C18 4.6 mm×250 mm，5 μm;流动相：甲醇+0.02 mol L-1乙酸铵溶液（10+90，体积比）;流速：1.0 mL·min-1;柱温：30 ℃;进样量：20 μL;检测波长：293 nm。

1.4 样品处理

1.4.1 蛋糕

用粉碎机将蛋糕粉碎，混匀。称取试样2 g（精确至0.001 g），置于25 mL离心管中，加入10 mL水、5 mL硫酸锌溶液，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，转移至25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，超声提取10 min，转移到分液漏斗中，加入10 mL正己烷，振摇1 min，静置分层，弃去正己烷层，加入10 mL正己烷重复进行一次，取下层水相置于离心管中，4 000 r·min-1离心10 min，取上层清液过膜上机待测。

1.4.2 橙汁饮料

样品混匀后，称取试样5 g（精确至0.001 g），置于50 mL离心管中，加入10 mL水，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，转移至50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，4 000 r·min-1离心10 min。取20 mL上清液用10%的甲酸溶液调pH至5，定容至25 mL。取5 mL过已活化的C18固相萃取柱（500 mg，6 mL），用5 mL水淋洗，2 mL70%的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液2 mL，涡旋混合，取上清液过膜上机待测。

2 结果与分析

2.1 样品预处理

2.1.1 蛋糕

样品在调pH至7.5时，因临界点不好掌握，用20 g·L-1氢氧化钠溶液调pH时，因加入量在5～8 mL，加入量较大，后期混匀较难，故在国家标准方法基础上相应提高氢氧化钠溶液的浓度，用50 g·L-1氢氧化钠溶液调pH时，加2.75～3.00 mL氢氧化钠溶液将其pH值控制在6.8～8.2，其测定结果见表1。

2.1.2 橙汁饮料

因在处理前测得原样pH值在4.6，样品中脱氢乙酸含量为未检出，故在加标测定时，对调pH和不调pH做了相应的比对，其比对结果见表2。

在处理过程中固相萃取柱必需保持湿润状态，通过反复实验，在经过固相萃取柱净化后用2 mL洗脱液洗脱存在洗脱不完全现象，故对方法进行相应调整，将洗脱液提高至5 mL，以确保洗脱完全。

2.2 线性范围与最低检出限

2.2.1 线性范围

在本实验室条件下，脱氢乙酸含量在0.4～200 μg·mL-1内，标准含量（x）与峰面积（y）有良好的线性关系，其相关系数为1.000 0，回归方程为y=0.521 5x+0.172 9，标准色谱图见图1。

2.2.2 最低检出限

取浓度0.08、0.20、0.40 μg·mL-1标准样品分别进样10次，定性分析确定临界值如表3，定量限检测数据见表4，最低检出限：0.4+3S=0.44 μg·mL-1。

2.3 方法提取回收率实验与精密度实验[3]

样品色譜图见图2、图3，加标样品色谱图见图4、图5。取2 g左右的蛋糕匀样分别加入1.0 mg·mL-1的标准液0.075、0.300、1.500 mL，各测定6次，其平均回收率为84.8%～111.2%，RSD值在5.14%～7.39%，见表5;取5 g混匀后的橙汁饮料分别加入1.0 mg·mL-1的标准液0.025、0.200、1.00 mL，其平均回收率为79.2%～100.2%。各测定5次，RSD值在2.65%～8.36%，见表6。

3 结论

本实验室对测定蛋糕和橙汁饮料中脱氢乙酸的测定法，方法线性范围宽，基质干扰少，灵敏度高，前处理简单，准确度高。

参考文献：

[1]国家卫生和计划生育委员会.GB 5009.121-2016 食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定[S].北京：中国标准出版社，2016.

[2]国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.GB/T 27417-2017 合格评定 化学分析方法确认和验证指南[S].北京：中国标准出版社，2017.

[3]国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测[S].北京：中国标准出版社，2008.