非小细胞肺癌患者血清中CD8+T 细胞、CEA 及CA199 水平与肿瘤转移的相关性分析

杨玲

（广东省惠州市第一人民医院检验科，惠州516003）

肺癌是我国也是全世界最常见的恶性肿瘤，也是我国城市人口死亡率最高的恶性肿瘤[1]。 其中非小细胞肺癌是最常见的肺癌，约占80%，病理类型有鳞癌、腺癌及大细胞癌[2]。 非小细胞肺癌具有增殖分裂快，肿瘤转移时间相对较早的特点，且因缺少有效的诊断方法， 大部分患者发现时已处于中晚期，5 年内患者死亡率较高[3]。 因此，探寻诊断非小细胞肺癌肿瘤转移的高效血清标志物， 对于提高患者存活率，改善预后显得尤为重要。 有相关文献指出， 外周血T 淋巴细胞与非小细胞肺癌发生、发展及肿瘤转移过程密切相关，对于免疫功能具有重要的调节作用[4]。 同时有研究显示，癌胚抗原（CEA）、糖类抗原199（CA199）水平在肺癌等恶性肿瘤患者血清中均增高[5]。 本研究旨在探究非小细胞肺癌患者血清中CD8+T 细胞、CEA 及CA199水平与肿瘤转移的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016 年7 月-2019 年3 月于我院医治的非小细胞肺癌患者160 例（实验组）作为研究对象， 另选同期于我院体检的健康人群80例作为对照组，该研究已经医院医学伦理委员会批准。诊断标准：⑴参照《新编常见恶性肿瘤诊治规范（合订本）》中关于肺癌的诊断标准[6]；⑵病理学诊断：肺手术标本经病理、组织学证实行开胸探查，肺穿刺或经纤维支气管镜检查取得肺或支气管活组织，标本经组织学诊断为原发性支气管非小细胞肺癌；颈、锁骨上和腋下等部位淋巴结、胸壁、胸膜或皮下结节等转移灶活组织检查，组织学表现符合原发性支气管非小细胞肺癌，且肺或支气管壁内疑有肺癌存在，临床上又能排除其他器官原发癌；⑶细胞学诊断：痰液、纤维支气管镜毛刷、抽吸、冲洗等获得细胞学标本，镜下所见符合非小细胞肺癌细胞学标准。 纳入标准：抽血检测前未接受肺癌外科手术、放化疗、分子靶向治疗等；临床资料完整；患者均了解本研究并自愿签署知情同意书。 排除标准：合并有其他恶性肿瘤者；心、肝、肾等肿瘤器官严重疾病者；合并急性、慢性感染者；免疫功能障碍、血液系统障碍者； 精神疾病或意识模糊等难以交流者。 实验组男88 例，女72 例，年龄36-78 岁，平均年龄（59.05±8.56）岁，其中病理类型为腺癌67例，鳞癌59 例，其他类型34 例。 对照组男45 例，女35 例，年龄35-76 岁，平均年龄（59.71±9.01）岁。 两组患者的性别、年龄对比，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法 ⑴检测CD8+T 细胞： 抽取所有受试者清早空腹状态下静脉血5ml 于试管中，混匀，置于4℃冰箱中保存备用。 采用emiBioCytoCounter 系列全自动可视化细胞检测仪检测血清CD8+T 细胞比例。⑵检测CEA、CA199：抽取所有受试者清早空腹状态下静脉血5ml 于试管中， 离心（2000r/min）15min，取上清液置于-20℃冰箱中保存备用。 采用罗氏E601 电化学发光免疫分析仪及配套试剂检测血清CEA、CA199 水平，严格参照说明书进行操作。

1.3 观察指标 ⑴对比实验组和对照组患者血清CD8+T 细胞、CEA 及CA199 水平； ⑵对比转移组和未转移组患者临床资料； ⑶非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移的Logistic 回归分析；⑷血清CD8+T细胞、CEA 及CA199 水平诊断非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移的ROC 曲线分析

1.4 统计学方法 采用SPSS21.0 统计学软件处理数据，计量资料用（平均值±标准差）表示，两组计量资料的比较采用t 检验； 计数资料用百分比表示， 计数资料的比较采用卡方检验； 采用Logistic回归分析非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移相关的危险因素； 采用ROC 曲线分析血清CD8+T 细胞、CEA 及CA199 水平对非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移的诊断价值。 P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验组和对照组患者血清CD8+T 细胞、CEA及CA199 水平对比 实验组患者血清CD8+T 细胞、CEA 及CA199 水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。 见表1。

2.2 转移组和未转移组患者临床资料对比 两组患者的性别比列、年龄、吸烟史和病理类型对比，差异无统计学意义 （P>0.05）。 转移组患者血清CD8+T 细胞、CEA 及CA199 水平明显高于未转移组，差异有统计学意义（P<0.05）。 见表2。

表1 两组患者血清CD8+T 细胞、CEA 及CA199 水平对比

表2 转移组和未转移组患者临床资料对比

2.3 非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移的Logistic回归分析 由Logistic 回归分析结果显示，CD8+T细胞升高的OR 值为3.114 （95%CI：2.568-3.624，P<0.001），CEA 升高的OR 值为2.604 （95%CI：2.138-3.163，P<0.001），CA199 升 高 的OR 值 为2.190（95%CI：1.513-2.819，P<0.001）。 CD8+T 细胞、CEA 及CA199 升高均与非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移相关,是非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移的危险因素。

