505例女性体检人群人乳头状瘤病毒感染情况及基因亚型分布

高超， 赵丹青， 孙磊， 朱科静， 许永劼， 朱金凤， 金玉姬， 潘卫,5,6**

(1.贵州医科大学 检验学院， 贵州 贵阳 550004； 2.贵州医科大学附院 妇产科， 贵州 贵阳 550004； 3.长春千麦医学检验实验室有限公司， 吉林 长春 130031； 4.吉林医药学院 基础医学院， 吉林 延吉 132013； 5.贵州医科大学附院 产前诊断中心， 贵州 贵阳 550004； 6.贵州医科大学 环境污染与疾病监控教育部重点实验室， 贵州 贵阳 550004)

人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是宫颈癌发病的一个根本原因[1-3]。目前，已发现的HPV有130多种亚型，其中能够引起宫颈癌和高度宫颈上皮内瘤变的称为高危型HPV[4-6]。研究表明，不同地区、不同人群感染的HPV亚型也有所不同。本研究针对长春地区505名女性体检人群，取其宫颈脱落细胞，采用Luminex 200流式荧光技术进行HPV基因检测，分析该地区HPV感染情况、基因亚型分布特征及患者年龄分布特点，为该地区女性宫颈癌的早期预防、发现和控制提供参考。

1 资料与方法

1.1 对象、仪器及试剂

1.1.1研究对象 选取2018年3月长春地区505例的门诊体检女性，年龄20～70岁。纳入标准：无宫颈癌、无宫颈手术史、无盆腔放射治疗史、无激素使用史、有性生活史，排除妊娠、之前确认患有宫颈癌前病变及患有宫颈癌经过治疗的女性。

1.1.2仪器与试剂 Luminex 200 多功能流式点阵仪、Eppendorf Mastercylcer Gradient 基因扩增仪、低温高速离心机以及超净工作台，上海透景公司的核酸提取盒、HPV核酸扩增分型检测试剂盒。

1.2 方法

收集宫颈刮取物中宫颈脱落细胞，-20 ℃保存；将保存液里的标本充分混匀，取1 mL置于离心管中，12 000 r/min离心5 min，去掉上清，生理盐水清洗后用核酸提取盒提取核酸，使用HPV核酸扩增分型检测试剂盒进行反应，再经Luminex 200流式荧光仪检测后进行基因分型。本实验共鉴定27种HPV的基因型，包括高危型17种(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、26、53和82型) ，低危型10种(6、11、40、42、43、44、55、61、81和83型) 。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 HPV感染情况

共检出21种HPV基因亚型，其中高危型15种(HPV-16、52、18、58、39、33、66、68、35、56、53、31、45、51、26型)、低危型6种(HPV-6、40、42、43、44、81型)。505例体检女性中HPV感染69例，感染率为13.7%，其中单一感染及多重感染分别占HPV感染者的79.7%(55/69)及20.3%(14/69)。HPV单一感染者中以高危亚型为主，占81.8%(45/55)，而最常见的2种高危型HPV分别是HPV-16、52型，感染率分别为2.2%(11/505)、1.0%(5/505)。此外，HPV单一感染者中低危亚型占18.2%(10/55)，低危亚型感染者中81型的感染率也较高，为 0.6%(3/505)。在14例 HPV多重感染者中，双重感染占92.9%(13/14)，四重感染占7.1%(1/14)。在多重感染者中最常见的高危型HPV类型分别为HPV-53和16型，感染率分别为 0.8%(4/505)、0.6%(3/505)，低危型HPV中HPV-44感染率较高，为0.6%(3/505)，各型HPV感染率之间差异有统计学意义(χ2=59.9，P<0.01)。见表1。

表1 69例体检女性HPV感染类型分布Tab.1 Distribution of HPV infection types in 69 female undergoing physical examination

