抗核抗体及抗核抗体谱与反复体外受精-胚胎移植失败的相关性分析

陆碧玉 黄诚 黄李霜 伍萍芝 蒙瞻瞻 严提珍( 通讯作者)

（柳州市妇幼保健院<柳州市生殖与遗传研究所；广西科技大学附属妇产医院、儿童医院> 广西 柳州 545001）

反复种植失败（repeated/recurrent implantation failure，RIF）即指不孕症患者经历多个体外受精-胚胎（in vitro fertilization，IVF）/卵细胞浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）周期并移植了多枚优质胚胎而未发生胚胎种植或临床妊娠[1]。El-Toukhy 等[2]等将反复种植失败（repeated implantation failure，RIF）定义为≥2 次或3 次胚胎移植周期的失败，或累积移植＞10 个优质胚胎仍未成功。IVF/ICSI 助孕治疗中 RIF 的发生率可达5%～10%[3]。自身免疫性疾病已被证明与特发性不育、卵巢早衰、子宫内膜异位和多囊卵巢综合征等疾病有关，并且会影响生育的各个阶段，包括卵巢和睾丸衰竭到着床失败和妊娠丢失[4]。本文旨在阐明抗核抗体及抗核抗体谱和RIF 的相关性。

1.资料和方法

1.1 一般资料

选取2017 年7 月—2019 年12 月来我院就诊的200 例进行IVF 和/或ICSI 移植手术后，两次或更多次植入都失败的患者作为研究组，本方案经伦理学委员会批准，患者及家属知情同意并签署知情同意书。纳入标准：排除了双方染色体异常，女方子宫形态异常、自身免疫性疾病，研究组年龄22 岁到48 岁。同期100 例IVF/ICSI 手术后妊娠成功孕妇作为对照组，对照组年龄23 岁到42 岁，成功标准为：移植后B 超确定为临床妊娠；持续妊娠＞13W。检测两组患者的血清抗核抗体（ANA）和抗核抗体谱（ANAs）。

1.2 试剂和检测方法

流式荧光免疫法所用试剂由美国宙斯科技公司提供，仪器为美国Luminex 200。该试剂盒可检测抗核抗体（ANA）和9 项抗核抗体谱（ANAs），包括SSA、SSB、Sm、RNP、Scl 70、Jo 1、Cent B、Histone、dsDNA。严格参照试剂说明书操作，以测定值≥100U/ml 判为阳性。

1.3 观察指标

观察研究组和对照组的血清抗核抗体和抗核抗体谱阳性例数和阳性率。

1.4 统计学方法

采用SPSS19.0 统计学软件对数据进行统计分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05 表示差异具有统计学意义，用百分率表示研究组和对照组抗核抗体谱检测分布情况。

2.结果

2.1 研究组不同种植失败次数的病例数分布情况

种植失败2 次有122 例，种植失败3 次有51 例，种植失败4 次有24 例，种植失败5 次有2 次，种植失败5 次以上有1 例。

2.2 两组ANA 和ANAs 检测结果比较

研究组和对照组ANA 与ANAs 阳性例数和阳性率比较，研究组共检出ANA 阳性41 例，阳性率为20.5%；对照组检出阳性数为6 例，阳性率为6%；研究组检出ANAs 阳性22 例，阳性率为11.0%，对照组检出阳性2 例，阳性率为2.0%。两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组ANA 与ANAs 阳性数和阳性率分布情况[n（%）]

2.3 ANAs 检测分布情况

ANAs 共检测了7 项，研究组7 项均有阳性例数，总ANAs 检出阳性数为22 例，阳性率为11%。对照组中仅RNP 这一项有阳性例数，ANAs 的阳性检出率为2%，两组比较差异有统计学意义（χ2=7.34，P＜0.05）。见表2。

表2 研究组和对照组抗核抗体谱检测分布情况[n（%）]

3.讨论

ANA 又称抗核酸抗原抗体，是一系列抗细胞核抗原自身抗体的总称，能与动物细胞核发生反应，主要存在于血清中。它们被定义为与细胞核内某些结构结合的分子，包括DNA、RNA、蛋白质或其复合物。抗核抗体谱（ANAs）是具有结合和破坏细胞核内某些结构的能力的特定类型的自身抗体[5]。本文中RIF 实验组中ANA 和ANAs 阳性率分别为20.5%和6%，明显大于对照组的阳性率11%和2%。而近几年来，RIF 和ANA/ANAs 的研究中， Motak-Pochrzest H 等[6]的研究中，与对照组的血清ANA 阳性率（10.5%）相比，研究组中的ANA 阳性率高达43.1%，该研究显示ANA 是复发植入失败患者血清中最常检测到的自身抗体。 Birkenfeld A 等[7]认为ANA 阳性患者植入失败的主要原因可能与卵母细胞和胚胎受损有关。李颖等[8]的研究中ANA 在首次体外受精-胚胎移植的不孕患者中的阳性率为35.18%，但此研究未区分病例是否为反复种植失败患者。本文的反复种植失败患者中的ANA 阳性率（20.5%），比之前的几项研究中的阳性率要偏低。存在差异这可能是与研究对象的不同及不同地区、民族人群中存在区别，以及检测方法的差别有关。但这些研究都提示ANA 与种植失败有着密切的关系，引起IVF-ET 患者种植后更坏的结局。

ANA 与ANAs 的阳性检出率存在有差异（20.5%和11%），主要因为抗核抗体谱的型别众多，本次只检测ANAs 中的7 种，当出现ANA 阳性而ANAs 非阳性时，可能是本实验室未检测到的其它种类的ANAs。其中检出最高的ANAs 为抗RNP，阳性率为3%（6/200），而Sm、Histone 未见检出阳性病例。而在对照组中检测到的抗核抗体谱均为抗RNP。研究组中未检出抗核抗体谱中的抗Sm、Histone 的可能原因：①病例数不够，可以继续加大病例数继续研究，观察是否会出现这两类抗核抗体谱阳性病例；②在反复种植失败患者中此两类抗核抗体谱确实无阳性，无研究价值，可以不用在反复种植失败病例中检测这两项抗核抗体谱。目前对于ANAs 对于体外受精-胚胎移植影响的研究罕见，Fan J等[9]研究中提示抗dsDNA 与体外受精-胚胎移植结局有关，导致反复种植失败。ANAs 具体检测种类的确定需要首先研究哪种型别的抗核抗体谱与外受精-胚胎移植有关，进而确定在反复种植失败患者中检测何种ANAs，以便探讨ANAs 对IVF-ET 结局的影响机制。

本文采用多重微球流式荧光免疫技术对ANA 及ANAs 进行检测，此方法能半定量或定量检测特异性自身抗体，尚晓莹等[10]研究表明流式荧光免疫法的诊断灵敏度虽然低于免疫印迹法与间接免疫荧光法，但特异度高于后两者，而间接免疫荧光法法检测ANA 的灵敏度高于其余两方法。运用流式荧光免疫法检测ANA及ANAs 特异度更高，且其自动化程度高，检测速度快，能帮助评估反复种植失败患者的病情变化、监测治疗效果，指导临床合理用药，因此可以用多重微球流式荧光免疫法替代免疫印迹法来检测ANA 及ANAs。