表3 非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移的Logistic 回归分析

2.4 血清CD8+T 细胞、CEA 及CA199 水平诊断非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移的ROC 曲线分析由ROC 曲线分析结果显示， 检测CD8+T 细胞以32.48%为截断值时， 敏感度为72.60%， 特异度为70.11%，准确度为71.25%。 检测CEA 以17.18ng/ml 为截断值时， 敏感度为79.45%， 特异度为68.97%，准确度为73.75%。 检测CA199 以45.61U/ml为截断值时，敏感度为65.75%，特异度为52.87%，准确度为58.75%。 CD8+T 细胞+CEA+CA199 联合检测以31.91%+16.24ng/ml+43.26U/ml 为截断值时，敏感度为93.15%，特异度为94.25%，准确度为93.75%。 CD8+T 细胞+CEA+CA199 联合检测的敏感度、特异度及准确度明显高于CD8+T 细胞、CEA和CA199 单独检测，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

3 讨论

非小细胞肺癌增殖分裂速度快、 转移相对较早，导致患者死亡率较高，严重影响了患者的生存质量[7]。 当前，临床上诊断非小细胞肺癌的金标准仍是病理组织学检查，但该方法具有创伤性、操作繁琐的缺点， 因此寻找非小细胞肺癌的高效诊断方法是临床医生的重点研究方向[8]。 肿瘤标志物是反映肿瘤发生、发展的指标，其高表达通常提示肿瘤的位置或生长， 在肿瘤的诊断及预后方面发挥着重要作用[9]。 有相关文献显示，肿瘤可导致T 细胞亚群发挥抑制免疫应答的作用， 因而T 细胞亚群的水平异常， 可造成机体免疫系统紊乱而发生病情变化[10,11]。 CD8+T 细胞是T 细胞亚群中一个主要的类型，能分化成细胞毒性T 细胞，可以对产生特殊抗原反应的目标细胞进行杀灭， 可杀死机体内的肿瘤细胞[12]。 同时有研究指出，CD8+T 细胞可作用于B 淋巴细胞表面上的受体， 从而抑制了B淋巴细胞与肿瘤抗原的结合， 因此CD8+T 细胞的增高说明免疫功能的减弱[13]。黄柱华等人在非小细胞肺癌患者的肿瘤转移与CD8+T 细胞数量关系的研究中证实， 发生肿瘤转移患者组织中CD8+T 细胞数量明显高于肿瘤未转移患者， 提示CD8+T 细胞数量对于非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移具有指导作用[14]。 本研究结果表明， 实验组患者血清CD8+T 细胞水平明显高于对对照组， 转移组患者血清CD8+T 细胞水平明显高于未转移组， 这与上述言论一致， 提示血清CD8+T 细胞水平可能作为诊断非小细胞肺癌患者肿瘤转移的有效指标。

表4 血清CD8+T 细胞、CEA 及CA199 水平诊断非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移的ROC 曲线分析

近年来， 新的肿瘤标志物被不断报道， 其中CEA、CA199 由于在非小细胞肺癌患者血清中呈高表达水平， 与肿瘤转移密切相关而被临床医生广泛研究[15,16]。汪硕敏等通过研究证实，非小细胞肺癌患者血清CEA、CA199 水平高于健康人群，且与肺癌转移具有相关性[17]。CEA 是一种具有人类胚胎抗原特性的酸性糖蛋白，是一种广谱肿瘤标志物，在恶性肿瘤中其水平明显升高， 但其诊断肿瘤的特异性较低[18,19]。CA199 是一种新型肿瘤标志物，为细胞膜上的糖脂质，在肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤中呈高表达水平[20]。 本研究结果表明，实验组患者血清CEA 及CA199 水平显著高于对照组， 转移组患者血清CEA 及CA199 水平显著高于未转移组，提示血清CEA、CA199 水平可在非小细胞肺癌患者肿瘤转移的诊断中具有重要作用。 由Logistic 回归分析结果显示，CD8+T 细胞升高的OR 值为3.114（95%CI：2.568-3.624，P<0.001），CEA 升 高 的OR值为2.604 （95%CI：2.138-3.163，P<0.001），CA199升高的OR 值为2.190 （95%CI：1.513-2.819，P<0.001）。 提示CD8+T 细胞、CEA 及CA199 升高均与非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移相关， 是非小细胞肺癌患者发生肿瘤转移的危险因素。 应用肿瘤标志物诊断的优势是创伤性、可重复、简便等，切点是特异性较低， 因此可通过联合检测血清肿瘤标志物提高诊断的准确性。 由ROC 曲线分析结果显示， 检测CD8+T 细胞以32.48%为截断值时，敏感度为72.60%， 特异度为70.11%， 准确度为71.25%。 检测CEA 以17.18ng/ml 为截断值时，敏感度为79.45%，特异度为68.97%，准确度为73.75%。检测CA199 以45.61U/ml 为截断值时， 敏感度为65.75%， 特异度为52.87%， 准确度为58.75%。CD8+T 细胞+CEA+CA199 联合检测以31.91%+16.24ng/mL+43.26U/ml 为截断值时， 敏感度为93.15%，特异度为94.25%，准确度为93.75%。 CD8+T细胞+CEA+CA199 联合检测的敏感度、 特异度及准确度明显高于CD8+T 细胞、CEA 和CA199 单独检测， 提示CD8+T 细胞+CEA+CA199 联合检测可有效提高诊断的准确性。

综上所述， 血清CD8+T 细胞、CEA 及CA199水平与非小细胞肺癌患者肿瘤转移具有相关性，三者水平升高可能预示着肿瘤发生转移。 血清CD8+T 细胞、CEA 及CA199 水平均是诊断非小细胞肺癌患者肿瘤转移的有效指标，且CD8+T 细胞+CEA+CA199 联合检测可有效提高非小细胞肺癌患者肿瘤转移诊断的准确性。