中山地区6 822例儿童急性呼吸道感染7种常见呼吸道病毒检出情况分析

黄 军，杨海霞，童辉纯

南方医科大学附属中山市博爱医院检验科，广东中山 528403

急性呼吸道感染(ARTI)是导致不同年龄段儿童死亡的主要因素之一，绝大部分2岁以下的儿童都经历过呼吸道感染，1/4的儿童都曾有反复或持续的呼吸道感染[1-2]。儿童ARTI对全球公共卫生是一个极大的挑战。随着抗菌药物的广泛使用，细菌性感染有所下降，病毒成为儿童尤其是婴幼儿ARTI的常见病原体。呼吸道合胞病毒(RSV)，腺病毒(ADV)，A、B型流感病毒(Flu A,Flu B)，副流感病毒(PIV)是比较常见的病毒类型。大量研究表明，各种ARTI病毒的检出率与患儿年龄、检测季节、气候条件等因素有关[3-6]。为了解中山地区 2017年3月至2018年2月儿童ARTI病原体情况，笔者收集了6 822例患儿鼻咽深部分泌物标本，对常见的7种呼吸道病毒进行检测和分析，为临床对疾病的诊治及疾控部门对疾病的防控提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 以2017年3月至2018年2月在南方医科大学附属中山市博爱医院因ARTI住院的儿童为研究对象，出院时未诊断为ARTI的病例要剔除。ARTI的诊断标准参照诸福棠《实用儿科学》第7版[7]。符合入选标准的因ARTI住院的儿童病例共6 822例，其中男4 162例，女2 660例，男女比例为1.56∶1，年龄为1 d到14岁。患儿中呼吸道感染2 558例，肺炎或支气管肺炎3 242例，支气管炎1 004例，哮喘18例。

1.2方法 标本采集由专业人员完成，在患儿入院的当天或次日早晨用植绒拭子采集鼻咽部脱落细胞，方法是将植绒拭子插入鼻咽部，来回旋转2～3次，迅速抽出拭子，放入含1～2 mL生理盐水的试管中，要求在24 h内送检标本，如果不能及时检测，应放置于4 ℃冰箱。D3UltraTMDFA直接荧光检测呼吸道病毒试剂盒由美国Diagnostic Hybrids公司提供，批号为119553。该试剂盒采用直接免疫荧光法对7种呼吸道病毒进行检测。将浸在生理盐水内的鼻咽拭子标本剧烈漩涡震荡10～15 s，(400～600)×g离心5～10 min，加入1×PBS漩涡震荡并(400～600)×g离心5～10 min，弃去上清液，加入0.5～1.0 mL的1×PBS，并反复吹吸悬浮细胞层。每孔加入25 μL标本悬浮液，风干后加入冷丙酮固定5～10 min。加入鼠球蛋白荧光试剂，标本片放入孵箱，37 ℃孵育15～30 min，浸入洗涤液反复清洗，再用去离子水冲洗。将多余的液体吸干，在固定有细胞的每孔加入一滴封固液，然后盖上盖玻片。在激发光490 nm，发射峰520 nm参数下，使用日本奥林巴斯荧光显微镜观察已染色并封固的标本玻片。当显微镜放大倍数为200倍时，在视野中找到≥2个带绿色荧光的阳性细胞，则判定标本为阳性。

1.3统计学处理 采用SPSS20.0进行统计分析，计数资料以率(%)表示，组间比较使用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1不同呼吸道病毒的构成比 6 822例患儿标本中，共有1 664例检测出病毒阳性，阳性检出率为24.39%。在7种呼吸道病毒中，RSV感染病例为1 034例，在7种病毒中占的比例最高，为62.14%，其次为Flu A[222例(13.34%)]和PIV3[127例(7.63%)]，ADV 125例(7.51%)，Flu B 121例(7.27%)，PIV1 25例(1.50%)，其中有1例为混合感染，PIV2在全年的感染病例只有11例(0.66%)，是最少引起ARTI的病原体。

2.2不同季节患儿ARTI病毒的检出情况 春、夏、秋、冬四季患儿ARTI病毒阳性总数和阳性率分别为536例(21.33%)、523例(32.24%)、316例(23.07%)、289例(21.94%)。病毒阳性例数最多在春、夏两季，构成比为63.64%；病毒阳性检出率最高在夏季，为32.34%。在春、夏、秋季中，RSV为主要病原体，RSV阳性例数和检出率分别为382例(15.20%)、305例(18.80%)、260例(18.98%)。冬季主要流行的是Flu B，阳性例数有115例，检出率为8.73%。除了PIV1和PIV2，其他几种呼吸道病毒在4个季节的检出率差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.3不同年龄组患儿ARTI病毒的检出情况 本研究把6 822例患儿分为4个年龄组，发现在1岁以下年龄组中，呼吸道病毒感染的病例最多，有895例，阳性检出率也是最高，达到30.17%，远高于其他几个年龄组的检出率。随着年龄增加，感染的病例逐渐减少，阳性检出率也逐渐降低。1岁以下组和1～3岁组患儿以RSV感染为主，4～6岁组与7～14岁组均以Flu A、Flu B感染为主。各年龄组间总阳性检出率比较差异有统计学意义(χ2=104.08，P<0.001)，除了PIV1和PIV2两种病毒，其余5种病毒阳性检出率在不同年龄组间差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.4不同性别患儿ARTI病毒的检出情况 在6 822例患儿中，病毒检测阳性的男性患儿1 037例(24.92%)，女性患儿627例(23.57%)。男性患儿Flu B阳性检出率高于女性患儿(P<0.05)。然而，男、女性患儿的病毒总阳性检出率差异无统计学意义(χ2=1.59，P>0.05)。见表3。

