HSPA1L rs2227956位点单核苷酸多态性与子痫前期遗传易感性关系

李胜军　林岩　宗金宝　刘世国　宋卫青

[摘要]目的探讨HSPA1Lrs2227956位点单核苷酸多态性与子痫前期遗传易感性的关系。

方法采用TaqMan探针实时荧光PCR技术，对山东地区汉族女性中800例子痫前期（PE）病人和1000例正常妊娠孕妇的外周血DNA进行扩增，比较两组HSPA1Lrs2227956位点基因型分布和等位基因频率。

结果PE组和正常孕妇组HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率比较差异无统计学意义（P>0.05）。与正常孕妇组比较，轻度PE组、重度PE组以及早发型PE、晚发型PE组HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率差异均无显著性（P>0.05）。

结论HSPA1Lrs2227956位点多态性与PE的遗传易感性没有相关性。

[关键词]先兆子痫;HSPA1L基因;多态性，单核苷酸;疾病遗传易感性

[中图分类号]R714.24;R363.25

[文献标志码]A

[文章编号]2096-5532（2020）01-0026-04

子痫前期（PE）是一种妊娠期特发性疾病，可以伴有多种脏器的功能损害[1]，其发病率在初产妇为3.0%～7.0%，经产妇为0.8%～5.0%，严重威胁着母儿的生命健康[2]。PE的发病机制至今尚未完全阐明，但研究表明其发病与炎症反应、氧化应激、免疫失衡、遗传因素等有关[3-8]。系统性炎症反应和氧化应激状态会诱导热休克蛋白70（HSP70）表达升高[9]。并且，PE病人血清、血浆以及胎盘组织中都有高水平的HSP70表达[10]。已有研究证实，多种基因的单核苷酸多态性（SNPs）与PE发病及遗传易感性具有密切关系[11-12]。本研究选取HSP基因中一个标签位点rs2227956，探讨其多态性与PE遗传易感性的相关性，旨在为PE的临床诊断及治疗提供遗传学依据。现将结果报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取800例已经确诊的PE病人作为病例组，1000例足月分娩的正常孕妇作为对照组，两组年龄匹配，且均来源于2016年10月—2018年10月在青岛大学附属医院、烟台毓璜顶医院、滨州医学院附属医院、聊城市人民医院、临沂市人民医院、枣庄市妇幼保健院、菏泽市立医院等山东各地医院产科住院的中国汉族妊娠妇女。PE的诊断标准参照美国“国家高血压教育计划”[13]，分度及分型参考相关文献标准[14-15]。其中轻度PE病人181例，重度PE病人619例;早发型PE病人426例，晚发型PE病人374例。对照组为没有PE病史、足月分娩、产后随访亦未发生PE的正常孕妇。两组孕妇均排除前置胎盘、胎膜早破、先兆流产、辅助生殖、巨大儿及双胎妊娠，均无慢性高血压、心脏病、肾病、糖尿病、甲状腺疾病以及系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等全身性疾病病史。

两组孕妇临床资料均完整，包括年龄、月经初潮年龄、妊娠次数、流产次数、收缩压、舒张压、入院孕周、分娩孕周、临床症状以及实验室检查指标等，且所有研究对象均签署知情同意书。本研究获青岛大学附属医院伦理委员会批准。

1.2研究方法

采集研究对象外周肘静脉血2mL于EDTA抗凝管中，用试剂盒提取基因组DNA，然后采用TaqMan探针实时荧光PCR技术对HSPA1L基因rs2227956位点多态性进行检测。PCR反应体系包括：20×SNP探针1.25μL，2×PCRMasterMix12.5μL，模板DNA和去除DNA酶水11.25μL，总反应体系共25μL。实验所用探针、引物及MasterMix均购买于美国ABI公司。其中rs2227956位点上游引物序列为5′-AATGGTATTCTCAATGTC-ACAGCCA-3′，下游引物序列为5′-GGACAAGA-

GCACCGGCAAGGTGAAC-3′。PCR循环条件：95℃预变性3min;95℃、15s，60℃、1min，共45个循环，在C1000TM热循环仪和CFX96TM實时系统（BioGRad，California，USA）中进行扩增反应。最后通过BioRadCFXmanager3.0软件读取基因型。

1.3统计学分析

使用SPSS21.0软件进行统计分析，应用拟合优度χ2检验进行Hardy-Weinberg（HWE）遗传平衡分析，计量资料比较采用Studentst检验，两组间基因型频率及等位基因频率的比较采用Pearsonsχ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组一般基础资料比较

病例组和对照组入院孕周、分娩孕周、新生儿体质量和血压比较差异有显著意义（t=-38.603～78.883，P<0.01），而年龄、月经初潮年龄、孕次和流产次数差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2两组基因型分布和等位基因频率比较

对照组HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率均符合HWE遗传平衡定律（χ2=2.671，P=0.102），说明该研究所选取样本具有群体代表性。病例组与对照组相比，基因型分布差异无统计学意义（χ2=0.901，P=0.637），等位基因频率差异亦无统计学意义（χ2=0.286，P=0.593，OR=0.956，95%CI=0.813～1.126）。见表2。

