不孕症患者FFA、AMH水平变化及相关性研究△

肖建群 李高杰 陈 薇 彭定辉 胡汉宁

(1.武汉大学中南医院消化科 武汉 430071；2.武汉大学中南医院检验科 武汉 430071)

近年来，世界各国不孕症患病率均持续上升，其中女性不孕原因多与排卵功能障碍、输卵管组织结构畸形或异常改变、子宫内膜异位、不明原因的不孕、免疫学不孕等因素有关。以往不孕症更多关注的是血清黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E2)、孕酮(Prog)、睾酮(Testo)、催乳素(PRL)、黄体酮(P)等激素水平的检测，但这些激素水平的检测与月经周期密切相关，故干扰分析的因素多。随着观察卵巢功能的标志物抗苗勒管激素(AMH)检测项目的常规化，研究者对卵巢功能的变化而引起的不孕症有了更进一步的研究。脂代谢研究中FFA是近年来关注的重点，以往对FFA的研究人们更多关注的重点在心、脑、肾等血管性疾病或代谢紊乱性疾病，然而动物实验研究中显示FFA对卵母细胞具有直接的不利影响[1～3]。据此，本课题通过检测女性不孕症患者血清中AMH等激素水平，以及FFA等血脂指标水平，研究FFA水平与AMH等女性激素水平的关联性，探讨FFA对人体生殖功能的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选择2017年11月～2019年5月在武汉大学中南医院生殖中心就诊的、已被确诊为不孕症女性患者56例作为病例组，年龄20～40岁，平均(30.4±3.81)岁。选择同期孕前检查为健康者，并且通过筛选，一月左右确定为正常妊娠者45例作为对照组，年龄22～35岁，平均(28.6±5.11)岁。入选标准：(1)为夫妻在一年里未采取任何避孕措施，性生活正常而没有成功妊娠者女性；(2)年龄18～40岁。排除标准：近 3 个月内有雌激素、孕激素、口服避孕药等药物史；有多囊卵巢综合征、甲状腺功能亢进、甲状腺机能减退或乳腺疾病等内分泌疾病史；恶性肿瘤、自身免疫系统疾病、卵巢手术史、男性不育因素、由于遗传因素导致的不育疾病等。

1.2 材料与试剂

FFA(批号60099845)试剂由日本积水株式会社提供； LDL-C(批号：814RBN)、HDL-C(批号：818RCN)、hs-CRP(批号：16-0302)试剂均由日本积水化学工业株式会社提供；TC(批号：AUZ3692)、TG(批号：AUZ3483)试剂均由日本奥林巴斯公司提供；AMH(批号：00155984)由德国罗氏公司提供。

1.3 仪器与设备

上述检测指标分别在美国贝克曼库尔特-AU5400全自动生化分析仪，德国罗氏Cobas 601化学发光分析仪上检测。

1.4 方法

1.4.1血标本采集方法

所有研究对象均空腹12h后采集静脉血3ml，1h内分离血清。

1.4.2各指标检测方法

酶法测定血清FFA；直接测定法检测血清LDL-C、HDL-C；氧化酶法测定血清TC；酶法测定血清TG；电化学发光法测定血清AMH。各项操作严格按照作业指导书执行，各指标均受控于室内质量控制确定结果的重复性，国家和湖北省卫计委临检中心室间质量评价确定结果的准确性。

1.4.3不孕症患者分组方法

以35岁为节点，分为≤35岁为适龄不孕症组共30例，>35岁高龄不孕症组共26例。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 各组受试者FFA、AMH等指标水平的比较分析

高龄不孕症组AMH水平低于适龄不孕症组和对照组(P<0.05)，差异具有统计学意义；适龄不孕症组和对照组之间AMH水平差异无统计学意义(P>0.05)；高龄不孕症组和适龄不孕症组FFA水平均高于对照组(P<0.05)，差异有统计学意义；高龄不孕症组与适龄不孕症组之间FFA水平差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 各组受试者FFA、AMH等指标水平的比较分析

注：T1：适龄不孕组与正常组；T2：高龄不孕组与正常组；T3：适龄不孕组与高龄不孕组。

2.2 不孕症患者FFA与激素和血脂相关指标进行相关性分析

不孕症患者的FFA水平与TC、TG、HDL-C、LDL-C、AMH均无相关性，P>0.05，见表2。

表2 不孕症患者AMH水平与各指标水平的相关性分析

3 讨论

卵巢的反应性和储备功能正常与否，以及卵巢隐性损伤的存在直接影响着正常妊娠。AMH是一种二聚体类糖蛋白，是组织生长因子β超家族成员[4～5]，其主要来源于卵巢窦前卵泡颗粒细胞和小窦状卵泡颗粒细胞，是卵巢反应性和储备性功能的主要标志物之一[6]。AMH能够间接反映生长卵泡数量和原始卵泡库存量的变化，通过影响卵泡对卵泡刺激激素的反应性而影响卵泡的选择[7]。卵巢中小卵泡数目越多，血清中AMH值越高，反之，若卵巢中小卵泡数目越少，血清中AMH值就越低。本研究结果显示，不孕症患者血清AMH水平均低于对照组(P<0.05)。根据年龄分组结果显示，高龄不孕症组血清AMH水平低于适龄不孕症组(P<0.05)，由于血清AMH水平对卵母细胞的成熟及分化过程具有细微的调控作用，由此表明随年龄增长卵巢功能的调控作用逐渐在衰减，所以低水平的AMH直接或间接地影响生殖过程中调控环节，卵巢功能衰减或受损，最终导致不孕症的发生。然而适龄人群发生不孕症组，同样也出现AMH低水平均低于对照组(P<0.05)，表明女性年龄不能成为评价卵巢储备功能的绝对指标，也就是说实际年龄并不等于卵巢生物年龄，卵巢储备功能不足或下降，是发生不孕症的客观原因之一。

脂代谢重要的指标之一FFA是中性脂肪的分解产物，正常人群血浆中FFA的水平含量极少，然而过量的FFA则对机体有着很强的细胞毒性作用。FFA对膜类物质具有较强的亲和力，从而通过损伤细胞膜、线粒体膜和溶酶体膜等膜类物质，继而引起细胞内微小器官的损害，所以在许多疾病的病理生理中起重要作用[8～9]。动物研究提示[10～11]，牛卵泡中主要的FFA是棕榈酸，硬脂酸和油酸，升高的卵泡棕榈酸和硬脂酸与卵母细胞成熟和受精率有关，并且影响胚胎的质量，表明FFA对卵母细胞具有直接的不利影响，过量的棕榈酸会诱导人和牛颗粒细胞凋亡。在本次不孕不育患者研究结果中发现，不孕症患者存在不同程度的血脂代谢异常或紊乱，特别是FFA水平均高于正常对照组，且随年龄增长，血清FFA水平越高(P<0.05)，由于FFA对机体细胞毒性作用的特性，反映出FFA对人卵母细胞同样存在有毒性作用的可能性，从而影响了女性的生殖生育能力。在AMH与FFA等血脂指标相关分析的研究中显示不孕症患者血清FFA等血脂指标与AMH间均无相关性(P>0.05)，表明血清FFA水平变化与卵巢功能激素的分泌不存在关联性，但血清中高水平的FFA对人卵母细胞膜的毒性作用间接地影响卵巢的功能，导致AMH分泌减低的可能性是存在的。

综上所述，不育不孕症是多因素导致的结果，血清FFA水平持续增高对不孕不育的发生、发展不容忽视，在不育不孕症的发生中发挥独立影响作用，其机制有待进一步证实和研究。