表1 不同季节常见的7种呼吸道病毒检出情况比较[n(%)]

注：春季3-5月，夏季6-8月，秋季9-11月，冬季12-2月。

表2 不同年龄组患儿呼吸道病毒阳性检出情况比较[n(%)]

2.5不同种类的ARTI疾病中病毒病原谱比较 在6 822例ARTI患儿中，疾病种类包括肺炎、支气管肺炎、支气管炎、毛细支气管炎、上呼吸道感染、哮喘。阳性例数最多的临床诊断是肺炎、支气管肺炎，有1 022例阳性病例，阳性检出率为31.52%；其次为支气管炎、毛细支气管炎，阳性检出率为23.51%。哮喘患者的检出例数和阳性检出率均最低。每种疾病的病毒感染谱有相同点，但也各有特点。RSV阳性检出率在各种疾病诊断中均最高。在肺炎、支气管肺炎中阳性检出率居第2位的是Flu A，在支气管炎、毛细支气管炎患者中阳性检出率居第2位的是PIV3，而在上呼吸道感染患者中阳性检出率居第2位的则是ADV。总病毒阳性检出率在各疾病中差异有统计学意义(χ2=194.92，P<0.001)。除了PIV1和PIV2外，其他5种病毒的阳性检出率在不同疾病组间差异均有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表3 不同性别患儿呼吸道病毒阳性检出情况比较[n(%)]

表4 不同种类的ARTI疾病中病毒病原谱比较[n(%)]

续表4 不同种类的ARTI疾病中病毒病原谱比较[n(%)]

3 讨 论

ARTI是儿童期的常见感染性疾病，80%的ARTI是由病毒感染引起[8]。虽然目前已知呼吸道病毒有10余种，240多个血清型，但根据以往大量的文献报道，检出率较高的仍然是常见的7种呼吸道病毒。

在本研究中，RSV的检出率最高，与江西、上海等大部分地区的研究结果一致[9-11]。RSV在不同地域和气候条件下都是主要的儿童ARTI病原体，这和成人的ARTI病原谱特征不同[12]。但刘英茹等[13]报道西安地区婴幼儿ARTI主要病原体是Flu，地区间的病毒流行差异可能与气候特点以及病毒株的变异有关。Flu阳性检出率排第2位，以Flu A为主，与以前的研究一致[14-15]，但也有别于国内一些地区的监测结果[16-19]。PIV1、PIV2的阳性检出率均明显低于其他5种呼吸道病毒，提示PIV1和PIV2不是引起儿童ARTI的重要病原体，因此在诊疗ARTI时可以优先考虑其他5种病毒，这与以前的报道一致[20]。

呼吸道病毒感染具有明显的季节性，以春、夏季多见。而有研究显示广东中山地区[21]和江西地区[9]的呼吸道病毒流行特点为冬春季高发流行。RSV感染与季节明显相关。中山地区属于亚热带气候，春、夏季时间长，雨量大，温度、湿度高，容易发生RSV感染。冬季主要流行的是Flu B，与该病毒的冬、春季节高发特点一致。

各年龄组的病毒检测率各有差异，以3岁以下患儿为主，1岁以下患儿检出率最高[22-24]，其阳性检出率明显高于3岁以上的患儿。随着年龄增长，ARTI病毒阳性检出率逐渐降低。低龄儿童较容易感染呼吸道病毒与其较低的免疫功能有关，1岁以下患儿自身免疫功能发育还没完善，唯有从母乳中获取少量的免疫球蛋白，因此不能很好地抵御外界病原体的侵袭。因此，3岁以下儿童应该成为呼吸道病毒感染防控的重点人群。

在本研究中，男、女性患儿的总病毒阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。李梨平等[25]报道长沙地区Flu A在男女性患儿中阳性检出率差异有统计学意义(P<0.05)，女性比男性更容易感染Flu A。在本研究中，男性患儿Flu B的阳性检出率比女性高(P<0.05)，而Flu A则在不同性别中差异无统计学意义(P>0.05)。此区别可能是由于Flu较易产生变异所引起，还可能与男女免疫力差异有关。

在6 822例ARTI患儿中，阳性例数最多的疾病种类是肺炎、支气管肺炎，哮喘患儿的检出例数和阳性检出率均最低。不同疾病有不同的病原谱特征，如在肺炎、支气管肺炎中，主要以RSV和Flu A感染为主，支气管炎、毛细支气管炎的患儿主要以RSV和PIV3感染为主，而上呼吸道感染患儿则以RSV和Flu感染为主，这为临床诊治ARTI提供了借鉴依据。

综上所述，中山地区2017年3月至2018年2月儿童ARTI的主要病毒病原体为RSV，其次为Flu。病毒感染高发期主要在春、夏季；呼吸道病毒感染主要集中在3岁以下患儿，其中1岁以下患儿感染率最高；肺炎、支气管肺炎中病毒阳性率最高；RSV所致疾病以肺炎、支气管肺炎为主，Flu以上呼吸道感染、肺炎为主。病毒流行的季节、年龄、疾病分布等特点为临床诊治提供了线索，也为中山地区ARTI的防控工作提供了参考依据。