不同粒度表虚感冒颗粒中肉桂酸的鉴别及含量测定

曲艳国，韩晓妮，林丽峰，邵 平，李题宝，王云秀

(本溪国家中成药工程技术研究中心有限公司，辽宁 本溪 117004)

表虚感冒颗粒为辽宁华润本溪三药有限公司的独家产品。表虚感冒颗粒处方为《伤寒论》桂枝汤加葛根、苦杏仁组成。主治风寒表虚类感冒，具有散风解肌、和营退热之功效。表虚感冒颗粒标准已收载于《中国药典》2015年版一部，标准中含有肉桂酸的鉴别方法，方法规定了颗粒的重量、溶剂、提取方式等内容，但在颗粒的处理上只提到了研细，但研细的粒度没有规定，研细的程度只能凭个人的主观理解去操作。因药品检验过程的研细(或粉碎)程度对某些药品的检验存在影响[1，2]，为此本研究拟探讨不同研细粒度对表虚感冒颗粒肉桂酸鉴别项测定的影响，为完善表虚感冒颗粒肉桂酸的鉴别操作方法提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪(Agilent安捷伦)；2号筛、3号筛、4号筛、5号筛、6号筛、7号筛、8号筛(南京东迈科技仪有限公司)；QUINTIX224-1CN万分之一电子天平(塞多利斯)，XP56十万分之一电子天平(梅特勒-托利多)；Visualizer薄层成像系统(瑞士卡玛公司)。

1.2 试药

表虚感冒颗粒(本溪国家中成药工程技术研究中心有限公司，自制，批号2018110101)；肉桂酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号为110786-201604)；乙醚(上海沃凯生物技术有限公司，批号20180621)；无水硫酸钠(天津市大茂化学试剂厂，批号20150914)；无水乙醇(天津市大茂化学试剂厂，批号20180601)；正己烷(天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号20171114)；冰醋酸(天津市大茂化学试剂厂，批号20170606)；GF254薄层板(烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂，批号20161007)；纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司，批号201801124114sf)。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别方法与结果

2.1.1 鉴别方法 按照《中国药典》2015年版一部第1 026页“表虚感冒颗粒标准”中的肉桂酸鉴别方法[3]，取表虚感冒颗粒研磨后的不同粒度粉末15 g，加乙醚50 mL，冷浸12 h，滤过，滤液用无水硫酸钠1 g脱水，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取肉桂酸对照品，加无水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液15 μL、对照品溶液10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙醚-冰醋酸(5∶5∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。

2.1.2 对照品溶液的制备 取肉桂酸对照品，加无水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 薄层鉴别用供试品溶液的制备 将7种规格的筛子(2号筛至8号筛)按目数顺序叠在一起，取表虚感冒颗粒用研钵研碎，边研边过筛，直到每一筛子有相当量的细粉。24目粉指通过2号筛而不能过3号筛的细粉，50目粉指通过3号筛而不能过4号筛的细粉，其他目数的粉按此类推。分别取每个筛子的药材粉末约15 g，加乙醚50 mL，冷浸12 h，滤过，滤液用无水硫酸钠1g脱水，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.1.4 供试品的薄层鉴别 分别取“2.1.2”项对照品溶液、“2.1.3”项供试品溶液，按“2.1.1”项下方法，进行薄层鉴别。肉桂酸鉴别情况，见图1。

2.2 含量测定方法与结果

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 按照《中国药典》2015年版一部“桂枝茯苓丸”项下的肉桂酸含量色谱条件[4]，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液(30∶70)为流动相；检测波长为285 nm。理论板数按肉桂酸峰计算应不低于2 000。

注：①24目粉末；②50目粉末；③65目粉末；④80目粉末；⑤肉桂酸对照品；⑥100目粉末；⑦120目粉末；⑧150目粉末

图1 不同研细粒度的肉桂酸薄层图谱

2.2.2 对照品溶液的制备 称取肉桂酸对照品20 mg，精密称定，置200 mL 容量瓶中，加乙醇充分溶解后，定容至刻度，精密量取5 mL，置100 mL 容量瓶中，用乙醇溶解并定量稀释制成每1 mL 中含5 μg 的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 将“2.1.3”项下的薄层鉴别用供试品溶液作为含量测定用供试品溶液。

2.2.4 阴性样品供试品溶液的制备 按处方制备缺桂枝的阴性样品，阴性样品研细至100目粉末后，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，作为含量测定用阴性样品供试品溶液。

2.2.5 肉桂酸含量测定 分别取“2.2.2”项下对照品溶液、“2.2.3”项下供试品溶液、“2.2.4”项下阴性供试品溶液，按“2.2.1”项下方法，进行肉桂酸含量测定。肉桂酸对照品、不同目数粉末供试品溶液和100目粉末阴性供试品溶液的HPLC，见图2。肉桂酸含量数据，见表1。

注：A.肉桂酸对照品；B.24目粉末供试品溶液；C.50目粉末供试品溶液；D.65目粉末供试品溶液；E.80目粉末供试品溶液；F.100目粉末供试品溶液；G.120目粉末供试品溶液；K.150目粉末供试品溶液；L.100目粉末阴性供试品溶液

图2 肉桂酸对照品、不同目数粉末供试品溶液和阴性样品供试品溶液的HPLC

表1 不同研细粒度的肉桂酸薄层供试品溶液肉桂酸含量

3 讨论

实验数据表明，7种不同研细程度的表虚感冒颗粒粉末的肉桂酸鉴别结果差异较大，其中24目粉末、50目粉末和65目粉末的肉桂酸鉴别的斑点特别浅，极易被判断为鉴别项不合格，而80目、100目、120目和150目粉末的肉桂酸鉴别，在对照品相应位置上可见到相同颜色的斑点；7种不同研细程度的表虚感冒颗粒粉末的肉桂酸供试品溶液的肉桂酸含量差异较大，其100目粉末的肉桂酸供试品溶液的肉桂酸含量是24目粉末肉桂酸供试品溶液的肉桂酸含量的5倍，不同粉末的供试品溶液的肉桂酸含量差异明显。在药典“凡例”中细粉指能全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95%的粉末。因此，根据本研究结果，建议在表虚感冒颗粒肉桂酸鉴别时，设定表虚感冒颗粒肉桂酸鉴别过程的颗粒研细的粒度至“细粉”以上，确保在不同的实验室及不同的分析人员等影响因素下，始终能准确地进行表虚感冒颗粒肉桂酸薄层项的检测。