绞股蓝多糖对断奶仔猪抗氧化性能的影响

谢红兵，侯晓晓，朱文杰，田帅帅，薛 宁，刘长忠(河南科技学院动物科技学院，河南 新乡 453003)

绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)，属葫芦科，是草质攀援性植物；茎纤细，有分枝，具有纵向棱和槽，茎叶无毛或疏生短柔毛。又名七叶胆、福音草，主要分布在广西、湖南、福建、江苏等省区。绞股蓝是一种很有价值的中草药，它含有许多种化学成分，其中多种绞股蓝皂苷具备类似于人参的功效，所以也称绞股蓝为“南方人参”或“第二人参”[1]。绞股蓝全草均可入药，味道稍苦微甘、性凉下火，具有补虚益气、健胃助消、润肺止咳、消火去毒的效果[2]，主要可用于治疗心悸气短、体虚无力、头晕目眩、善忘耳鸣[3]、各种病毒性肝炎、慢性肠胃炎、慢性气管和支气管炎等症状。且其没有其他副作用，故近年来一直是国内外有关研究的热点，是一种极具市场前景的中草药。我国绞股蓝植物资源较为丰厚，在乡村民间，绞股蓝既是一种食物，也是一种药品，悠久的药用历史一直至今[4]。我国市场上的绞股蓝产品有绞股蓝茶、绞股蓝冲剂和绞股蓝片剂等，这些产品的有效成分主要是绞股蓝皂苷。近年来大量的研究结果表明，绞股蓝的主要成分有皂苷、黄酮类物质、微量元素、蛋白质、维生素以及糖类等多种活性成分[5]。目前，绞股蓝在动物方面的应用研究较少，且大多数的研究主要在于其皂苷和黄酮部分，而对多糖及其他成分在动物方面的研究很少。

绞股蓝多糖［Gynostemma pent aphyllum polysaccharide（GPS）］主要是由绞股蓝茎叶中提取出来，是绞股蓝的有效活性成分之一[6]。研究发现绞股蓝多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、保护神经细胞谷氨酸氧化性损伤和肝组织损伤等作用[6]。杜小燕等[10]通过试验证明,绞股蓝多糖能显著抑制体外培养的肿瘤细胞的增殖生长。王峰[3]等的试验结果表明，绞股蓝多糖对DPPH 自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基都具有一定的清除能力，能够用来作为一种天然的抗氧化剂[7]。本试验在前人研究的基础上，通过研究在日粮中添加不同剂量的绞股蓝多糖对断奶仔猪抗氧化性能的影响，以期为有效利用绞股蓝开辟新的途径，为提高断奶仔猪抗氧化性能、生产性能以及扩大绞股蓝在畜牧业上的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验所用绞股蓝在河南省药材市场购买，首先将准备好的绞股蓝粉碎过60 目筛，放进容器内搅拌，待其搅拌均匀后备用。过氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、过氧化氢酶（CAT）试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）试剂盒以及丙二醛（MDA）试剂盒 均购于南京建成生物有限公司。

1.2 多糖的制备

称取绞股蓝粉末500 g，按照固液比1 ∶40 的比例加入乙醇(95%)2 000 mL，然后浸泡30 min，之后在蛇型回流装置中，回流提取两次，每次2 h ,液面沸腾后开始计时，待温度下降至常温后，纱布过滤，取沉淀物，使用旋转蒸发仪分两次挥发掉乙醇，加入10 倍量的蒸馏水，在85 ℃下提取30 min，重复3 次，过滤并弃去残渣，滤液在3 000 r/min 下离心15 min 去杂，取上清液。按照1：1 的比例加入适当的5%三氯乙酸-正丁醇液，摇匀后置于分液漏斗中静置至分层，之后分出下层清液，分离掉上、中两层的杂质。在60 ℃水中用8 %活性炭脱色30 min。100 ℃下恒温水浴浓缩，按1 ∶3 的比例加入95%乙醇，并在4 ℃下放置一个晚上沉淀。然后移去部分上清液，离心，沉淀，并依次用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮各清洗一次后放入干燥箱内50 ℃下干燥5 h，得到的淡黄色粉末即为绞股蓝多糖。 将其保存于干燥柜中，用硫酸-蒽酮法测得绞股蓝多糖的含量为64.60%。