2.3轻度、重度PE组与对照组基因型分布和等位基因频率的比较

轻度PE病人与对照组、重度PE病人与对照组基因型分布与等位基因频率比较差异均无统计学意义（轻度PE与对照组基因型分布比较，χ2=0.085，P=0.958;等位基因频率比较，χ2=0.090，P=0.764，OR=1.043，95%CI=0.794～1.370。重度PE与对照组基因型分布比较，χ2=1.495，P=0.474;等位基因频率比较，χ2=0.613，P=0.434，OR=0.932，95%CI=0.781～1.112）。见表2。

2.4早发型、晚发型PE组与对照组基因型分布和等位基因频率的比较

早发型PE组与对照组、晚发型PE组与对照组基因型分布与等位基因频率比较差异亦均无统计学意义（早发型PE与对照组基因型分布比较，χ2=0.956，P=0.620;等位基因频率比较，χ2=0.810，P=0.368，OR=0.912，95%CI=0.746～1.115。晚发型PE与对照组基因型分布比较，χ2=0.701，P=0.704;等位基因频率比较，χ2=0.006，P=0.936，OR=1.008，95%CI=0.820～1.240）。见表2。

3讨论

PE是一种以高血压和蛋白尿为特征的妊娠期特发性疾病，可累及肝、肾、胎盘、神经系统及血液系统等多种脏器和系统，严重危及母婴的生命安全[1]。该病发病机制不明。越来越多的研究表明，炎症反应和氧化应激在PE发生发展中具有重要作用[6-8]。妊娠会使孕妇处于一种普遍的适度的炎症反应状态，而PE病人处于一种过度的炎症反应状态[16]。并且，PE病人血清中的IL-1β、IL-2、IL-6和IFN-γ等炎症因子水平比正常孕妇明显升高[17-19]。氧化应激是指体内氧化系统与抗氧化系统失衡，导致活性氧增多[20-21]，通过一系列病理生理变化参与PE的发生发展[22]。

热休克蛋白（HSP）是热休克反应中转录合成的一组蛋白，可以增强细胞对应激的耐受性，稳定细胞蛋白内环境[23]。迄今为止，HSP有3大家族被广泛研究：低分子量HSP家族、HSP70家族、HSP90家族[24]。其中HSP70是含量最丰富的一类，其保守性和可诱导性最强。HSP70是重要的分子伴侣，对于维持细胞的正常机制是必不可少的，其具有参与蛋白质折叠、介导细胞自我保护、抗细胞凋亡以及调节免疫反应等作用[25-26]。已有研究结果证实，系统性炎症反应和氧化应激状态会诱导HSP70表达升高[9，27]，并且，PE病人的血清、血浆以及胎盘组织中HSP70表达也升高[10]。此外，研究还发现HSP70与高血压及相关疾病的发病机制相关[28]。

人体中编码HSP70家族成员的基因共有3个：HSPA1A、HSPA1B以及HSPA1L，它们均位于6p21.3[29]。其中HSPA1A和HSPA1B编码同一种蛋白热休克诱导性蛋白产物，而HSPA1L编码非热休克诱导性蛋白产物，两种蛋白产物有90%的氨基酸序列相同[30]。研究发现多种基因与PE发病相关，具有遗传易感性，包括Survivin基因、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因、VLeiden因子基因、血管紧张素转换酶（ACE）基因、亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因以及肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因等，这些不同基因的SNP位点多态性影响着PE的发病及遗传易感性[11]。由于HSPA1L编码的蛋白产物HSP70与炎症反应、缺血低氧、氧化应激等参与PE发生发展的重要因素密切相关，HSP70在PE病人的血清、血浆以及胎盘组织中表达也升高，提示HSP70在PE的发生发展中起一定的作用;HSP70与高血压及相关疾病的发病机制相关;PE的发病还与多种基因相关，具有遗传易感性，推测编码HSP70蛋白的基因HSPA1L可能与PE发病有关。本文选取了HSPA1L基因中一个标签性SNP位点rs2227956进行研究，探讨HSPA1L基因rs2227956位点的多态性与PE的遗传易感性是否具有相关性，旨在为PE的临床预测以及治疗提供遗传学依据。

本文研究结果显示，PE组病人和正常对照组HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率差异无显著性。为进一步探讨该位点与PE遗传易感性关系，将PE组孕妇分为轻度、重度PE以及早发型、晚发型PE，并进行分析，结果显示，轻度、重度PE病人与对照组比较以及早发型、晚发型PE病人與对照组比较，HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率差异均无显著性。表明HSPA1Lrs2227956位点的多态性在PE的发生发展中可能并不起关键性作用，尚不能认为该位点的多态性与PE的遗传易感性相关。

本文研究结果可能会受多种因素的影响。首先，研究对象均来自于山东省汉族人群，因此本文研究结果不适用于其他地区、其他人群或人种;其次，由于PE是一种复杂的多基因遗传性疾病，可能会受多种基因、多个位点的共同作用或相互作用的影响;另外，环境因素也可能会影响研究结果。因此，还需要更多地区、更多种族人群、更多基因位点、纳入环境因素影响甚至功能性的研究，来进一步验证本研究的结果，加深对PE发病的认识，以便更好地指导其临床诊断和治疗。

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（本文编辑 黄建乡）