猪人工授精实验室要求及精液生产

卓卫杰

（濮阳县农业农村局，河南 濮阳457100）

人工授精可以大大提高公猪的利用率，减少公猪的饲养量；另外，人工授精技术在减少疾病传播、优良基因的迅速扩散、提高母猪受胎率方面有着积极意义。为了充分利用公猪精液，建立合格的人工授精实验室是猪人工授精技术中的关键所在。

1 猪人工授精实验室设计与环境要求

实验室应当与采精室相邻，并且实验室与采精室之间的隔墙上应当设置高约40 cm，宽约60 cm 的窗口。窗口应设计为2 层可推拉的透明玻璃，而且窗内温度控制在室温25℃左右。

实验室应当干湿分离，干燥区用于精液品质检查、精液稀释液配制、精液稀释和分装等工作；潮湿区用于安装水管和水槽、清洗器具和设备。

实验室应当制定有卫生制度，工作人员应当按照制定好的卫生制度保持实验室干净、整洁、卫生。实验室门口应当设置消毒盆，每天更换消毒液，人员进出必须脚踏消毒盆。实验室内应当安装紫外线灯，每天下班的时候开启，整晚照射。

2 猪人工授精实验室设备要求

2.1 显微镜

显微镜放大的倍数可以在100～400 倍之间调节，而且实验室最好配备2 个目镜，以方便检查精子的形态。猪人工授精实验室所需的显微镜应当配备恒温加热板，以便预热载玻片和盖玻片。

2.2 精子密度仪和恒温水浴锅

精子密度仪，顾名思义是为了检查公猪精液的精子密度，并以此为依据来决定精液的稀释倍数。该仪器能够迅速检测出精液的精子密度，从而减少对精液的影响。实验室配备的恒温水浴锅最好具有数字显示器，以便更好地控制温度，从而能够更精确地加热精液稀释液和控制精液稀释液的温度。

2.3 电子台秤和恒温保温箱

电子台秤的目的是为了称量精液等的质量。恒温保温箱是为了更好地保存稀释好的精液，恒温保温箱最好带有数字显示屏，并能调至17 ℃的恒定温度。

2.4 温度计

实验室最好配备2 支温度计，可以同时测量精液和稀释液温度，需要注意的是，要确保这2 支温度计在测定同一液体时所显示的温度是一致的，只有这样，才能确保精液和精液稀释液温度一致。

2.5 其他器具

猪人工授精实验室还需要玻璃杯、玻璃棒、滤纸、蒸馏水、空调、量筒或量杯、输精瓶、封口机等。

3 精液的生产

3.1 精液量的测定

按照规范的采精操作，公猪的采精量一般100～500 ml，平均在220 ml。而每头公猪的精液量则是相对固定的。如果公猪的采精量与日常的明显不同，应当注意查找原因。公猪的精液密度约为1.02g/ml，接近于1，所以，可以直接采取称重的方法来测量精液的体积，即1 g 精液的体积约为1 ml。

3.2 精液品质的检查

通过精液品质的检查，能够保证每份用于输精的精液中含有足量的有效精子，确保了人工授精的受胎率。精液品质的检查包括直观检查和微观检查两个方面。

3.2.1 精液直观检查

猪精液被采集后，首先要对其进行直观检查，直观检查包括检查精液的色泽、气味、凝集度和射精量等。

色泽：正常公猪精液从浅灰白色到乳白色。色泽越白，说明精子密度越高；色泽越透明，则说明精子密度越低。精液呈现红色、褐色或褐红色则说明精液中混有鲜血或陈血。精液量少而呈现褐黄色，说明混有尿液。透明度高，红色、褐色、褐黄色等不正常的色泽都提示精液品质有问题。

气味：正常公猪精液会有淡淡的腥味。如果有腥臭味则说明精液中混有脓液；有腥臊味则说明精液中混有尿液或包皮液，这些都是不合格的精液。

凝集度：正常的精液应该质地均匀，如果精液中可以看到小颗粒或絮状物，则说明有严重的精子凝集现象，应判定为不合格精液。

射精量：每头公猪的采精量是基本恒定的，与正常的精液量差异过大，则提示着所采集的精液有可能不合格。

3.2.2 精液微观检查

精液微观检查的目的是为了检查精子的活力。显微镜下，能够前进运动的精子称为有效精子，前进运动精子占总精子数的百分比叫做精子活力，这是精液微观检查的重要指标。

十级评分制评定精液活力，精子活力检查应在37～39 ℃的温度下检查，先使用100 倍检查，即用10 倍的目镜和10 倍的物镜进行整体观察，然后再把物镜调成40倍，进行观察。按照十级评分制进行评分，90%的精子呈前进运动的精液活力评定为0.9，80%的呈前进运动则评定为0.8，以此类推。按照此评分制，合格精液的精子活力不低于0.7。

五级评分制评定精子活力，新鲜精液应当在100 倍下进行整体观察，整个视野中有明显大的运动波，评定为5 分；视野中 一些运动波和精子的成群运动，评定为4分；出现成群运动，评定为3 分；没有成群运动，部分呈前进运动，评定为2 分；只有蠕动，评定为1 分；无精子活动，评定为0 分。按照五级评分制，合格精液的精子活力应不低于3分。

3.3 精液的稀释

精液采集后不能放置过长时间，最好不要超过30 min。稀释的时候，一般按照每个输精袋或输精瓶中含有40 亿个有效精子来进行稀释。

精液稀释时，一定要保证原精液与稀释液的温度一致，两者温差不能超过2 ℃。根据计算所得的稀释后总精液体积，缓缓加入稀释液，稀释液加入时应当沿着杯壁倒入，严禁将稀释液从高处倒入，形成冲击力。稀释液最终加入量应使精液和稀释液的总体积达到所计算的稀释后体积。加入稀释液过程中，应一边加入稀释液，一边轻轻摇动烧杯或用洁净的玻璃棒搅拌。

3.4 精液分装与标记

精液稀释5 min 后，应当再一次检查精子活力，如果活力没有下降，方可进行分装。分装时，实验室室温要控制在25℃左右，以防止精液受到温度的影响。因为空气中的氧气不利于精子的保存，因此在分装时，要注意排净精液袋或精液瓶中的空气。

分装好的精液，要做好标记，以便确认精液的来源、保质期等信息，从而方便进行人工授精时信息的登记。不同品种的精液使用不同颜色的精液袋或精液瓶区分，并贴上标签，标明公猪耳号、采精日期、有效期、精子活力等信息。

3.5 精液的降温与保存

分装好的精液应当先放置在一个保温箱中，使精液温度缓慢下降，等到精液温度下降到室温左右时，再放入恒温箱中。

保存精液时，恒温箱内的温度应当保持在17 ℃。并且每隔12 h 轻轻翻动精液袋或精液瓶，防止精子发生沉淀而导致死亡。稀释好的精液在恒温箱中可以保存约3 d，一旦超过3 d，精液的活力将达不到配种的要求。

3.6 精液复检与运输

在使用精液前，应当再次检查精液活力，只有当精液活力不小于0.7 时，方可使用。复检时，向干净试管中抽取1～2 ml 精液，之后将试管放入37～38 ℃的恒温水浴箱中加热5 min，取出精液轻轻摇匀，使用滴管取出一滴放在已经预热好的载玻片上，置于37 ℃的恒温板片刻后，使用显微镜观察精子活力。

精液在运输的时候，应当有专用的保温箱，并且保温箱温度保持在16～18℃，运输过程中避免强烈晃动。