连钱草正丁醇部位化学成分研究

熊晓丽，吴西，袁铭铭，钟瑞建*

1.江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，南昌 330029；2.江西中医药大学，南昌 330004

连钱草为唇形科多年生草本植物活血丹Glechoma longituba(Nakai) Kupr 的地上部分［1］。具有利湿通淋，清热解毒，散瘀消肿之功效，用于黄疸型肝炎、胆囊炎、胆石症、肾结石、膀胱结实、跌打损伤、腹痛等症［2］。研究表明其具有利尿利胆、调血脂、溶石、降血糖、抗炎、抗菌、抗癌等作用［3-5］。为更好利用连钱草药用资源，本论文对连钱草进行较为系统的化学成分研究。采用各种色谱技术从连钱草醇提物的正丁醇部位分离鉴定了6 个化物，分别为：①丁香脂素-O-β-D-葡萄糖苷；②芹菜素-7-O-β-D-芹糖（1→2）-β-D-葡萄糖苷；③Shimobashiric acid C；④（+）-异落叶松脂素9′-O-β-葡萄糖苷；⑤（7S，8R）dehydrodiconiferyl alcohol 9 ′-β-glucopyranoside；⑥3-（3,4-dihydroxyphenyl）-acrylic acid 1-（3,4-dihydroxyphenyl）-2-methox-ycarbonylethyl ester。

1 仪器与材料

Varian UNITY INOVA 600 超导核磁共振仪（美国Varian 公司）；Micromass ZabSpec 质谱仪（美国Micromass 公司）；Agilent1260 型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；Büchi 中压液相制备色谱仪（瑞士步琦公司）；岛津20-AR 型半制备液相色谱仪；C18 反相填料为资生堂产品；EYELA SB-1000 旋转蒸发仪（日本EYELA 公司）；数显恒温水浴锅（常州亿通分析仪器制造有限公司）。水为超纯水，氘代试剂CD3OD、C5D5N 和DMSO-d6 为美国剑桥公司CIL 生产；色谱级试剂为Sigma 公司生产；分析级试剂为国药集团化学试剂有限公司生产；D101 大孔树脂、柱层析硅胶（100～200 目）和薄层层析硅胶均为青岛海洋化工厂生产。

连钱草药材由江西南昌济生制药厂提供，经江西省药品检验检测研究院周国平主任中药师鉴定为唇形科植物活血丹Glechoma longituba（Nakai）Kupr 的全草。标本保存在江西省药品检验检测研究院中药室标本馆。

2 提取与分离

连钱草全草（25 kg），粉碎后用75%乙醇回流提取2 次，每次2 h，提取液合并减压浓缩后得到无醇干浸膏8 kg。然后加20 倍水溶解成混悬液，用等体积的二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取三次，分别减压浓缩至干浸膏，得到正丁醇部分。取正丁醇部分405 g，加水适量溶解，过经处理的D101型大孔树脂，依次用水、10%、30%、50%、70%、95%乙醇溶液梯度洗脱，除水部分外，其余部分洗脱液分别减压浓缩至干浸膏，称重得10%乙醇部分21.86 g，30%乙醇部分57.00 g，50%乙醇部分58.21 g，70%乙醇部分16.08 g，95%乙醇部位19.36 g。

10%乙醇部分以C18 粉末拌样过C18 柱，以甲醇-水（10∶90～40∶60）梯度洗脱，经高效液相色谱检测后，合并为15 个部分（Fr1-1～Fr1-15）。Fr1-5（1.26 g）过Sephadex LH-20 凝胶柱（纯甲醇洗脱），经薄层色谱检视，合并相近的组分，得Fr1-5-1～Fr1-5-2。Fr1-5-1（54 mg）经反相高效制备液相色谱，以乙腈-0.1%三氟乙酸（16∶84）为流动相，得到化合物1（9 mg）。Fr1-5-2（43 mg）经反相高效制备液相色谱，以乙腈-0.2%三氟乙酸（17∶83）为流动相，得到化合物2（8 mg）。Fr1-6（1.1 g）经硅胶柱层析（100～200 目），以二氯甲烷-甲醇（40∶1～10∶1）为洗脱剂梯度洗脱，得馏分Fr1-6-1～Fr1-6-5，Fr1-6-1（89 mg）经Sephadex LH-20 凝胶柱纯化（纯甲醇洗脱），经薄层色谱检视，合并相近的组分，得Fr1-6-1-1～Fr1-6-1-2。Fr1-6-1-2（43 mg）经反相高效制备液相色谱，以乙腈-0.01%三氟乙酸（17∶83）为流动相，得到化合物3（13 mg）。

