基于大生产考察烫制对骨碎补中柚皮苷含量的影响*

马 杰，丁 野，罗 艳，李瑞莲，王湘波△

（1．湖南省药品检验研究院，湖南 长沙 410001； 2．湖南省药品质量评价工程技术中心，湖南 长沙 410001）

烫骨碎补是骨碎补的炮制品，由水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortunei（Kunze）J．Sm．的干燥根茎经净制或切制后照烫法用砂烫至鼓起，再撞去毛而得。其功效为疗伤止痛、补肾强骨，筋骨折伤、肾虚腰痛、筋骨痿软、耳鸣耳聋、牙齿松动；外用消风祛斑，用于跌扑闪挫，外治斑秃、白癜风［1］。现代药理学研究表明，骨碎补功效作用的有效物质基础主要为总黄酮［2-3］。经砂烫后，骨碎补质地酥脆，有利于有效成分的提取［4］。柚皮苷作为骨碎补中总黄酮的代表性成分，文献对其含量受烫制的影响程度报道不一，如有研究认为炮制后其柚皮苷含量变化不大［5］，但也有研究表明砂烫后柚皮苷含量降低［6］。以上研究对骨碎补的炮制均在实验室中完成，但目前市售烫骨碎补饮片由中药饮片生产企业生产，在炮制过程中设备、规模及工艺参数均与实验室存在差异。为全面、客观地考察烫制对骨碎补中柚皮苷含量变化的影响，本研究中开展了2个方面的研究：一是与中药饮片生产企业合作，实地参与骨碎补的砂烫炮制，考察不同温度、炮制时长对柚皮苷含量的影响；二是收集不同中药饮片生产企业的多批次骨碎补药材及相对应的烫骨碎补饮片产品中柚皮苷的数据。现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：Waters e2695型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Mettler AE-200型电子天平（万分之一），Mettler CP-225D型电子天平（十万分之一），德国梅特勒公司；DK-98-Ⅱ型电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；CY-700型滚筒式燃油炒药机（杭州市富阳方正制药设备厂）；CTDC900型电磁炒药机。

试药：柚皮苷对照品（含量测定用，批号为110722-201714，纯度为93．4%）由中国食品药品检定研究院提供；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。

样品：从不同饮片生产企业收集10批骨碎补药材（序号为Y1～Y10）和其对应生产的批烫骨碎补饮片，以及现场炮制骨碎补药材2批（序号为Y11～Y12），所有样品均经湖南省药品检验研究院主任药师丁野鉴定为水龙骨科植物槲蕨的干燥根Drynaria fortunei（Kunze）J．Sm．。样品信息详见表1。

表1 骨碎补药材样品及对应烫骨碎补信息表

2 方法与结果

2．1 样品炮制

在炒药筒内加入河砂（粒径5～8 mm）及少量植物油，加热并开启滚筒，待温度升至设定值后，取骨碎补药材适量加至滚筒中翻炒，并随时观察骨碎补形态，当全部骨碎补炒至鼓起后，出料，筛去河砂后摊凉，再撞去毛，即得。电磁炒药机设置加热温度为280℃，约6 min可炒好；燃油炒药机设置加热温度为300℃，约2 min可炒好。

为考察烫制时长的影响，电磁式加热炒药机于加料后的1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12 min时分别取部分样品待测；燃油式加热炒药机于加料后的0．5，1．0，1．5，2．0，2．5，3．0，3．5，4．0，4．5，5．0，5．5，6．0，7．0 min时分别取部分样品待测。

为考察烫制温度的影响，取同一批骨碎补药材（批号为20190202，产地为贵州施秉），分别在电磁式加热炒药机设置加热温度为140，200，240，280，320，360℃下砂烫，以炒至全部鼓起为准，出料，筛去河砂后摊凉，再撞去毛，即得。

2．2 溶液制备

供试品溶液［7-9］：取本品粗粉约0．25 g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇30 mL，加热回流3 h，放冷，滤过，滤液置50 mL容量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：称取柚皮苷对照品23．83 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液（445．144 4μg／mL）。精密吸取对照品贮备液，加甲醇依次稀释成质量浓度为89．028 8，17．805 7，3．561 1，0．712 2μg／mL的对照品溶液。

2．3 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Capcell Pak C18柱（250 mm×4．6 mm，5μm）；流动相：甲醇-2%冰醋酸水溶液（35∶65）；流速：1．0 mL／min；检测波长：283 nm；柱温：30℃。理论板数按柚皮苷计不低于3 000。

