铅胁迫对核桃幼苗抗氧化酶活性及根系活力的影响

李 虹

（贵州省毕节市林业种苗站，贵州 毕节 551700）

核桃属胡桃科胡桃属植物，落叶乔木，核桃对大气干旱忍耐性强，而对土壤湿度较敏感；核桃产量的高低、品质的优劣直接取决于其立地水分供应状况。

毕节市的赫章、威宁等县区由于土法炼锌等落后的生产工艺导致目前任有大量的铅锌矿山迹地，研究铅胁迫对核桃幼苗生长过程中SOD、POD 活性等生理活性指标的影响，有助于进一步揭示核桃生长过程中对重金属的富集机理，为探索经果林树种在矿山迹地植被恢复中的利用提供理论依据，从而加快毕节市核桃产业的发展。

1 材料及方法

1.1 供试材料

本实验供试的核桃幼苗为毕节市种苗站提供的一年生核桃实生苗。

1.2 铅胁迫处理

选用30cm×30cm 的花盆为试验盆，无污染过筛后充分混匀的土壤土作为盆栽基质，每盆装土9kg，盆下垫托盘，将供试核桃幼苗除去根系原土后进行盆栽移植，每盆栽植1株幼苗。移植后将试验盆放于正常通风、光照的地方，并进行常规浇水管理，待苗木恢复生长2 个月后，选取个体健康状况一致的苗木进行铅胁迫处理。

1.3 酶活性分析

随机抽取核桃幼苗叶片0.5g，加入20 倍量(m/V) 50 mmol·L-1pH 为7.0 的磷酸缓冲液，冰浴研磨，迅速研磨成匀浆，10ml 容量瓶定容后分装于1.5ml 的离心管中，4℃下15000r·min-1离心15min，取上清液置于-20℃下保存，用于SOD 和POD 活性测定。

1.3.1 SOD 活性

取酶液0.05 ml 加入2.95 ml 反应液在4 000 lx 日光下反应20 min，在560 nm 下测定光密度SOD 活性单位以抑制NBT 光化还原的50% 为一个酶活性单位[U/g(FW)] 。

1.3.2 POD 活性

参照孙群等方法， 在3ml 的反应体系中， 加入0.3%H2O21ml、0.2% 愈创木酚0.95ml，pH7.0PBS1ml，最后加入0.05ml 酶液启动反应，在470nm 处测定4min 内的光密度的下降，每隔1min读数一次。将每分钟POD 增加0.01 定义为1 个酶活力单位。

1.4 根系活力的测定

根系活力的测定参照李合生等人的方法。

1.4.1 定性测定

先将1% T TC 溶液、0.4mo l/ L 的琥珀酸以及0.1mol/ L 磷酸缓冲液按1 ： 5 ：4 比例混合配制成反应液。再把洗净后从茎基切除地上部分的根放入三角锥瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置于37℃左右的黑暗处3h，观察着色情况，如果新根尖端几毫米处以及细侧根都明显的变成红色，则表明该处有脱氢酶存在。

1.4.2 定量测定

(1) T TC 标准曲线的制作。在10ml 容量瓶中加入0.4% T TC 溶液0.2ml，将少量Na2S2O4粉末加入其中，充分摇匀后立即产生红色的三苯基甲腙，再用乙酸乙酯定容至刻度，充分摇匀之后，再配制浓度分别是25Lg/ ml、50Lg/ ml、100Lg / ml、150Lg / ml、200Lg/ ml 的三苯基甲腙的标准比色系列，即在5 个10ml 的容量瓶中分别加入定容溶液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml，再用乙酸乙酯定容至刻度，得到与此同时以空白作为参比，用分光光度计在波长485nm 下测定其吸光度，并绘制标准曲线。

(2) 在6 个10ml 烧杯中分别加入上述6 个处理的根尖样品各0.5g，再加入5ml 的0.1mol/ L 磷酸缓冲液和5ml 的0.4% TT C 溶液充分混合的混合液，根充分浸没在混合液中，将6 个烧杯放在37℃黑暗处3h，3h后再加入2ml浓度为1mol/ L的硫酸，以终止反应。

(3) 把根依次从烧杯中取出，将根周围的水分吸干后与少量石英砂及3ml 乙酸乙酯一起加入研钵磨碎，得到含有三苯基甲腙的红色提取液。在6 个试管中依次加入红色提取液，并用少量乙酸乙酯将残渣洗涤3 次，将洗涤液移入试管，最后加入乙酸乙酯使试管中溶液的总量为10ml，将分光光度计的波长设为485nm 依次将6 个试管中的溶液放入分光光度计中进行比色，以空白试验作为参照测出其吸光度，查询标准曲线，求出TTC 的还原量。

2 结果与分析

2.1 铅胁迫对核桃幼苗SOD 活性的影响

SOD 存在于绝大多数生物体内，其化学本质是酶，作用是防御氧化损伤 ，是至今为止所发现的唯一一种以O2-为底物的酶，其作用是催化细胞内超氧化物阴离子(O2-) 的歧化反应，使O2-转化为H2O2和O2。

2.2 铅胁迫对核桃幼苗POD 活性的影响

植物体内的POD 有多种功能，它既可清除植物体内的H2O2，同时也具有催化木质化的作用，POD 广泛存在于植物体内不同组织中，作为活性较高的适应性酶，POD 能够反映植物生长发育特点、体内代谢状况以及对外界环境的适应性。

3 讨论

在被污染的土壤中生存的植物，其根系是最直接的受害部位。而根系是否发育完好以及代谢状况如何在一定程度上是通过根系活力反映出来的。经SPSS 数据分析软件进行方差分析后，显示各处理间并无显著差异，由此可知核桃幼苗的根系对土壤铅污染具有较强的耐受力。