一起规模化蛋鸡场非典型性新城疫的综合诊断与防治

吕奇鹏，杨孝朴

（甘肃农业大学，甘肃 兰州 730070）

1 材料

1.1 发病鸡场

青海省大通县某规模化蛋鸡场共有鸡舍8栋，其中1号、2号鸡舍为育成鸡舍，3号至8号为产蛋鸡舍，采用5层阶梯式笼养，自动上料、饮水，人工捡蛋，每栋产蛋鸡舍存栏产蛋鸡10 000 只。2018年6月2日下午5点，3号鸡舍饲养员反应，该栋鸡舍的鸡群采食量明显减少，约为 650 kg，产蛋率也由前段时间的 82.7% 下降为 60.2%，死亡鸡 12 只，其余鸡舍均正常。

1.2 样品采集

采集病死鸡的脾、肺、肝脏和肠管等病变组织样品10份，编号为A1-A10。其中A1、A2为脾脏的病变组织，A3、A4为肺脏的病变组织，A5、A6为肝脏的病变组织，A7、A8为肾脏的病变组织，A9、A10为肠管的病变组织。

采集3号鸡舍发病鸡泄殖腔试子样品5份，编号为B1-B5。

采集3号鸡舍发病鸡新鲜粪便样品5份，编号为B6-B10。

1.3 主要仪器

超净工作台、立式压力蒸汽灭菌锅、电子分析天平、电子恒温箱、移液枪、96孔微型反应板、生物显微镜、数显恒温水浴锅、切片机、展片机、烘片机等。

1.4 主要试剂

SPF鸡胚和SPF雏鸡；新城疫标准阳性血清、新城疫抗原；禽流感H5、H7、H9抗原；制作切片和染色常用的试剂；配置pH7.2 PBS、鸡红细胞悬液（1%）、固定液、抗原液和青链霉素液等。

2 方法

2.1 临床诊断

2.1.1 临床症状观察 分为群体观察和个体观察。群体观察主要观察鸡群的精神状态、采食量和饮水量，粪便颜色和形态，产蛋量，并听鸡群的呼吸声。个体观察主要观察精神、呼吸系统和粪便。

2.1.2 流行病学调查 主要询问了该养殖场的新城疫的免疫情况，近几年新城疫发病情况，并了解本地区其他养鸡场新城疫的发病状况。

2.2 病理诊断

2.2.1 病理解剖 对死亡的鸡进行解剖，主要观察消化系统、呼吸系统、生殖系统以及心血管系统的病理变化。

2.2.2 病理组织学观察 分别从具有典型剖解变化的病死鸡内脏切取适当大小的肺（A3）、肝（A6）、肾（A7）和肠管（A10）组织块，经固定、脱水、透明、浸蜡和包埋处理后切片，采用 HE 染色，光学显微镜下 400 倍观察组织变化，并拍照。同时取正常健康鸡相同部位组织块，同法制作组织切片，进行对照观察[1]。

2.3 病原学诊断

2.3.1 病毒培养 按操作流程进行样品处理，鸡胚接种及病毒收获。收集36～96 h内死亡的鸡胚和活胚尿囊液。

2.3.2 病毒鉴定及毒力测定 某些病毒能够与鸡的红细胞发生凝集现象，即红细胞凝集试验（HA）；这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即血凝抑制试验（HI），可以通过标准血清对分离的病毒进行鉴定[2]。另外进行鸡胚最小致死量平均死亡时间（MDT）的测定[3]和脑内致病指数（ICPI）的测定[4]。利用MDT将新城疫病毒株分为强毒力型、中等毒力型、温和型三种：强毒力型的 MDT≤60 h，中等毒力型的MDT 在61～90 h；温和型的MDT＞90 h。每只鸡8 d内观察数值的平均数即为ICPI，最强毒力病毒的ICPC接近最大值2.0，温和型毒株的ICPC值接近于0。

2.4 防治

2.4.1 药物干预 对于发病的3号鸡舍，采用先药物干预再紧急免疫接种的处置方法。由于疫情发现及时，虽然产蛋率和采食量明显下降，但死亡率并未明显增高，为减少鸡场的损失，针对实际情况，对发病的3号鸡舍采取先用药物干预，再用疫苗紧急接种。药物干预方法为：（1）清瘟败毒散拌料：每1 kg清瘟败毒散拌料250 kg，连续饲喂 3 d；（2）饮水中加入毒抗（主要成分为黄芪多糖）：每100 g毒抗兑水250 kg，连用3 d。

2.4.2 紧急预防 未发病的其他鸡舍先用鸡新城疫Ⅳ系弱毒疫苗4倍量饮水免疫接种，24 h 后再用药物预防。药物及用法为：按1 kg清瘟败毒散拌料500 kg，100 g毒抗兑水500 kg，连用3 d。 发病鸡舍（3号鸡舍）先用2.4.1方法处治后，停药1 d，再用鸡新城疫Ⅳ系弱毒疫苗4倍量饮水免疫接种，24 h内的死亡率小于 0.05% 时，再用药物进行预防。药物及用法同上。

