风湿宁胶囊质量标准的研究

施宏彬，何小利，陆秋靖，岑伟煊，李宏捍

（康美药业股份有限公司，广东 广州）

0 引言

风湿宁胶囊是中华人民共和国卫生部药品标准收载的风湿定胶囊处方基础上，增加乳药、没药、红花、牛膝、苍术等改良而来。在已有标准基础上，我们新增白芷和甘草的TLC项目，并增加了HPLC测定处方中白芷的有效成份欧前胡素的含量测定项目，从而提高质量标准，进一步有效控制风湿宁胶囊质量。现制定的质量标准与原标准相比在控制药品质量和有效成分含量方面更为全面有效，且重现性好。

1 主要试剂与仪器

实验仪器：为日本岛津LC-ACP2010高效液相色谱仪，由日本岛津公司制造。

药品与试剂：对照品和对照药材购于中国药品生物制品检定所，所用试剂为分析纯和色谱纯，自制的风湿宁胶囊。

2 实验方法和结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 白芷的薄层色谱鉴别

样品溶液的制备方法：取内容物1.5g，置于锥形瓶中，倒入乙醚30mL，浸渍60分钟，时时振摇，滤过，滤液自然挥干，其残渣滴入乙酸乙酯0.5mL溶解，作为样品溶液。

另取白芷对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另精密称定欧前胡素对照品，滴入乙酸乙酯制备成1mg/mL溶液，作为对照品溶液。照薄层层析法，吸取样品溶液12μl、对照药材溶液和对照品溶液10μl，先后点于同一薄层层析硅胶GF254板上，以石油醚（30-60℃）-乙醚（6：4）为展开剂，在25℃以下展开，拿出，挥干，置紫外光灯（254nm）下检视。样品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。如图1。

图1 风湿宁胶囊中白芷的TLC（荧光）

2.1.2 甘草的薄层色谱鉴别

取内容物5g，加盐酸12mL与三氯甲烷140mL，加热沸腾，于回流管中回流1.5小时，放置室温，过滤，取三氯甲烷溶液，置蒸发皿，水浴蒸干，残渣滴入甲醇1mL溶解，作为样品溶液。另取甘草次酸对照品，滴入甲醇制成1mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层层析法，吸取上述二种溶液各6μl，先后点于同一薄层层析硅胶G板上，以正丁烷-醋酸乙酯-丙酮 （10：1：5）为展开剂，展开，拿出，挥干，喷以 8%磷钼酸乙醇溶液，在100℃烘箱加热至斑点显色清晰。样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图2。

图2 风湿宁胶囊中甘草的TLC（日光）

2.2 白芷中欧前胡素的含量测定

2.2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Luna 5u C18（2） 100A 4.6mm×250mm；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液（65∶35）流速：1.00mL/min；色谱柱温度：室温；测试波长：300nm。在该条件设定下，欧前胡素色谱峰和样品中其它成分色谱峰能明显基线分离，分离度大于1.5；按欧前胡素计算，其理论塔板数（N）为3000以上。

2.2.2 对照品溶液制备

精密称取欧前胡素对照品适量，滴入甲醇制成33μg/mL的溶液，即得。

2.2.3 样品溶液制备

取内容物约5.0g，精密称定，置圆底烧瓶中，倒入甲醇45mL，加热回流60分钟，取出，过滤，滤液至50mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度，摇晃均匀，即得。

分别取供试品、阴性样品及对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，依法测定，样品溶液色谱图中与对照品保留时间一致的色谱峰的紫外吸水光谱与对照品峰的紫外吸水光谱相同，阴性供试品在欧前胡素色谱峰位置处无相应峰出现。见图3、图4。

2.2.4 线性关系的考察

按顺序精密吸取欧前胡素对照品溶液（C=0.028mg·mL-1）2、4、6、8、10、12μl先后进样，收集色谱图，收集各浓度峰面积，结果见表1。以峰面积积分值为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X），计算得到线性回归方程式Y=1041.84X-251.49，r=0.9997。

以上结果显示，在0.056～0.336μg范围内，不同进样量浓度与欧前胡素峰面积积分值呈现良好的线性关系。

2.2.5 稳定性试验

分别精密吸取同一样品溶液，各10μl，按含量测定项下依法操作，按0，2，4，6，8h时间间隔先后注入色谱仪，测试色谱峰面积，测得峰面积积分值，欧前胡素峰面积值的RSD＜2%，试验结果表明，样品溶液在规定的8小时内，呈现稳定性良好。

表1 峰面积积分值及进样量数据

图3 风湿宁胶囊样品供试品HPLC

2.2.6 精密度试验

取同一样品溶液，精密吸取各10μl，连续5次注入色谱仪，测试色谱峰面积，欧前胡素峰面积值的RSD＜1%，试验结果显示，精密度呈现良好结果。

2.2.7 重复性试验

取同一样品五份，按样品溶液制备方法制备，分别按含量测定项下方法操作，进样量分别为10μl，测试峰面积积分值，并计算含量，RSD＜2%，试验结果显示，重复性呈现良好结果。

2.2.8 回收率试验

取样品约2.5g，精密称定，加甲醇分别为35mL、33mL、31mL使之溶解，分别精密先后滴入欧前胡素对照品溶液（C=0.033mg/mL）10mL、12mL、14mL，平行做两份，其它步骤按照样品溶液制备方法制备，按含量测定方法操作，进样量为10μl，以下列数据计算回收率，测试结果见表2。

表2 加样回收率数据

试验结果表明：回收率在97.5%～102.8%之间，加样回收率呈现良好结果。

图4 欧前胡素对照品HPLC

2.2.9 三批样品测定

分别取内容物约5.0g，精密称定，按样品溶液制备方法制得样品溶液，按含量测定方法操作，每次进样量为10μl，测定结果见表3。

表3 三批中试样品数据欧前胡素含量（mg/g）

3 讨论

分析三批中试样品测试数据，风湿宁胶囊含白芷以欧前胡素计为0.1562mg/g左右。按此平均含量，调整下浮20%计算，风湿宁胶囊成品每g含白芷以欧前胡素计应为0.1250mg/g左右，同时，考虑到药材的来源，以及生产剂型过程、贮藏等因素影响，故暂定本品每g含白芷以欧前胡素（C10H10O4）计，不得少于0.12mg，且每粒装0.3g，即本品每粒含白芷以欧前胡素（C10H10O4）计，不得少于0.030mg。