30%乙醇部分经硅胶柱层析（100～200 目），以二氯甲烷-甲醇（20∶1，15∶1，10∶1，7∶1，5∶1，3∶1，1∶1）为洗脱剂梯度洗脱，经薄层色谱检视，合并相近的组分，得馏分Fr2-1～Fr2-9。Fr2-6（24.0 g）经C18 粉末拌样过C18 柱，以甲醇-水（10:90～50∶50）梯度洗脱，经薄层色谱检视后，合并为8 个部分Fr2-6-1～Fr2-6-8。组分Fr2-6-1（1.2 g）经重结晶后，溶解部分（980 mg）经Sephadex LH-20凝胶柱纯化（纯甲醇洗脱），经薄层色谱检视，合并相近的组分得Fr2-6-1-1～Fr2-6-1-3，组分Fr2-6-1-1（45 mg）经反相高效制备液相色谱，以甲醇-水（23∶77）为流动相，得到化合物4（11 mg）。组分Fr2-6-1-2（120 mg）经反相高效制备液相色谱，以甲醇-水（27∶73）为流动相，得到化合物5（21 mg）。组分Fr2-6-2（1.4 g）经反相高效制备液相色谱，以乙腈-0.01%三氟乙酸（23∶77）为流动相，得到化合物6（40 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色无定形粉末，溶于甲醇。ESI-MS（m/z）：579［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，C5D5N）δ：7.00（2H，s，H-2，6），6.97（2H，s，H-2′，6′），5.00（2H，s，H-7，7′），4.42-4.36（4H，m，H-9，9′），4.08（2H，ddd，J=9.0，7.7，4.4 Hz，H-6″），3.86（6H，s，H-3′，5′），3.82（6H，s，H-3，5），4.00-3.91（4H，m，H-2″，H-5″），3.31-3.21（2H，m，H-8，8′）；13C-NMR（151 MHz，C5D5N）δ：136.0（C-1），105.5（C-2），154.4（C-3），138.9（C-4），154.4（C-5），105.5（C-6），87.1（C-7），55.3（C-8），72.6（C-9），132.6（C-1′），105.3（C-2′），149.8（C-3′）.137.9（C-4′），149.8（C-5′），105.3（C-6′），86.8（C-7′），55.5（C-8′），72.8（C-9′），105.3（C-1″），76.5（C-2″），78.9（C-3″），72.1（C-4″），79.3（C-5″），63.1（C-6″），57.2（3-OCH3），57.0（3′-OCH3）。以上数据与文献［6］报道的数据基本一致，故鉴定该化合物为丁香脂素-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物2：黄色无定形粉末，易溶于DMSO。ESI-MS（m/z）:563［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：12.97（1H，s，5-OH），10.47（1H，s，4′-OH），7.95（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.3 Hz，H-3′，5′），6.87（1H，s，H-3），6.81（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），6.42（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），5.33（1H，d，J=1.2 Hz，H-1'''），5.18（1H，s，H-1″），3.91（1H，d，J=9.4 Hz，H-4b'''），3.72（1H，br d，J=5.2 Hz，H-2'''），3.71（1H，dd，J=10.4，5.6 Hz，H-6b″），3.66（1H，d，J=9.3 Hz，H-4a'''），3.51（1H，m，H-2″），3.49（1H，m，H-3″），3.46（1H，m，H-5″），3.44（1H，m，H-6a″），3.29（2H，s，H-5'''），3.19（1H，m，H-4″）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：164.7（C-2），103.6（C-3），182.5（C-4），161.9（C-5），99.8（C-6），163.1（C-7），95.3（C-8），157.4（C-9），105.8（C-10），121.5（C-1′），129.1（C-2′，6′），161.6（C-4′），116.5（C-3′，5′），98.5（C-1″），76.1（C-2″），76.5（C-3″），70.2（C-4″），77.5（C-5″），61.0（C-6″），109.2（C-1'''），77.3（C-2'''），79.8（C-3'''），74.5（C-4'''），64.7（C-5'''）。以上数据与文献［7］报道的数据基本一致，故鉴定该化合物芹菜素-7-O-β-D-芹糖（1 →2）-β-D-葡萄糖苷，又名芹菜苷。

