长柄侧耳发酵液对小鼠肝脏组织抗氧化能力的研究*

郭 强

（商丘学院体育学院，河南 商丘 476000）

食用菌鲜美可口，同时包含人体所需氨基酸、蛋白质、维生素及多糖等多种营养成分，且不含胆固醇及淀粉，经常食用可显著提高人体对食物营养的吸收率，在抗肿瘤方面同样具有显著的效果，具有提高人体免疫力、降低血压，保护肝脏组织，预防粥样动脉硬化等多种作用[1]。

目前，市场上关于培养食用菌液体发酵的试验层出不穷，工艺也越来越精湛。据相关报道，食用菌发酵后，得到的液体不仅可以抑制肿瘤活性，而且还可以美白保湿，保护人体肝脏，但抗疲劳和抗氧化能力没有被明确提出[1]。通过食用菌液体的发酵，我们可以获得质量相当稳定的发酵液，而且这种方式相对于固体培养有更多的优势。第一，可以获得更高的产量。第二，液体发酵的条件没有那么苛刻，发酵的周期不但短而且过程便于控制[2]。

本文中采用强制喂食小鼠长柄侧耳发酵液，不断反复地研究小白鼠的运动能力，耐缺氧时间，血乳酸、尿素氮、肝糖原储存量肝糖原储存量等指标。据研究表明，侧耳属类食用菌不管是在机体免疫力上，抗肿瘤上，还有降压降脂方面都具有比其他食用菌较好的作用，该项目的重点是研究长柄侧耳的菌种发酵对有血清中的胆固醇或者甘油三酯高于正常值的小鼠的预防作用，以及怎样保护小白鼠的肝脏和提高小鼠抗氧化能力的，以便为长柄侧耳菌种的使用发展提供科学依据[1]。为进一步研究和发挥食用菌在药材方面的作用提供参考。

1 实验方法

1.1 材料与方法

1.1.1 材料与试剂

长柄侧耳菌株 502001（Changxingjin land ecological agriculture development Co.Ltd.）；尿素氮（Produit par zhejiang aikang biotech Co.Ltd.）、Blood lactic acid试剂盒；葡萄糖、乙醇等（Hangzhou zhengshan chemical Co.Ltd.），均为分析纯；400只清洁级ICR57小鼠（Jinan jinfeng experimental animal Co.Ltd），雄性，30 g～32 g，动物许可证号为SCXK2016-0001。SOD、MDA、GSH-PX测试盒。

液体培养基：葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母浸粉 1%、磷酸二氢钾 0.05%、硫酸镁 0.05%[3]。

1.1.2 主要用到的仪器

EKF lactatescout便携式Blood lactic acid测定仪；TS-5型离心机；WFJ-15型超微粉碎机；电热恒温水浴锅；可见分光光度计小鼠饲养笼；Hei-VAPA dvantage旋转蒸发仪；小鼠恒温游泳池。

1.1.3 长柄侧耳发酵液的制备

先于0.5 L的锥形瓶容器装入0.3 kg的液体培养基，液体发酵罐的菌种量比例是1%，以30℃的温度培养5 d得到液体菌种。0.5 L摇瓶装入液体培养基0.3 kg，之后移入液体菌种，液体发酵罐的菌种量控制在1%，200 r·min-1、26℃培养5 d[4]。通过抽吸过滤发酵液体，获得用于小鼠试验的发酵的试发酵液。

1.2 灌胃剂量与分组

把试验小白鼠分为4个组，各试验每组小鼠20只分别进行食用菌发酵液的喂食，每天按照体重分别灌胃 10 mg·kg-1d-1、20 mg·kg-1d-1和 30 mg·kg-1d-1的剂量，对照组灌胃每天10 mg·kg-1蒸馏水，持续1个月。

1.3 负重游泳实验

小白鼠最后1次灌胃0.5 h后，在小白鼠的尾巴上扣上其体重4%重量的的铅丝，然后把它丢入试验游泳箱中，水温控制在30℃左右，水的高度0.3 m，然后把小白鼠完全在水面下面的游泳时间超过5 s的时间的长短记录下来。

1.3.1 爬杆试验

小鼠最后1次灌胃0.5 h后，进行爬杆试验。记录由于肌肉疲劳导致摔落的小白鼠开始和跌落之间的时间，反复试验3次。

1.3.2 耐缺氧试验

耐缺氧试验需要在喂食长柄侧耳发酵液0.5 h之后进行，首先在0.5 L容积的广口瓶放入15 g的石灰，使之沉淀在瓶底，然后把小白鼠依次放入每个瓶子里，把瓶口密封起来，然后把从加盖到小老鼠停止呼吸的时间记下来（不断晃动广口瓶，小鼠没有动静可判断已死亡）。

