预培养对常见感染菌血培养阳性报警时间的影响

张立群

（辽宁省抚顺市矿务局总医院检验科，辽宁 抚顺 113008）

细菌感染侵袭血液系统是临床常见的一种重症感染，患者病情重，常见高热不退、休克、疼痛不适等体征，临床病死率高达37%。因此，及早明确病原菌对用药方案的选择及改善患者的预后具有十分重要的意义。CLIS血培养程序指南认为，标本采集后应尽量在2 h内运送、检查，但仍有部分实验室无法满足该要求，导致标本采集到病原菌检出的时间大大延长了。血培养阳性报警时间（Time-to-positivity，TTP）指的是从血液标本开始培养至产生微生物生长报警信号所需的时间。有研究显示，预培养可缩短TTP，对及早诊断菌血症具有十分重要的意义。本研究旨在探讨不同预培养条件对常见感染菌TTP值的影响，从而为菌血症的及早诊断提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 试剂与仪器：杭州天和生物科技提供的脑心浸液培养基；菌株选择铜绿假单胞菌ATCC27853，肠埃希菌ATCC 25922，金黄色葡萄球菌ATCC29213；血培养系统BacT/Alert 3D及其配套标准厌氧瓶和需氧瓶由法国生物梅里埃公司提供。

1.2 方法：分别用脑心浸液培养基将质控菌铜绿假单胞菌ATCC27853，肠埃希菌ATCC 25922，金黄色葡萄球菌ATCC29213配成10C FU/mL、100C FU/mL菌液。铜绿假单胞菌仅接种于需氧瓶，大肠埃希菌菌液、金黄色葡萄球菌菌液同时接种于厌氧瓶和需氧瓶，并将其分别置于25 ℃、37 ℃环境预培养0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h。然后分别将10 CFU/mL、100 CFU/mL菌液置于不同血培养瓶类型、不同温度环境中预培养不同的时间段，铜绿假单胞菌共接种24瓶需氧瓶，大肠埃希菌、金葡菌各需接种24瓶厌氧瓶和24瓶需氧瓶，共计120瓶，每瓶接种1 mL菌液，预培养结束后立即将其插入BacT/Alert 3D血培养系统，记录TTP值，若7d后仍未报警，则判定结果假阴性。对比不同预培养温度、不同血培养瓶类型、不同预培养时间、不同菌液浓度环境下TTP值间的差异。

2 结果

在相同培养瓶类型、相同浓度环境下，铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌在37 ℃预培养的TTP值比明显短于25 ℃预培养的TTP值，P＜0.05。铜绿假单胞菌在25 ℃环境预培养12 h，在37 ℃环境预培养8 h TTP值显著缩短，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌在25 ℃环境预培养8 h，在37 ℃环境预培养4 h TTP值均显著缩短，均有P＜0.05。

3 讨 论

铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌是导致脓毒血症的几种常见致病菌。铜绿假单胞菌所致脓毒血症者更易合并其他严重并发症，大肠埃希菌是导致血流感染革兰阴性杆菌中的最为常见的细菌，金黄色葡萄球菌所致脓毒血症的症状十分严重[1]。一般情况下，菌血症时机体血液中的细菌浓度约为1～10 CFU/mL，而本研究中，将细菌浓度分别设置为10 CFU/mL、100 CFU/mL，主要是考虑到若将模拟细菌的浓度设置得太低，容易造成假阴性的结果，因此将细菌浓度分别设置为10 CFU/mL、100 CFU/mL，这种细菌浓度可间接反映出在不同类型血培养瓶、不同预培养时间、不同温度、不同浓度培养条件下细菌的生长动态[2]。

本研究结果显示，25 ℃环境下预培养8h或37 ℃环境下预培养4 h，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长速率显著上升，TTP值明显降低，结果表明，预培养法可有效缩短大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的TTP值。此外，本研究还显示，与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌相比，铜绿假单胞菌更易受延迟进入监测系统的影响。结果提示，在使用BacT/Alert 3D血培养仪对铜绿假单胞菌进行监测时，在标本采集后应在24 h内完成转运，以降低假阴性率[3]。

综上所述，铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的阳性报警时间与预培养的时间和温度密切相关，若采集的标本无法及时放入血培养系统，需要将标本放置到37 ℃的环境中进行预培养，培养时间限定在24 h内。