水产养殖区抗生素的残留特性研究

史朝斌

（济源市渔业技术推广站 河南济源459000 ）

由于人们对食品安全越来越重视，所以水产养殖中残留的抗生素也受到了社会的广泛关注。残留在水产养殖区的抗生素，容易对生态环境造成破坏，而且危害人体健康。研究的目的，在于了解水产养殖的抗生素分布情况，为水产品的食用安全提供参考依据。

1 获取抗生素含量的方法

1.1 采集样品

选择水网密布、养殖业发达的区域作为研究范围，在定区域采集一定的样品，样品包括水体、鱼类、饲料、沉积物等。对于所采集的鱼类，要放在曝气培养箱内；在采集的水样中添加甲醇、硫酸，抑制微生物的活性。所有的采样点采集3份沉积物，再将其混合为一个沉积物样，放在车载冰柜内[1]。样品采集完毕后，沉积物和饲料样品在-19℃的环境下保存；鱼样采用一次性注射器获取鱼尾静脉血后，通过手术刀取3 g的肝脏、背部去皮肌肉，在-10℃的环境下保存。

1.2 主要仪器设备和试剂

设备美国的Agilent 1200高分离度快速高效液相色谱仪、Agilent 6460三重四极杆串联质谱仪、旋转蒸发仪、冷冻离心设备、超纯水设备、氮吹仪等。试剂包括色谱纯甲醇、乙腈、硫酸、氢氧化钠、乙二酸四乙酸二钠、强弱阴离子交换小柱等[2]。抗生素标品则包括三十多种，如磺胺砒啶、磺胺醋酰、磺胺二甲嘧啶、磺胺噻唑等等、氧氟沙星、林可霉素等。

先制备脱水红霉素甲醇溶解红霉素，通过添加4 mol/LH2SO4调整酸碱度，将其放置四个小时。内标物包括了磺胺甲恶唑、红霉素、环丙沙星等。

1.3 样品制备

4L水样通过0.7 um的滤膜进行过滤，再借助4 mol/L硫酸来调整其酸碱度，在其中添加2 g的依地酸二钠。通过HLB过滤系统进行获取。过滤之后的滤膜，在冷冻干燥之后称重，减去滤膜的重量，得到颗粒物的质量。将饲料和沉淀物进行冷冻之后，再研磨和过筛。取2 g，放置于50 ml的离心管内，添加酸碱度为3.0的柠檬酸缓冲物质、乙腈各10 ml。超声提取15 min之后进行离心，转移至平底烧瓶中，此过程重复两次。在55℃取上清液，促使提取液进行蒸发，然后用超纯水定容到200 ml，添加0.2 g的依地酸二钠，搅拌均匀之后充分利用萃取设备来获得样品。

鱼类的肝脏、肌肉中含有基质效应的脂肪，在采集样品时，要采用净化柱去掉其中的脂肪。对于血液样品，静置取100 uL的上清液，放入500 ml的玻璃管中，添加0.5 g/L的依地酸二钠。通过4 mol/LH2SO4来调整酸碱度，采用萃取设备来获得样品。对于肌肉、肝脏样品，取2 g，放进15 ml的0.1mol/L的柠檬缓冲液中，再加15 ml甲醇，置于50 ml离心管内，超声提取15 min。整个提取过程重复两次，取上清液至平底烧瓶中，超纯水定容到200 ml，添加0.2 g依地酸二钠，搅拌均匀后萃取[3]。

在进行萃取时，用甲醇以及超纯水对HLB柱进行激化。萃取结束之后，采用10 ml超纯水淋洗HLB柱，采用甲醇以及乙酸乙酯来对HLB柱进行清洗。定容完成后还要通过针头式过滤设备对定容后的样品进行筛选，放进容器中，准备分析和检测。

1.4 配置标准品溶液

将10 mg抗生素标品放入100 ml的甲醇中, 在含有0.5%的1 mol/L氢氧化钠的甲醇中，放入氟喹诺酮。同时在100 ml的超纯水内放入β-内酰胺物质，保存环境为5℃，7 d换一次，另外的储备液则在-20℃环境下保存。

1.5 标准曲线

在对样品进行研究时，要采用两种不同的标准曲线，一种是高浓度的，一种是低浓度的。前者的范围是10-200 ug/L,R2＞0.995，后者的范围是。对于回收的数据，要对养殖场的饲料、鱼类、水体等进行加标，其中加标的范围是100 ng/L,100 ng/g,100 ug/g。水体、血液、肝脏、肌肉中抗生素回收率范围则在60%～180%之间，其种类达到了32、38、35、33种。分析样品时，每7种样品进行一次抗生素检测，标样浓度变化范围不能大于±21%，设备也不能波动太大[4]。

2 检测结果

2.1 颗粒物、水体、饲料、沉积物中的抗生素分布

在通过上述方法进行检测之后，得出了水体、饲料、沉积物中的抗生素分布情况。其中总共检测出35种抗生素中的7种，比如林可霉素、诺氟沙星、磺胺嘧啶、北里霉素等。残留量最高的是脱水红霉素，因为这是水产养殖中最常用的一种抗生素。

表1 非生物样品内的抗生素分布

2.2 鱼体组织中的抗生素残留

鱼体抗生素含量的残留情况如下表所示，共检测出35种抗生素中的9种，包括了恩诺沙星、林可霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、培氟沙星等。

表2 鱼体组织中的抗生素情况

从上表可以看出鱼体组织中的抗生素分布情况，脱水红霉素的残留量最高，鱼肝脏、鱼血液、鱼肌肉中均检测出了大量脱水红霉素。因为红霉素药效好，成本低，所以被广泛使用在水产养殖中。含量较高的还有环丙沙星、诺氟沙星、甲氧咔啶等，这些抗生素流入人口密集的流域，造成了环境污染。

2.3 水产品的饮食风险

以上水产品含有大量的抗生素，容易给人们的健康带来威胁[5]。因为人们常常食用鱼体肌肉部分，所以这次研究中主要针对的是鱼体。其中检测出含量超过50%的抗生素有脱水红霉素、甲氧咔啶、环丙沙星、诺氟沙星、培氟沙星。体重正常的成人在食用了这些鱼类产品之后，间接摄入大量抗生素，甚至超过了每日允许值。这些鱼类产品未达到安全食用的标准，有的甚至超过允许残留量的20%，极有可能给人的健康带来一定的风险[6]。

3 讨论

抗生素作为水产养殖中抗菌性药物，由于抗生素特有的药留和耐药性，已经严重影响水产业的健康发展，为防止抗生素耐药性的产生，应科学合理用药，下一步应研发新一代替代品，希望有关职能部门做到严格的监控和限制,减轻抗生素残留危害,严格执行休药期制度,严格检测和限制药残超标水产品进入市场,确保市民吃上安全的水产品。