圆齿野鸦椿根化学成分初步研究

林贤山，陈泽明，王 宁，邹小兴，郑智位*

(1.福建省德化葛坑国有林场，福建 德化362509；2. 福建农林大学 林学院，福建 福州 350002；3. 自然生物资源保育利用福建省高校工程研究中心，福建 福州 350002)

圆齿野鸦椿(EuscaphiskonishiiHayata.)为省沽油科野鸦椿属植物，主要分布于福建、江西、浙江等省区[1]。其树形婆娑优美、果皮内外颜色鲜红亮丽，且挂果时间长，是一种很好的园林绿化及冬季观果树种[2，3]。圆齿野鸦椿的果实俗称鸡眼睛，在福建、贵州等民间用来治疗头痛、眩晕、感冒、荨麻疹、漆过敏、疝气等疾病[4-6]。畲族医药中记载其具有抗炎镇痛、清热解毒、消肿散结等功效[7]。目前，已从圆齿野鸦椿果皮、种子、枝和叶等部位分离得到三萜类、酚酸类、黄酮类、倍半萜类及其他类化合物[3,8-12]。但有关圆齿野鸦椿根部化学成分的研究鲜见报道。因此，参照圆齿野鸦椿果皮等化学成分，对其根化学成分进行初步研究，明确其中可能的化学成分，为今后全株的研究和开发利用提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

材料：圆齿野鸦椿根于2017年12月采挖自福建省德化葛坑国有林场坑口工区苗圃，东经118°11′01″，北纬25°50′23″，海拔高度475 m，生长年限为5年。为不影响植株正常生长，只采挖部分侧根，阴干，粉碎成粗粉样品，备用。

试剂：95%乙醇、三氯甲烷、冰乙酸、次硝酸铋、碘化钾、甲醇、三氯化锑、碘、碘化钾、醋酸铅、香草醛、氢氧化钾、镁粉、乙醚、生理盐水、浓氨水、浓硫酸、盐酸等试剂均为分析纯。

1.2 仪器

仪器：UV-5100B紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)，FA2004N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)，HH-8数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)，SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)，KQ-500DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，101-1AB电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)，WP-UP-111-20超纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司)。

1.3 试验方法

1.3.1 水供试液制备

称取圆齿野鸦椿根粗粉5 g置于试管中，加入50 mL 超纯水，放入数控恒温水浴锅(调到60℃左右)中，水浴锅中的水面应高于试管中的溶液面，浸泡1 h 后，趁热过滤，得水提液，将其存入另一个试管中，标注备用。

1.3.2 乙醇供试液、酸水供试液制备

称取圆齿野鸦椿根粗粉20 g于磨口烧瓶中，加入70%乙醇200 mL，于80℃ 的数显恒温水浴锅内，加热回流萃取2 h，冷却，过滤，将抽滤瓶中的液体缓缓倒入量筒中并平均分成2份，一份作为乙醇供试液，另一份置于蒸发皿中浓缩成膏状(无乙醇味)，加入1%盐酸溶解，过滤，得滤液即为酸水供试液。

2 结果与分析

参考圆齿野鸦椿枝、叶所含化学成分[10]，对根部可能含有的化学成分类型，至少采用2种方法进行鉴定及确认[13-14]。

2.1 化学成分预试验

水提液作多糖、皂苷、鞣质等成分测定。结果如表1。

乙醇提取液作强心苷、醌类、香豆素、黄酮、甾体、萜类、酚类等检查，酸水供试液作生物碱检查。结果如表2。

2.1.1 多糖方法学检测

检测一(α-萘酚试剂法)：在1 mL样品水提液中滴加5% α-萘酚乙醇溶液，充分震荡摇匀，再缓缓加入0.5 mL浓硫酸，若两液面交界处出现紫红色环，则证明有多糖类物质。

检测二：在5 mL 样品水提液中滴加碘试剂3滴，会呈现酒红色，则证明有多糖存在。

2.1.2 皂苷类方法学检测

检测一：取样品粉末1 g，置于50 mL量筒中，0.9%NaCl溶液加入15 mL，水浴沸2 min，趁热过滤，再取滤液2 mL到试管，加塞强烈震荡片刻，观察是否产生泡沫，记录泡沫高度，静置10 min后再次观察。

检测二：取材料乙醇提取液5 mL，静置到室温加丙酮，则发现有沉淀析出，小号滤纸过滤，取沉淀4-6 mg到试管，加Ac 1 mL溶解，缓慢加1 mL浓硫酸，液面交界处红色或者红紫色环。

2.1.3 鞣质方法学检测

检测一：将样品的水提物5 mL，加0.5%明胶10%氯化钠溶液(临用新配)，会立刻出现白色絮状沉淀，实验中加少量HCl会更明显。

检测二：取样品粉末2 g，加入分析纯甲醇15 mL，热逆流提取30 min，再取2 mL滤液，加入10%FeCl3液3滴，立刻会呈现深绿色，最后加入氨水试剂2滴与水5 mL震荡摇匀，溶液呈现出深绿色。

