血清sTNFRⅠ及OPN与老年宫颈癌根治术后预后的相关性

赵松岩 冯水土

(1厦门大学附属妇女儿童医院 厦门市妇幼保健院，福建 厦门 361000；2厦门市海沧医院)

宫颈癌是妇科多发恶性肿瘤疾病，常见原发癌与浸润癌，前者高发年龄为30～35岁，后者高发年龄为45～55岁〔1,2〕。随着宫颈细胞学筛查的应用，使得宫颈癌与癌前病变的早期检出率提高，较之前宫颈癌的患病率与死亡率已有明显下降〔3〕。老年女性患者均为绝经后女性，相较于其他年龄段女性，其生理病理特点较特殊，罹患宫颈癌风险相对较高。随着我国社会老龄化现象加剧，老年宫颈癌每年检出例数激增，因老年人群就医症状不明显，患病后检出率低、就医率低，待检出时病情可能已经发展至中晚期，因老年人群各重要脏器功能衰退情况严重，对手术耐受性不佳，加之放化疗毒副反应相对较大，故治疗难度大大增加，预后情况不及其他年龄段宫颈癌患者〔4,5〕。为老年宫颈癌患者找到一种准确且特异性的诊断指方法对指导疾病早期准确诊断与治疗尤为必要。骨桥蛋白(OPN)是磷酸化性分泌型糖蛋白，有着诸多生物学功能，能够引起细胞信号蛋白与骨架蛋白磷酸化，可调节细胞传导、迁移、黏附与凋亡〔6〕。除OPN外，有研究发现，宫颈癌的发生与发展还可能与血清可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)高表达有关〔7〕。本研究旨在分析血清sTNFRⅠ及OPN与老年宫颈癌根治术后预后的相关性。

1 资料与方法

1.1纳入对象 本次研究的实施获得厦门大学附属妇女儿童医院医学伦理委员会批准同意，选择2016年3月至2018年3月接受根治术治疗的70例老年宫颈癌患者为宫颈癌组，年龄60～81岁，平均(70.24±5.67)岁；体质量44～75 kg，平均(58.41±11.12)kg；受教育程度：初中及以下22例，中专或高中28例，大专及以上20例；国际妇产科联盟(FIGO)分期〔7〕：Ⅰb期38例，Ⅱa期32例。同期接受常规治疗的50例宫颈上皮内瘤变老年患者为宫颈上皮内瘤病变组，年龄60～80岁，平均(69.54±6.12)岁；体质量45～80 kg，平均(59.54±10.47)kg；受教育程度：初中及以下16例，中专或高中20例，大专及以下14例。同期常规体检的50例健康老年人群为健康对照组，年龄60～81岁，平均(72.12±6.51)岁；体质量指数45～79 kg，平均(60.02±12.11)kg；受教育程度：初中及以下15例，中专或高中22例，大专及以下13例。3组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性。

1.2入选标准 (1)纳入标准：①年龄≥60岁；②宫颈癌患者均接受根治术治疗，并经术后病理学检查证实为宫颈癌；③患者根治术后均接受化疗治疗；④患者及其家属对本次研究的实施内容知情同意。(2)排除标准：①检出其他原发性恶性肿瘤者；②肿瘤发生远处转移者；③根治术后对化疗无法耐受者；④合并其他心、肝、肾等重要脏器衰竭者。

1.3根治术 患者取仰卧位，实施硬膜外麻醉，中线作横切口或纵切口，使用1%活力碘消毒皮肤3次，消毒范围上至剑突，下肢耻骨联合，两侧至腋中线，贴手术薄膜，铺巾显露手术切口，沿一侧髂前上棘至另一侧前上棘呈上凸弧形曲线依次将皮肤、皮下组织、浅筋膜、腹外肌腱膜切开，切开肌肉，横行切开腹横肌筋膜与腹膜，显露腹腔。探查腹腔，将其中液体吸引出，尽可能显露腹腔，牵开腹部，调节手术床，头低足高，使用弯钳夹住子宫两侧输卵管与圆韧带，止血垫压住肠管，将子宫拉出切开腹膜，找到输尿管并刺激输尿管，沿输尿管走行将其切开，使用无齿镊、组织剪将盆骨漏斗韧带分离剪开，丝线带线结扎。使用无齿镊、组织剪、血管钳将卵巢动静脉血管分离，结扎丝线，处理圆韧带，后剪开阔韧带，剪开膀胱腹膜并反折，依次清扫盆腔淋巴结，夹住切断缝扎子宫动静脉，分离切断膀胱，分离切断骶骨韧带，分离切断缝扎宫颈主韧带，分离切断阴道旁组织，缝合阴道壁与盆腔腹膜，关腹。

1.4指标检测 入组者均接受血清sTNFRⅠ、OPN水平表达检测，其中宫颈癌组在根治术前后均接受血清学指标水平表达检测。(1)血清sTNFRⅠ表达：取全部入组者静脉血2 ml，经3 000 r/min转速分离血清，取上清液并保存至-40℃环境内待检，使用美国Genzgme公司生产的试剂盒，严格按照说明书，使用双抗夹心酶联免疫吸附法检测血清sTNFRⅠ水平表达。(2)OPN蛋白含量：使用免疫组化的方法检测各入组者宫颈刮诊组织，宫颈组织石蜡包埋切片，脱蜡室温下经3% H2O2孵育，孵育时间为5～10 min，将其中内源性过氧化氢酶活性清除。蒸馏水清洗后置入磷酸盐缓冲液内浸泡，浸泡5 min后置于95℃环境内15 min，后室温下冷却，加入鼠抗人OPN抗体，室温下孵育，孵育时间为60～120 min，经缓冲液冲洗，加入生物素标记，冲洗滴加二氨基联苯胺，显色后使用显微镜观察，蒸馏水冲洗后染色，脱水封片。