3 结果

3.1 临床诊断

3.1.1 临床症状 经群体检查发现，3号鸡舍内鸡群整体精神萎靡，垂头缩颈，眼半闭，张嘴呼吸，能听到“咯咯”的喘鸣声，个别鸡只站立不稳，头颈向一侧扭转，粪便稀薄，呈黄绿色或黄白色，有的鸡只可以见到蛋清样的粪便。将鸡倒提时有大量酸臭的液体从口内流出。

3.1.2 流行学调查 通过询问了解到该养鸡场近三年来发生过 4 次类似疾病，其中有 2 次被诊断为新城疫；周边3个规模养鸡场近年来也发生过 2次新城疫疫情。总之，根据病鸡临床症状和该鸡场近三年疫病发生情况及周边鸡场存在散发新城疫的实际，初步怀疑为鸡新城疫。

3.2 病理诊断

3.2.1 剖检病理变化 对死亡的蛋鸡进行解剖，发现病变主要集中在消化系统、呼吸系统、生殖系统以及心血管系统。消化系统主要表现为腺胃肿胀，乳头出血，肌胃角质膜下出血，肠道淋巴滤泡有枣核状的出血，盲肠扁桃体严重肿胀、出血和坏死，泄殖腔积气积液。呼吸系统可见气管内有大量黏液，并伴有出血。生殖系统主要表现为卵泡变形，卵黄变稀，卵黄囊严重充血，其中3只鸡的卵黄破裂，形成卵黄性腹膜炎，输卵管病变不明显。另外，心外膜及冠状脂肪上可见针尖大小的点状出血。

3.2.2 病理组织学变化 肾脏，肾小管上皮细胞发生不同程度的变性，上皮细胞脱落至肾小管管腔，导致部分肾小管组织结构不清，管腔发生不同程度的堵塞。肺脏，肺泡壁毛细血管发生充血，肺泡壁增厚，少量肺泡上皮细胞脱落，散落在肺泡腔中。同时，部分肺泡腔中有少量的红细胞。肝脏，肝脏组织机构不清，中央静脉有血液成分，肝索紊乱，窦状隙变窄，肝细胞发生空泡样变性和坏死，肝细胞核消失，少量炎性细胞浸润。肠道黏膜充血，肠上皮细胞有不同程度变性、脱落，肠管变薄，少量炎性细胞。综上所述，根据临床症状和病理变化，再结合流行病学调查，初步诊断为一起疑似非典型性鸡新城疫病例。

3.3 病原学诊断

3.3.1 病毒分离培养 鸡胚在接种样品后40～90 h，全部死亡，鸡胚尿囊液清亮，头部严重出血。对收集的尿囊液进行细菌检测，无细菌。

3.3.2 血凝试验（HA） 对采集的20份样品进行血凝试验，均可以凝集1%的鸡红细胞，血凝效价分别为25～28，病死鸡组织样品的血凝效价总体高于发病鸡舍活鸡泄殖腔试子和粪便样品的血凝效价。

3.3.3 血凝抑制试验（HI） 根据血凝试验结果制备4HUA病毒液，用新城疫标准阳性血清和禽流感H5、H7、H9标准阳性血清分别对这20份样品进行血凝抑制试验。20份样品都能被新城疫标准阳性血清抑制，不能被禽流感H5、H7、H9标准阳性血清抑制。

3.3.4 鸡新城疫病毒毒力测定结果 对确定的20份新城疫病毒样品进行MDT和ICPI检测。MDT检测结果均在61～96 h，ICPI检测结果均在0.4～1.1。参照新城疫病毒毒力强弱的判定标准， 20份新城疫病毒有17份属于中等毒力，3份属于温和型。通过分离病毒和进行血凝试验（HA）及血凝抑制试验（HI），确诊为一起非典型性鸡新城疫。

3.4 非典型新城疫的防治

发病鸡舍采取相关措施后采食量逐天增加，产蛋率逐天上升。通过药物干预，病鸡的精神状况和粪便颜色也基本恢复正常。停药1 d后，紧急接种新城疫Ⅳ系疫苗，疫苗接种后第三天，鸡死亡2只，采食量达到1 250 kg，产蛋率达到 84.6%。未发病鸡舍采取先紧急接种Ⅳ系疫苗，24 h后药物预防，未发现新的新城疫疫情。

4 讨论

对于近年来常发生的非典型性新城疫如何快速的诊断，根据不同的发病情况采取及时合理的治疗措施是当前基层一线兽医必须掌握的基本技能；新城疫的预防仅靠疫苗免疫不够，必须要采取更加综合的防控措施控制新城疫的发生，减少损失；发生非典型性新城疫时，关键要平衡风险，采取紧急免疫措施，并及时进行药物预防，还应注意防止细菌性疾病的继发感染。