2.2 不同年龄女性HPV感染情况

505例研究对象中67例没有年龄信息，其余438例体检女性年龄20～70岁,平均(42.95±9.27)岁，<20岁、20～<30岁、30～<40岁、40～<50岁及≥50岁年龄组HPV感染率分别为0、20.0%、13.1%、12.6%及16.6%，除<20岁组外，其余各年龄组之间HPV感染率比较差异无统计学意义(χ2=2.11，P>0.05)，见表2。各年龄段均以高危型感染为主，其中20～<30岁年龄组的高危型感染率和多重感染率均最高，分别为12.5%和5.0%；其余各年龄段人群中，高危感染率最高的是40～<50岁年龄组(10.4%)，多重感染率最高的为≥50岁年龄组(4.6%)，见表3。

表2 不同年龄段体检女性HPV感染率Tab.2 HPV infection rates of women in different age groups

表3 不同年龄段体检女性HPV感染亚型检出情况Tab.3 Detection of HPV infection subtypes in women of different ages

2.3 不同年龄组女性HPV-16、18和52亚型检出情况

分析感染率较高的HPV-16、52亚型及与癌症关联最密切的HPV-18亚型的年龄分布特征，3型中各有1例共3例年龄信息缺失，20～<30岁、40～<50岁年龄组以HPV-16基因型感染为主，感染率分别为5.0%和3.3%，20～<30岁和≥50年龄组HPV-16及52基因型感染率无明显差异。见表4。

表4 不同年龄组女性HPV-16、18和52基因型的检出情况Tab.4 The detection of HPV genotypes 16, 18 and 52 in women of different age groups

3 讨论

HPV属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖[7-8]。随着女性宫颈癌发病率的增高，其病因HPV感染也渐渐引起人们的注意。由于每个地区生活环境及人们生活习惯的不同，导致HPV 基因亚型在不同人群中分布也有较大差异[9-10]。有研究表明，宫颈病变程度与HPV亚型息息相关[11-12]。据调查统计，全球女性中最常见的HPV感染亚型前3名分别是16、18及31型，而在中国女性中最常见的HPV感染亚型前3名分别为 HPV-16、52及18型[13]。本研究对长春地区某一批次505例体检女性的宫颈脱落细胞进行HPV基因分型检测，感染率最高的前2名HPV亚型为HPV-16及52型，与岑尧等[14]前期统计得出的数据基本一致。

有研究显示，HPV感染率在各年龄阶段差异没有统计学意义[15]，也有调查显示，年龄≥61岁组HPV感染率最高(33.7%)，其次为≤20岁组(33%)，最低的是31～40岁组(16.4%)[16]。而在本研究中，HPV感染率最高的是20～<30岁组(20.0%)，最低的是<20岁组(0.0%)，但HPV感染率在20～<30岁、30～<40岁、40～<50岁、≥50岁年龄组中差异没有统计学意义(P>0.05)，各年龄组均以高危型HPV感染为主。提示，在不同年龄阶段，都存在一定的HPV感染概率，因此每个年龄阶段的女性进行HPV基因型的检测和HPV感染的预防都是很有必要的。

当前已有3种HPV疫苗面世，分别是二价疫苗、四价疫苗和九价疫苗。二价疫苗针对HPV-16和18型，四价针对HPV-6、11、16和18型，九价针对HPV-6、11、16、18、31、33、45、52和58型。本研究结果显示，此次HPV单一感染者中最常见为HPV-16和52型，多重感染者中HPV-53型也较常见，并不能被二价和四价疫苗所涵盖，建议将HPV-52、53纳入到HPV疫苗筛选评估中。在本研究中，多重HPV感染者占总感染者的20.3%，与新疆(15.5%)、云南(18.0%)相比较高，与山西(24.3%)、北京(27.7%)等相比较低，存在地区差异[17-18]。

综上所述，随着宫颈癌发病率的逐年升高，有必要持续推进并全面加强HPV感染的预防与检测，深入调查HPV在长春地区普通体检人群中的感染及流行变化趋势，是很有意义的。本研究提示，长春地区不同年龄段女性均存在一定的HPV感染概率，因此需要相关部门加强该地区HPV筛查工作，制定有效的预防控制措施，降低HPV感染风险，进而降低宫颈癌的发病率。