1.5疗效评价标准 参照WHO实体瘤疗效评价标准(RECIST)〔8〕评价近期疗效：完全缓解：治疗后，患者全部病灶消失，持续≥4 w；部分缓解：治疗后，患者病灶直径较治疗前缩小≥30%，持续≥4 w；稳定：治疗后，患者病灶直径较治疗前缩小<30%，或增大<20%，未出现新病变；进展：治疗后，患者病灶直径较治疗前增加≥20%，或有新的病灶。客观缓解率=完全缓解率+部分缓解率，将客观缓解作为有效，其他均为无效。

1.6观察指标 对比3组血清sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达，宫颈癌组分别于根治术前、根治术后4个月检测，对比治疗有效组与无效组血清sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达。根治术后随访1年，记录患者死亡率，将其分为死亡与存活组，对比死亡组与存活组血清sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达。

1.7统计学方法 应用SPSS20.0统计学软件进行t检验、单因素方差分析和直线相关分析。

2 结 果

2.1血清sTNFR Ⅰ水平、OPN表达 宫颈癌组血清sTNFR Ⅰ水平、OPN表达最高，其次为宫颈上皮内瘤病变组，健康对照组最低，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组血清sTNFR Ⅰ水平、OPN表达比较

2.2宫颈癌患者不同分期血清sTNFR Ⅰ水平、OPN表达比较 宫颈癌Ⅰb期患者血清sTNFR Ⅰ水平、OPN表达显著低于Ⅱa期(P<0.05)。见表2。

表2 不同分期宫颈癌患者血清sTNFR Ⅱ水平、OPN表达比较

2.3宫颈癌患者不同治疗效果者血清sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达比较 宫颈癌组根治术治疗完全缓解、部分缓解、稳定、进展例数分别为8例、20例、30例、12例，有效率为40.00%。有效组血清sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达均显著低于无效组(P<0.05)。见表3。

2.4不同预后宫颈癌患者血清sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达比较 随访1年，宫颈癌组死亡22例(31.43%)。存活组血清sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达均显著低于死亡组(P<0.05)。见表4。

表3 不同治疗效果宫颈癌患者血清sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达比较

表4 不同预后宫颈癌患者血清sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达比较

2.5相关性分析 血清sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达与老年宫颈癌根治术后预后均呈正相关(r=0.789、0.249，P=0.000、0.038)，即随着sTNFR Ⅰ水平、OPN蛋白表达升高，患者预后越差，死亡风险越高。

3 讨 论

目前，手术仍是早期宫颈癌主要治疗方法，中晚期患者则以化疗为主〔9〕。宫颈癌治疗手段虽然多样，但老年宫颈癌患者死亡率仍居高不下，预后较差，引起临床重视。若要帮助老年宫颈癌患者生存率提高，为其制定合理的治疗计划极为关键，而合理治疗方案的设计又离不开疾病评估，可见找到一种特异性诊断指标用于宫颈癌早期诊断与预后评估的重要性〔10〕。

血清sTNFR来源于细胞膜肿瘤坏死因子受体(TNFR)膜外区域，包括sTNFR Ⅰ与sTNFRⅡ两种形式，这两种形式之间并不会产生交叉免疫反应，sTNFR的生物学作用虽较广，但最关键的是其对肿瘤坏死因子(TNF)具有封闭与拮抗作用，若与TNF-α结合，其能力将显著大于TNF-β〔11,12〕。sTNFR细胞能够经肿瘤细胞合成分泌，也可经正常免疫细胞合成分泌〔13〕。本研究结果提示血清sTNFR Ⅰ水平可用于宫颈癌早期病情评估，推测sTNFR Ⅰ在宫颈癌发生、发展期间对TNF-α有封闭作用。sTNFR Ⅰ、sTNFR Ⅱ均会竞争性结合血清内TNF-α，从而对肿瘤细胞膜上TNF-α结合TNFR产生抑制阻断之效，减灭TNF-α的抗肿瘤活性，从而诱发恶性肿瘤或推动肿瘤进一步发展〔14,15〕。此外，本研究结果显示，血清sTNFR Ⅰ表达与宫颈癌患者预后相关，即随着血清sTNFR Ⅰ表达升高，患者预后越差，死亡风险越高。该结果也从侧面印证了血清sTNFR Ⅰ表达检测用于老年宫颈癌患者根治术后预后的重要价值。

OPN广泛存在于胃肠、乳腺、子宫内，有着诸多生物学功能，可诱发细胞蛋白与骨架蛋白磷酸化，在实体肿瘤中主要起到调节细胞信号迁移、传导、黏附等作用〔16〕。OPN作为重要肿瘤细胞转移媒介，在推动恶性肿瘤发生发展、转移中占据关键地位，OPN能加速残留细胞生产，甚至部分细胞在濒临死亡的情况下也能在其作用下重新生长，甚至参与诸多肿瘤疾病的发生与发展〔17〕。OPN蛋白在宫颈癌、子宫内膜癌等诸多妇科常见肿瘤疾病中含量异常升高，且与肿瘤细胞的化疗敏感性、含氧量等密切相关〔18〕。Mu等〔19〕研究发现，妇科肿瘤的发生、发展均有OPN蛋白参与，在恶性卵巢肿瘤疾病中，OPN蛋白表达水平较正常卵巢上皮组织及其他良性卵巢肿瘤明显升高；该结果与本研究结果一致。本文结果提示OPN用于老年宫颈癌预后评估中有一定临床价值。

综上，老年宫颈癌患者根治术前后监测其血清sTNFR Ⅰ水平、OPN表达变化在患者疾病分期、治疗效果、预后评估有较高的应用价值。