医院多重耐药菌对常用消毒剂抗性的研究

林伟 刘雪玉 陈凌晖

随着近年来临床带有侵入性性质的诊断、治疗操作越来越多，其中大量使用了广谱抗菌素，导致耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等致病性耐药菌日渐增多，由此成为院内患者发生感染的主要致病菌，一方面这些致病菌不仅会在病患之间交叉感染，另一方面也会由于附着在医院物品表面而发生交叉感染，所以，在医院内环境感染控制的工作中，医院环境清洁也成为了十分重要的内容。日常消毒工作中，消毒不彻底、不恰当等，均会导致致病菌对消毒剂产生耐药性[1]。不少学者在临床领域中，均展开了与多重耐药菌、消毒剂抗性等相关的研究，而这主要是因为多重耐药菌感染后，会增加患者疾病治疗的难度[2]。为了进一步明确医院环境分离致多重耐药菌情况，及其对医院常用消毒剂的抗性、敏感性情况，为后期制定合理的消毒方案提供依据，研究内容如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月2日—2018年1月30日于本院各临床科室检出的多重耐药菌株：铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌以及鲍曼不动杆菌。标本采集来源于住院患者接触医院环境物体表面（病床被褥、床档等）。

1.2 方法

在消毒剂的选择上，使用常规的消毒剂，分医务人员手部作为研究样本，对所选取的样本行细菌培养分离别为84消毒液、苯扎溴铵、碘伏消毒剂，上述三种常用的消毒剂在院内应有的有效时间为7 d。

检测方法：在检测过程中，采用中和剂进行鉴定试验。试验菌设为铜绿假单胞菌。84消毒液、碘伏中和剂为浓度为80.2%的吐温，浓度为0.5%的含硫代硫酸钠，浓度为0.2%的卵磷脂磷酸盐缓冲液；苯扎溴铵的中和剂为浓度为80.3%的吐温，浓度为0.5%的含硫代硫酸钠，浓度为0.3%的卵磷脂磷酸盐缓冲液。

菌悬液的制备方法：在新鲜固体琼脂培养基的接种平板上，直接涂抹从现场采集到的菌株样本，将培养基接种平板放置在温度为37℃的培养基中，培养时间为24 h。将准备好的典型菌落接种MH肉汤取出，把接种的平板放在温度为37℃的环境中培养24 h，同样放置在温度为37℃的培养基中，培养时间为6 h。6 h后，将其取出，借助活菌计数的方式，使其菌悬液的浓度达到1.0×107～1.0×109cfu/mL，进行备用。

对最小杀菌浓度进行测定：主要使用等比稀释的方法，将最小的抑菌浓度无菌增长作为最低的稀释液，选取容量为0.1 mL，将其加入到容量为0.9 mL的中和液中，10 min后取出0.2 mL的混悬液将剂量为0.2 mL的混悬液取出，然后将其接种到琼脂的培养平板上，将其放在温度为37℃的环境中培养48个小时，对培养的结果进行观察。当无细菌生长的最低稀释度，可看做是最小杀菌浓度值，该试验需反复做3次。

1.3 观察指标

观察三种消毒剂对环境分离致病菌检出率及各致病菌对消毒液抗性的影响。

1.4 统计学方法

使用SPSS 19.0统计软件对统计数据进行处理，计数资料使用χ2检验，相关数值反映了实际频数与理论频数的吻合程度，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 致病菌检出情况

本次研究中分离出的耐药菌包括30株铜绿假单胞菌，15株肺炎克雷伯杆菌，5株鲍曼不动杆菌。其中，铜绿假单胞菌检出的30株，患者被褥检出率最高为66.67%；肺炎克雷伯杆菌检出的15株，患者被褥检出率最高为46.67%；鲍曼不动杆菌检出的5株，患者被褥检出率最高为60.00%。见表1。

2.2 致病菌对消毒液最小抑菌与杀菌浓度分布

常用消毒剂对三种致病菌的最小抑菌与杀菌浓度分布情况，如表2所示。铜绿假单胞菌对84消毒液有抗性；肺炎克雷伯杆菌对苯扎溴铵有抗性；鲍曼不动杆菌对84消毒液和苯扎溴铵有抗性，P＜0.05，差异具有统计学意义。

3 讨论

在医院环境中，细菌、真菌等微生物较多[3]，目前，抗菌消毒剂耐药菌株的种类不断被创新，数量也呈现出明显的上升趋势[4-5]。临床指出，院内致病菌的类型较多，不同的致病菌对不同的消毒液的抗性和敏感性，存在明显的差异[6-7]。基于该研究成果的论述，本研究重点分析了医院环境分离致多重耐药菌对常用消毒剂抗性。

在本次研究中，通过分析医院环境分离致多重耐药菌对常用消毒剂的抗性，首先选取了致病耐药菌，依据检出的数量，铜绿假单胞菌最多，鲍曼不动杆菌最少。由此检出率可以证实，目前医院内环境中的铜绿假单胞菌在院内病原菌中，占比最高，是比较重要和常见的耐药菌[8]。在此基础上，从最小抑菌浓度和最小杀菌浓度方面，实现细菌对消毒剂抗性的检测。本次研究结果显示，铜绿假单胞菌在84消毒液检测方面，分离株明显高于标准株，说明铜绿假单胞菌对84消毒液有抗性，对其他两种消毒菌有敏感性[9-10]。肺炎克雷伯杆菌在苯扎溴铵检测方面，分离株明显高于标准株，说明铜绿假单胞菌对苯扎溴铵有抗性，对其他两种消毒液有敏感性。鲍曼不动杆菌在84消毒液隔和苯扎溴铵面的检测，分离株明显高于标准株，说明鲍曼不动杆菌对84消毒液隔和苯扎溴铵有抗性，对碘伏有敏感性[11-12]。由此可以看出，上述三种致病菌对不同消毒剂均有一定的抗性，需要重视医院对对消毒剂的应用[13-14]。经过本次研究，本人认为日后医院要进一步加强对环境表面的清洁工作，医务人员要保持手清洁。

表1 院内三种多重耐药致病菌检出情况 [例（%）]

表2 常用消毒剂对三种致病菌的最小抑菌与杀菌浓度分布情况（株）

综上所述，医院环境有多重耐药菌，不同耐药菌对不同消毒剂产生的抗性和敏感性不同，建议临床依据平时对耐药菌的监测情况，适时调整消毒方案，做好医院环境和医护人员手部的清洁。