2.1.4 强心苷方法学检测

检测一(Kedde法)：取0.2 g样品粉末到50 mL烧杯中，加入10 mL 70%乙醇，再加入2 mL 10%的醋酸铅试液，热水中沸浴5 min，趁热过滤，加新配的3，5-二硝基苯甲酸乙醇试剂和1 mol/L KOH各1 mL，立刻产生大量沉淀并显紫红色。

检测二(Keller-Kiliani法)：将2 mL样品的乙醇提取液于试管中，放置水浴上使其慢慢挥发干，残渣加入2 mL FeCl3-冰醋酸试剂溶解，震荡摇匀，再缓缓加入1 mL浓H2SO4，观察两液面层的颜色变化，界面由红棕色逐渐变为墨绿色、蓝色，最后冰醋酸层变为蓝色或蓝绿色。

2.1.5 醌类方法学检测

检测一：将样品粉末2 g置于小滤纸片上，滴加5% NaOH几滴，观察滤纸，发现被染成红色。

检测二(Borntrager)：取样品乙醇提取液1 mL滴在小纸片上，喷洒10%KOH水溶液，如果有羟基蒽醌类物质就会呈现黄、橙、红色荧光。

2.1.6 香豆素方法学检测

检测一：将样品乙醇提取液1 mL，置于试管中，加入2 mL 3%NaOH溶液在沸浴中加热5 min，液体逐渐澄清，加入2% HCl后，溶液又变为浑浊。

检测二：取样品乙醇提取液5 mL，放于254 nm紫外灯下观察，显紫红色荧光。

2.1.7 黄酮类方法学检测

检测一：将1%的三氯化铝乙醇溶液喷洒到少量样品乙醇提取液中，干燥后出现黄色斑点，紫外254 nm荧光灯下观察有明显荧光反应。

检测二：将适量镁粉加入到2 mL样品乙醇提取液中，充分震荡摇匀，再滴加5滴浓盐酸，2 min会呈现棕红色。

2.1.8 甾体和萜类方法学检测

检测一：将三氯化锑的氯仿饱和溶液(临用时加氯化亚砜1/5的量)喷洒到样品的石油醚物上，若有显色，则证明提取物中有甾体。

检测二：将样品提取残渣部分用1 mL氯仿溶解，滴加浓硫酸1 mL，若氯仿层有红色反应，硫酸层有绿色荧光，则证明样品中含有甾体或三萜类物质。

2.1.9 酚类方法学检测

检测一：将三氯化铁-铁氰化钾溶液(临用时将两溶剂等体积混合)喷洒到少量样品乙醇提取液中，挥发至干，会立刻出现蓝色斑点。

检测二：先将样品乙醇提取液少许滴加到小滤片上，稍等其挥发干燥，并喷洒香草醛-盐酸试剂，滤纸会出现红色。

表1 圆齿野鸦椿根水提取液化学成分预试验结果

表2 圆齿野鸦椿根乙醇提取液化学成分预试验结果

3 结论与讨论

植物次生代谢是阐明中药药效的重要环节[15]，从野鸦椿属植物中已分离化合物84种[12]，而圆齿野鸦椿根部位化学成分研究较少。本次研究中发现，圆齿野鸦椿根中可能含有多糖、皂苷、鞣质、醌类、香豆素、黄酮类、甾体、萜类等化学成分，说明传统药学上将圆野鸦椿根作为主要药用部位是有科学依据的[10]。而未检测到酚类、生物碱，说明圆齿野鸦椿根部位可能不含酚类及生物碱等化学成分。

相关报道显示，前人研究多针对野鸦椿的化学研究，如董玫等[16]从野鸦椿枝叶的甲醇提取物中分离出6种具有抗增殖性炎症活性的化合物，且通过了波谱分析鉴定；田珂等[17]首次对野鸦椿根进行抑制肝脂堆积活性部位筛选和化学成分分离，而对圆齿野鸦椿的研究较少。而圆齿野鸦椿的化学研究也多集中在果实、枝和叶的成分研究方面，而少见根部化学成分的报道。福建省不少地区有较长的野鸦椿属植物应用历史，如畲族常用其果实或叶片煲汤，治疗各型肝病[7]。《福建药物志》[4]上记载野鸦椿属植物不同药用部位在性味和功效上有明显差异，如根微苦、平，可治风湿、腰痛、胃痛、产后风等症。果辛温，可治头痛、眩晕、感冒、荨麻疹、漆过敏、疝气等症。今后应加强圆齿野鸦椿化学成分方面的研究，为进一步开发圆齿野鸦椿的药用资源以及药效物质基础研究提供理论依据。