基于正交试验法多指标优选红麻凝胶膏提取工艺

刘洪盛 皮凤娟 张庆莲

摘要：目的优选红麻凝胶膏提取工艺。方法以羟基红花黄色素A，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量以及干浸膏得率为考察指标，考察加水量，提取时间和提取次数对提取工艺的影响。结果最佳提取工艺为加10倍量水，提取3次，每次提取1 h。结论该优化的提取工艺条件稳定可行，重复性好，适合于该制剂的大生产。

关键词：红麻凝胶膏;正交实验;提取工艺

中图分类号：R2842文献标志码：A文章编号：1007-2349（2019）11-0077-03

消肿活血散为本院著名院内制剂，它是本院一种外用散剂（俗称糊药）。其主要功效为活血化瘀，消肿止痛，广泛应用于本院骨伤科，外科等科室，其疗效独特，毒副作用小，在病员中有较高知名度[1]。但实际应用中存在膏体粗糙不细腻，膏体不易清洗，微生物限度易检查超标，质量难以控制等缺点[2]。现准备将消肿活血散改进成凝胶膏剂，应用于闭合四肢软组织损伤，凝胶膏的研制和临床应用，能克服原剂型缺点，使药物有效成分透皮快速吸收，提高生物利用度，增强疗效且携带方便，更容易被广大患者接受。经查阅文献[3-4]，该散剂以红花、麻黄为君药，红花中羟基红花黄色素A，麻黄中的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱具备镇痛、消肿、化淤多种功效。故以羟基红花黄色素A，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量及干膏得率为指标，运用正交实验筛选最佳提取工艺。现报道如下。

1仪器与材料

FA2004型电子天平（上海安亭电子仪器厂）;ZDHW调温电热套（北京中兴伟业仪器有限公司）;DZF-1B真空干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）;恒温水浴锅

盐酸伪麻黄碱对照品（批号171237-201510），盐酸麻黄碱对照品（批号171241-201809），羟基红花黄色素A对照品（批号111637-201810）（中国食品药品检定研究院）;所用试剂均为分析纯;水为纯化水。

麻黄，红花等药材（购自康美药业有限公司），由泸州市中医医院主任中药师张世波鉴定为正品。

2方法与结果

21盐酸伪麻黄碱，盐酸麻黄碱，羟基红花黄色素A含量测定方法的建立

211色谱条件赛分色谱柱Sepax Bio-C18（250 mm×46 mm，5 μm）;流动相A：甲醇，流动相B：乙腈，流动相C：01%磷酸（含01%三乙胺），梯度洗脱（0～22 min，5%B，95%C;23～33 min，2%B，72%C）;流速为1 mL·min-1;检测波长为210 nm和403 nm;进样量为10 μL;柱温30℃。

212溶液的制备麻黄混合对照品溶液：分别精密称取盐酸麻黄碱对照品，盐酸伪麻黄碱对照品，加甲醇制成含盐酸麻黄碱对照品00445 mg·mL-1，盐酸伪麻黄碱对照品00430 mg·mL-1的混合对照品溶液。

羟基红花黄色素A对照品溶液：精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加20%甲醇制成含羟基红花黄色素A对照品01084 mg·mL-1的对照品溶液。

供试品溶液：按25倍日处方量称取药材，其中一部分药材提取完挥发油后过滤，滤液备用;将药渣与剩余药材混合，加8倍量水提取3次，每次1 h，滤过，合并滤液，经045μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：按供试品制备方法制备缺麻黄和红花的阴性对照品溶液。

213方法学考察专属性试验：分别精密吸取麻黄混合对照品溶液，羟基红花黄色素A对照品溶液，供试品溶液，阴性对照品溶液各10μl，注入高效液相色譜仪，按上述色谱条件检测。结果对照品溶液和供试品溶液在相同的保留时间均有出峰，阴性对照无干扰，如图1。说明该测定方法专属性强，无干扰[5-6]。

线性范围考察 精密称取盐酸麻黄碱对照品，盐酸伪麻黄碱对照品适量，用甲醇稀释制成盐酸麻黄碱对照品浓度为00223 mg/mL～02058 mg/mL，盐酸伪麻黄碱对照品浓度为00215 mg/mL～01710 mg/mL的混合对照品溶液，另精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加20%甲醇制成含羟基红花黄色素A对照品浓度为00215 mg/mL～02168mg/mL的对照品溶液。在上述色谱条件下，分别取上述对照品溶液10 μL注入液相色谱仪测定峰面积，以进样量x为横坐标，峰面积y为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=14932x+42588（r=09999），y=17605x-20029（r=09999），y=16238x+38284（r=09999）。结果表明：盐酸麻黄碱在02-21μg内，盐酸伪麻黄碱在02-17μg范围内，羟基红花黄色素A在02-22μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。