化合物3：白色无定形粉末，溶于甲醇。ESIMS（m/z）:719［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.78（1H，d，J=2.2 Hz，H-2'''），6.71（1H，d，J=8.1 Hz，H-5″），6.68（1H，d，J=6.0 Hz，H-2′），6.67（1H，d，J=8.0 Hz，H-5'''），6.66（1H，s，H-5），6.65（1H，d，J=2.2 Hz，H-2″），6.63（1H，d，J=2.0 Hz，H-5′），6.62（1H，d，J=4.0 Hz，H-2），6.54（1H，dd，J=8.1，2.1 Hz，H-6″），6.48（1H，m，H-6'''），6.45（1H，dd，J=8.1，2.1 Hz，H-6），6.33（1H，dd，J=8.2，2.2 Hz，H-6′），4.71（1H，dd，J=7.7，5.0 Hz，H-8″），4.57（1H，t，J=5.9 Hz，H-8），4.20（2H，ddd，J=11.1，6.0，4.1 Hz，H-7′，H-7'''），3.91（1H，dd，J=10.7，7.4 Hz，H-8′），3.74（1H，dd，J=10.4，6.5 Hz，H-8'''），2.87（1H，dd，J=14.1，5.0 Hz，Ha-7″），2.81（1H，dd，J=14.1，7.7 Hz，Hb-7″），2.71（1H，dd，J=14.1，6.3 Hz，Ha-7），2.60（1H，dd，J=14.1，5.7 Hz，Hb-7）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：128.9（C-1），120.5（C-2），146.2b（C-3），145.5a（C-4），116.4（C-5），122.2（C-6），37.5（C-7），74.9（C-8），172.7（C-9），131.5（C-1′），116.5（C-2′），146.0b（C-3′），145.3a（C-4′），116.5c（C-5′），117.5c（C-6′），42.1（C-7′），47.9（C-8′），173.4（C-9′），128.6（C-1″），119.4（C-2″），146.1b（C-3″），146.2a（C-4″），116.4c（C-5″），122.2（C-6″），37.9（C-7″），75.0（C-8″），173.4（C-9″），131.7（C-1'''），115.5（C-2'''），145.9b（C-3'''），145.2 a（C-4'''），116.4（C-5'''），117.8（C-6'''），42.8（C-7'''），49.6（C-8'''），172.7（C-9'''）。以上数据与文献［8］报道的数据基本一致，故鉴定该化合物为Shimobashiric acid C。

化合物4：灰色无定形粉末，溶于甲醇。ESIMS（m/z）:521［M-H］-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.81（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.76（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′），6.70-6.63（2H，m，H-6，H-6′），6.19（（1H，s，H-3），4.13（1H，d，J=7.8 Hz，Glc-H-1），4.09（1H，m，H-7′），4.07（1H，d，J=2.7 Hz，Hb-9′），3.84（1H，m，Glc-Hb-6），3.82（3H，s，6-OCH3），3.81（3H，s，3′-OCH3），3.79（1H，dd，J=10.9，3.7 Hz，Hb-9），3.74（1H，dd，J=11.0，6.0 Hz，Ha-9），3.66（1H，dd，J=11.9，5.7 Hz，Glc-Ha-6），3.36（1H，t，J=9.0 Hz，，Glc-H-3），3.29（1H，t，J=9.3 Hz，，Glc-H-4），3.25（1H，m，Ha-9′），3.21（2H，tt，J=7.3，2.4 Hz，Glc-H-2，H-5），2.90-2.79（2H，m，Hb-7，Ha-7），2.14-2.06（1H，m，H-8），1.87（1H，tt，J=10.5，3.0 Hz，H-8′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：129.1（C-1），134.4（C-2），117.4（C-3），145.8（C-4），147.1（C-5），112.4（C-6），33.9（C-7），39.5（C-8），65.2（C-9），138.7（C-1′），114.3（C-2′），148.8（C-3′），145.1（C-4′，116.1（C-5′），123.1（C-6′），47.9（C-7′），45.9（C-8′），69.4（C-9′），105.2（Glc-C-1），75.2（Glc-C-2），78.1（Glc-C-3），71.6（Glc-C-4），77.8（Glc-C-5），62.8（Glc-C-6），56.4（5-OCH3），56.4（3′-OCH3）。以上数据与文献［9］报道的数据基本一致，故鉴定该化合物为(+)-异落叶松脂素 9′-O-β-葡萄糖苷。