图1 高效液相色谱图

2．4 方法学考察

线性关系考察：吸取质量浓度为445．144 4，89．028 8，17．805 7，3．561 1，0．712 2μg／mL的对照品溶液5μL或10μL，注入液相色谱仪，测定，以进样量为（X，ng）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得回归方程Y＝1 862．3X＋7 156．3，r＝0．999 9。结果表明，柚皮苷进样量在3．561 2～2 226 ng范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取同一烫骨碎补（批号为180603）供试品溶液，连续进样6次，每次5μL，记录色谱峰面积。结果的RSD为0．59%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一烫骨碎补（批号为180603）供试品溶液，分别于配制后的0，3，6，12，24 h时精密吸取5μL，注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。结果的RSD为0．61%（n＝5），表明供试品溶液在配制后24 h内稳定。

重复性试验：取同一烫骨碎补样品（批号为180603），依法平行制备6份供试品溶液，测定含量。结果为7．91 mg／g，RSD为0．78%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已测定含量的同一烫骨碎补（批号为180603，含柚皮苷7．913 mg／g）供试品约0．125 g共9份，精密称定，置锥形瓶中，按80%，100%，120%的水平精密加入质量浓度为476．6μg／mL的柚皮苷对照品溶液适量，依法制备供试品溶液，测定并计算。结果见表2。

2．5 样品含量测定

取各批样品粉碎，按2．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件，测定柚皮苷峰面积积分值，按外标法计算柚皮苷的百分含量（按干燥品计）。结果见表3、表4和图2。

表3 烫骨碎补与骨碎补药材柚皮苷含量变化（%）

表4 烫制温度对柚皮苷含量的影响

3 讨论

图2 烫制时长对柚皮苷含量的影响

电磁式炒药机和燃油式炒药机的加热方式不同，电磁式更易把握加热速率和控制加热时间，不会在很短时间内将样品炒焦。但二者对柚皮苷含量的影响相似，随着炮制时间的增加，柚皮苷的含量逐渐降低。使用电磁式炒药机烫制，6 min即可炒至全鼓起，柚皮苷含量降至炒前的69．6%，12 min后样品被炒焦，柚皮苷含量逐渐降至最低。使用燃油式炒药机烫制，2 min即可炒至全鼓起，柚皮苷含量降至炒前的80．4%，7 min便将样品炒焦，柚皮苷含量逐渐降至最低。

不同烫制温度对烫制后骨碎补的含量影响结果表明，不同烫制温度对柚皮苷含量水平的影响程度不同，电磁炒药机设置为240℃、燃油炒药机设置为220℃可使柚皮苷损失最少，2家生产企业设置的加热温度和时间并未让柚皮苷含量得到最大程度的保留。

扣除水分的影响，以干燥品计，收集的10批次烫骨碎补与烫制前相比，柚皮苷含量明显升高的有4批，明显降低的有2批，未见明显变化的有4批，变化率范围从20．29%～151．98%，不同批次间的含量变化情况迥异，与本试验中考察的柚皮苷含量均降低的结果不吻合。一方面不同生产企业烫骨碎补柚皮苷的变化率差异较大，可能由于中药饮片生产企业之间不同的砂烫工艺参数对柚皮苷的含量造成了不同程度的影响；另一方面，部分生产企业的柚皮苷含量变化趋势也存在较大差异，表明在生产企业烫制时工艺参数不稳定。因此，有必要继续扩大生产企业、炮制方法等考察范围，以更加全面、准确、客观地评价柚皮苷的含量变化规律。

在烫制骨碎补时，使用的是现代化的加热设备，烫制温度可设定为固定数值，而烫制时长即烫制终点仍需操作人员凭经验时刻观察骨碎补的鼓起情况来判断。在实际考察中发现，骨碎补药材的规格均一性对烫制时长有较大影响：药材大小、粗细越接近，所有骨碎补药材均烫至鼓起的时间越相当，烫制时长就相对较固定；药材大小、粗细差异较大，则在烫制时，细小和粗大的鼓起时间差异较大，造成当粗大的烫至鼓起时，细小的已错过了最佳出料时间，从而降低了柚皮苷的含量。因此，建议在生产烫骨碎补时，使用大小、粗细等规格较接近或经均匀切制后的骨碎补药材作为原料。

为研究骨碎补毛（鳞片）的保留情况对柚皮苷含量的影响程度，试验还考察了烫制前后骨碎补毛（鳞片）中柚皮苷的含量，结果表明，骨碎补毛（鳞片）中柚皮苷含量为根茎主体的10%左右，烫制后柚皮苷略有上升。因其质量占比较低，故骨碎补毛的保留程度对骨碎补砂烫后造成的影响可忽略不计。