精密度实验 吸取212项下样品溶液适量，重复测定6次，结果盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱，羟基红花黄色素A峰面积的RSD值分别为075%，079%，081%，表明该方法精密度良好。

稳定性实验 精密量取212项下混合对照品溶液，在0，2，4，6和8h分别进样10 μL，记录3个成分的峰面积，计算RSD分别为041%，051%，046%，结果表明盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱，羟基红花黄色素A均在8h内稳定。

重复性实验 取同一批样品6份，照212项下方法制备供试品溶液，依照上述色谱条件平行操作测定，记录峰面积，计算含量。结果3个成分的RSD值均小于30%，表明本方法的重复性良好。

耐用性实验 取同一批样品，照212项下方法制备供试品溶液，改变色谱柱温度±5℃、流动相比例±5%，流速±2%，进行耐用性试验。结果RSD<30%，说明本方法稳定。

加样回收率实验 精密量取已知盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱，羟基红花黄色素A含量的样品5 mL，共9份，每3份为一组，分别精密加入含盐酸麻黄碱对照品00445 mg·mL-1，盐酸伪麻黄碱对照品00430 mg·mL-1，羟基红花黄色素A对照品01084 mg·mL-1的混合对照品溶液25 mL，5 mL，75 mL，混匀，依法制备供试品溶液。依照上述色谱条件平行操作测定，记录峰面积，最后计算盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、羟基红花黄色素A的回收率和RSD。结果盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、羟基红花黄色素A的平均回收率分别为：982%（RSD=12%）、995%（RSD=11%）、978%（RSD=14%）。由实验结果可知，各成分的加样回收率结果良好，适合用于红麻凝胶膏中有效成分的含量测定[7-9]，见图1。

22正交设计实验优化提取工艺根据单因素考察的结果，选定提取时间、提取次数、加水量为考察因素，以盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、羟基红花黄色素A含量和干浸膏得率为指标综合评分，应用L9（34）正交试验表进行试验。按处方量比例准确称取各味药材，共9份，编为1-9号，提取液过滤，定容即得[10-12]。

221干浸膏得率的测定精密移取上述提取液液25 mL，置于已经恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，置烘箱中干燥至恒重，减去皿重，计算干浸膏得率。

222测定方法精密吸取麻黄混合对照品溶液，羟基红花黄色素A对照品溶液和上述样品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，计算样品中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、羟基红花黄色素A的含量，方差分析采用spss100軟件，结果见表1-2。

223结果由表1可知，3个因素中对提取工艺的影响顺序为B（提取次数）>C（加水量）>A（提取时间），由方差分析结果可知，因素B（提取次数）对综合评分的影响有显著性差异，因素A（提取时间）和因素C（加水量）的影响未达到显著性差异，由正交试验得出的最优提取条件是A3B3C3，即加10倍量水、提取3次、每次90 min，但考虑到能源的节约，故将最优条件调整为A2B3C3，即加10倍量水、提取3次、每次1 h，以此条件进一步进行验证试验。

224验证实验按处方量比例称取红花，麻黄等药材，按最佳提取工艺进行3批验证试验，结果综合评分分别为100，9688，9851，RSD为158%，表明该工艺稳定可靠[13-14]。

3讨论

由于本制剂为复方，药效成分复杂，使用单一成分作为考察指标可能会影响制剂质量，故选择方中两味君药的有效成分及干浸膏量作为考察指标[15-16]。

在混合对照品的制备过程中，首先将盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱和羟基红花黄色素A三个对照品精密称定后混合溶解在甲醇中，用选定的色谱条件进行检测时发现，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰对称因子和分离度均能达到要求，但羟基红花黄色素A峰出现分裂，考虑可能是对照品的原因，后按照212方法重新配制对照品后再按照选定色谱条件进行检测后发现，盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱和羟基红花黄色素A峰对称因子和分离度均能达到要求，说明按照文中选定色谱条件进行对照品检测时，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱与羟基红花黄色素A应分别配制。

在进行验证实验时，考虑到提取时间和加水量对综合评分的影响未达到显著性差异，在节约能源的基础上，在选定最佳工艺时同时进行了加8倍水，加6倍水和提取05小时的工艺考察，最终比较发现当加水量为10倍，提取3次，每次1小时时综合评分最佳。[KH*1D]

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（收稿日期：2019-07-16）