化合物5：黄色无定形粉末，溶于甲醇。ESIMS（m/z）:523［M+Na］+。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.97（1H，s，H-6′），6.95（1H，s，H-2′），6.94（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），6.81（1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，H-6），6.76（1H，d，J=8.2 Hz，H-5），6.61（1H，dd，J=15.9，1.5 Hz，H-7′），6.22（1H，ddd，J=15.9，6.8，5.9 Hz，H-8′），5.52（1H，d，J=6.3 Hz，H-7），4.49（1H，ddd，J=12.5，5.8，1.5 Hz，H-9a′），4.36（1H，d，J=7.8 Hz，glc-1），4.30（1H，ddd，J=12.5，6.8，1.4 Hz，H-9b′），3.88（1H，m，glc-6a），3.86，3.80（each 3H，s，4，4′-OCH3），3.83（1H，dd，J=5.4，11.1Hz，H-9a），3.77（1H，dd，J=11.0，7.0 Hz，H-9b），3.67（1H，dd，J=5.4，11.9 Hz，glc-6b），3.48（1H，q，J=6.2 Hz，H-8），3.35（1H，t，J=8.6 Hz，glc-3），3.30-3.24（2H，m，glc-4，glc-5），3.22（1H，dd，J=9.2，7.8 Hz，glc-2）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：134.4（C-1），110.6（C-2），149.0（C-3），147.6（C-4），116.0（C-5），119.7（C-6），89.3（C-7），56.7（C-8），64.8（C-9），132.4（C-1′），112.0（C-2′），145.5（C-3′），149.3（C-4′），130.3（C-5′），116.6（C-6′），134.3（C-7′），124.2（C-8′），70.9（C-9′），103.1（Glc-C-1），75.2（Glc-C-2），78.0（Glc-C-3），71.7（Glc-C-4），78.1（Glc-C-5），62.8（Glc-C-6），55.1（3-OCH3），56.3（3′-OCH3）。以上数据与文献［10］报道的数据基本一致，故鉴定该化合物为（7S，8R) dehydrodiconiferyl alcohol 9′-β-glucopyranoside。

化合物6：淡黄色无定形粉末，溶于甲醇。ESI-MS（m/z）:375.1［M+H］+。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.54（1H，d，J=15.9 Hz，H -3），7.04（1H，d，J=2.1 Hz，H-2′′′），6.94（1H，dd，J =8.2 Hz，2.1 Hz，H-6'''），6.77（1H，d，J=8.1 Hz，H-5′′′），6.70（1H，d，J=2.1 Hz，H-2″），6.69（1H，d，J =8.0 Hz，H-5″），6.56（1H，dd，J=8.0，2.1 Hz，H-6″），6.25（1H，d，J =15.9 Hz，H-2），5.18（1H，dd，J=7.7 Hz，5.1 Hz，H-1′），3.69（3H，s，OCH3-1′），3.08-2.97（2H，m，H-2′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：168.3（C-1），114.1（C-2），147.9（C-3），74.6（C-1 ′），37.9（C-2 ′），172.2（C-3 ′），128.7（C-1″），117.5（C-2″），146.2（C-3″），145.3（C-4″），116.3（C-5″），121.8（C-6″），127.5（C-1′′′），115.2（C-2′′′），146.8（C-3′′′），149.7（C-4′′′），116.5（C-5′′′），123.2（C-6′′′），52.6（OMe-1′）。以 上数据与文献［11］报道的数据基本一致，故鉴定该化合物为3-（3，4-dihydroxyphenyl）-acrylic acid 1-（3,4-dihydroxyphenyl）-2-methoxycarbonylethyl ester。