陈美安,林春花,张欣影
(广西中医药大学,广西 南宁 530001)
兰香草为马鞭草科莸属植物兰香草[Caryopterisincana(Thunb.)Miq.]的全草或带根全草,别名婆绒花、石母草、段菊等[1],在我国主要分布于广西、广东、江苏、安徽、浙江、福建、江西、湖北、湖南等地[2],具有疏风解表,祛寒除湿,散瘀止痛等功效,可用于治疗风寒感冒、百日咳、慢性支气管炎、肝炎、胃肠炎、皮肤瘙痒、胃痛、腹痛、跌打肿痛、风湿痹痛、外伤出血、产后淤血及疮疖痛肿等,在民间一般作为草药使用[3-4]。现代药理研究表明,兰香草具有抗菌、止血、镇咳、祛痰等作用[4-6]。目前国内外针对兰香草的相关研究甚少,而其化学成分也鲜有报道。中药化学成分的系统预实验即是采用定性实验及薄层层析等方法,对中药中各类化学成分进行比较全面的检查,然后进行综合分析,以初步判断含有的化学成分类型。因此,本文对兰香草的化学成分进行系统预实验,以明确其可能含有的化学成分,为兰香草活性成分的深入研究奠定基础,并为兰香草的开发利用提供理论依据。
兰香草,采自广西宜州,经广西中医药大学药用植物教研室的朱意麟实验师鉴定为马鞭草科莸属植物兰香草Caryopterisincana(Thunb.) Miq.的干燥全草,阴干,粉碎成粗粉,备用。
95%乙醇(分析纯),成都市科隆化学品有限公司;石油醚(分析纯,60~90 ℃),成都市科隆化学品有限公司;其余试剂,包括茚三酮试剂、双缩脲试剂、Molisch试剂、Fehling试剂、氯化钠明胶试剂、1% FeCl3试剂、溴甲酚绿试剂、盐酸-镁粉试剂、三氯化铝试剂、乙酸镁试剂、异羟肟酸铁试剂、耦合试剂、3,5-二硝基苯甲酸实验、亚硝酰基铁氰化钠试剂、碱性苦味酸试剂、碘化铋钾试剂、硅钨酸试剂、碘化汞钾试剂等均为自制。
AJ150电子分析天平,瑞士梅特勒;HWS-24型电热恒温水浴锅,上海齐欣科学仪器有限公司;UV_1780型紫外分光光度计,岛津(苏州)有限公司;优普纯水仪,四川优普超纯科技有限公司。
2.1.1 水提取液的制备
取兰香草药材粗粉10 g,置于具塞三角锥型瓶中,加水100 mL,冷浸24 h,滤过,取10 mL滤液为冷水提取液,做氨基酸、多肽、蛋白质的检查。剩余药渣在60 ℃水浴锅上加热 0.5 h,过滤,得热水提取液,做糖、多糖、苷类、皂苷、鞣质、有机酸等检查。
2.1.2 乙醇提取液的制备
取兰香草药材粗粉10 g,加95%乙醇100 mL,加热回流 1 h,过滤,滤液分成两份,一份作为乙醇提取液,做黄酮、蒽醌、酚、香豆素、内酯、萜类、强心苷、甾体等检查;另一份将乙醇液浓缩至无醇味,加5% HCl溶解,过滤,得酸水溶液,做生物碱检查。
2.1.3 石油醚提取液的制备
取兰香草药材粗粉1 g,置于具塞三角锥形瓶中,加石油醚10 mL,冷浸3 h,过滤,滤液即为石油醚提取液,做油脂、挥发油检查。
采用化学反应鉴别法对兰香草药材进行化学成分预试,结果如表1~表2所示,兰香草中可能含有氨基酸、糖、多糖、苷类、皂苷、鞣质、有机酸、黄酮类、蒽醌类、酚类、香豆素类、甾体类、三萜类、生物碱、挥发油等化学成分。
2.2.1 兰香草水提取液预实验结果
表1 水提取液预实验结果
注:“ + ”示有此反应;“ -”示无此反应。
2.2.2 兰香草乙醇提取液预实验结果
表2 乙醇提取液预实验结果
续表2
香豆素与内酯异羟肟酸铁实验紫红色+偶合反应紫色+荧光实验无荧光-强心苷3,5-二硝基苯甲酸实验无明显颜色变化-亚硝酰铁氰化钠试液无明显颜色变化-碱性苦味酸实验无明显颜色变化-甾体或三萜类醋酐-浓硫酸实验产生黄→红→紫→蓝→绿→污绿等颜色变化,最后褪色+氯仿-浓硫酸实验氯仿层呈青色,浓硫酸层显绿色荧光+生物碱碘化汞钾试剂淡黄绿色沉淀+碘化铋钾试剂淡黄绿色沉淀+硅钨酸试剂淡黄绿色沉淀+
注:“ + ”示有此反应; “ -”示无此反应。
2.2.3 兰香草石油醚提取液预实验结果
油斑实验:将样品石油醚提取液滴在滤纸上,滤纸上有油斑,此油斑加热后消失,提示样品可能含有挥发油。
中草药中所含有的化学成分是相当复杂的,本文通过系统性化学成分预实验,初步确定了兰香草药材中可能含有氨基酸、糖、多糖、苷类、皂苷、鞣质、有机酸、黄酮类、蒽醌类、酚类、香豆素类、甾体类、三萜类、生物碱、挥发油等多种化学成分,为兰香草进一步活性成分的提取、分离、纯化以及药理活性研究提供实验依据。
本实验方法简便、可行,结果可靠。在操作过程中,① 为了减少实验的误差,每个鉴别实验均平行做3份,以确保结果的准确;② 检测时,样品溶液的浓度应达到各反应的灵敏度;③ 水提取液和乙醇提取液颜色较深,有些反应现象不明显,影响到判断效果,这时可以考虑适当稀释,或者进一步提纯;④ 某些鉴别反应是几种不同类型的化学成分所共有的反应,又有些结果由于各化学成分之间可能会产生相互干扰使得结果不够明显甚至不正确,这时最好同时做空白实验。