1.3.3 尿素氮、肝糖原储存量和血乳酸测定方法

小鼠最后1次灌胃0.5 h后，让其在符合标准的游泳池中游1.5 h之后，去除血清并分离血清，测尿素氮的含量，取0.2 g的肝组织测肝糖原的储存量，在眼球取血，测血乳酸含量。

1.3.4 抗氧化指标测定

小鼠最后1次灌胃0.5 h后，在小白鼠的尾巴上扣上它体重10%重量的的铅丝，让它在试验游泳箱中游泳，使其精疲力竭之后（以头部在水中10 s没有浮出水面为标准），取其肝组织测SOD、GSH-Px的活力和MDA的水平。

2 试验结果

2.1 长柄侧耳发酵液在抗疲劳方面的作用

长柄侧耳酵液对小鼠负重游泳、爬杆和耐缺氧时间的影响见表1。

表1 长柄侧耳发酵液对小鼠负重游泳、爬杆和耐缺氧时间的影响Tab.1 Effects of Plearotas spodoleucas fermentation liquid on swimming,climbing and anoxia tolerance time

从表1的数据对比对照组H2O 10 mg·kg-1d-1，低剂量组 10 mg·kg-1d-1、中剂量组 20 mg·kg-1d-1；高剂量组30 mg·kg-1d-1食用菌酵液灌胃之后，小白鼠的运动时间变长久了，比如游泳或者爬杆的时候，另外，耐缺氧的时间也变长，它表明食用菌酵液对小鼠运动耐力的增强，也说明食用菌发酵液在抗疲劳方面，功能非常强大。

2.2 小鼠指标在灌胃发酵液之后的变化

食用菌酵液对小鼠指标的影响如表2所示。

由表2可知，低剂量组（10 mg·kg-1d-1）小鼠的尿素氮、血乳酸和MDA含量都在下降，肝糖原储存量、SOD和GSH-P x活性有所上升，但差异都不是很明显；高剂量组（30 mg·kg-1d-1）肝糖原储存量、SOD和GSH-P x活性相对于对照组显著上升，尿素氮、血乳酸和MDA含量也显著下降。说明食用菌食用菌酵液越多，小鼠抗氧化能力越强。

表2 食用菌酵液对小鼠指标的影响Tab.2 Effect of Plenrotus spodoleacas fermentation liquid on mouse indexes

3 结论

市场的现实需求是需要符合当下社会公众的思想认知的，两者密不可分。也就是说，随着生活中人们越来越看重自己的健康，因为食用菌的营养丰富，对健康有大有裨益，所以食用菌的需求量会越来越大，需求量的提成，也会促进更多的食用菌方面的开发和利用。因为网络让人们了解了更多的疾病，人们也已经不再仅仅考虑如何提高生活质量了，营养的实物，疾病的预防也越来越受到关注。因为食用菌安全又营养，在疾病预防方面也有功效，所以它符合当下发展的一个健康理念，也非常受欢迎。因此购买食用菌的人很多，消费量很大，具有十分大的市场潜力。

本文的试验材料主要是长柄侧耳发酵液，根据测试过程中的数据我们可以看出小白鼠在被灌胃发酵液之后，各项的指标都有不同程度的变化，比如，低剂量组的抗疲劳和抗氧化的指数就不是很明显，但是中高剂量组的抗疲劳和抗氧化我们就可以看出来明显差异：第一，小白鼠游泳爬杆坚持的时间更久，而且耐缺氧能力也增强了很多，其中，小白鼠

的尿素氮含量和血乳酸含量都下降，肝糖原储存量显著上升，MDA含量呈下降趋势，SOD、GSH－P x活力增强。研究结果说明中高剂量组食用菌酵液对小白鼠影响更大，提高运动能力的同时，也极大地提升了耐力。本文的研究结果虽只提供了参考，但是对以后食用菌发酵液的发展有指导作用，为食用菌在保健方面的功能和作用提供了前期理论基础，为它未来打开保健市场提供了参考。在后续的研究中，我们主要是考虑怎样最大限度地让发酵液发挥抗疲劳和抗氧化作用，然后再进行一系列试验和分析。