1.3 试验动物

选取160 头三元杂交（杜×长×大）28 日龄的断奶仔猪，试验仔猪的平均断奶体重为（6.23±0.3）kg。

1.4 试验方法

1.4.1 试验设计

随机将160 头断奶仔猪分为对照组和试验 I、Ⅱ、Ⅲ、IV 组共5个处理组，每组设4 个重复，每个重复8 头猪，公母猪各半。空白对照组用基础日粮饲喂，4 个试验组在基础日粮中分别添加不同剂量的绞股蓝多糖，分别为200 mg/kg、400 mg/kg、600 mg/kg、800 mg/kg ，持续饲喂28 d。

1.4.2 样品采集

每个重复中选取2 头猪，抽取其前腔静脉血10 mL，在室温下静置1h，3 000 r/min 离心15 min 后取上层血清，分装到2 mL 离心管中，放于-20 ℃环境下冷冻保存，用于抗氧化酶CAT、GSH-Px 和SOD 的活性和MDA 的含量的测定。每个重复中选取体重相近的2头猪屠宰，并迅速结扎空肠，在肠段的相同位置选取肠道黏膜样品，用锡箔纸包裹，放于-80 ℃条件下冷冻保存，测定之前取出0.2 g，加入9倍量的生理盐水，在冰浴条件下研磨制成匀浆，离心15 min（2 000 r/min），留取上清液,用于各种抗氧化酶的活性和物质含量的测定。

1.4.3 试验日粮

试验基础日粮见表1。

1.4.4 饲养管理

仔猪饲养于排气通风良好、水泥地面的全封闭猪舍，舍温保持在 23 ～25 ℃ ，采用常规管理进行免疫和驱虫。试验开始后按照分组饲喂不同饲料。5 个处理组的圈舍环境和管理等均一致。

1.4.5 测定指标

血清与小肠黏膜中抗氧化酶CAT、GSH-Px 和SOD 的 活 性和 MDA 的含量的测定分别用过氧化氢酶（CAT）试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒、过氧化物歧化酶（SOD）试剂盒以及丙二醛（MDA）试剂盒，具体方法按说明书操作进行。

1.5 数据处理

本试验所有数据都先使用Excel 2012 处理后，使用SPSS 22.0软件进行数据分析，选用单因素方差分析和多重比较两种分析方法。各组的试验数据均用“平均值±标准差”来表示，差异显著性的判断标准为P ＜0.05。

2 结果与分析

2.1 绞股蓝多糖对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响

表 1 日粮配方以及营养水平

绞股蓝多糖对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响见表2。

从表2 的数据可知，与对照组相比，试验Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ组中SOD 的活性分别增加了5.09%（P ＜0.05）、18.83%（P＜0.05）、7.48%（P ＜0.05）和6.09%（P ＜0.05），各试验组之间，Ⅱ组与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组之间差异均显著（P ＜0.05），其他组之间差异不显著（P ＞0.05）。与对照组相比，CAT 的活性分别增加了11.76%（P ＞0.05）、104.83%（P ＜0.05）、82.56%（P ＜0.05）和64.08%（P ＜0.05），各试验组之间（除Ⅰ组外），Ⅱ组与Ⅳ组差异显著（P ＜0.05），其他组之间差异不显著（P ＞0.05）。与对照组相比，G S H-P x 的活性分别增加了3.79%（P ＜0.0 5）、8.2 9%（P ＜0.05）、6.45%（P ＜0.05）和4.24%（P ＜0.05），各试验组之间，Ⅱ组与Ⅰ、Ⅳ组差异显著（P ＜0.05），与Ⅲ组差异不显著（P ＞0.05）。 与对照组相比，MDA的含量分别降低了2.06%（P ＞0.05）、25.71%（P ＜0.05）、18.77%（P ＜0.05）和9.25%（P ＜0.05），Ⅱ组与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组之间差异均显著（P ＜0.05）。

2.2 绞股蓝多糖对断奶仔猪空肠黏膜抗氧化指标的影响

绞股蓝多糖对断奶仔猪空肠黏膜抗氧化指标的影响见表3。

从表3 的数据可知，与对照组相比，试验Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组中SOD 的活性分别增加了8.12%（P ＜0.05）、18.23%（P ＜0.05）、9.08%（P ＜0.05）、7.09%（P ＜0.05），Ⅱ组与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组之间差异均显著（P ＜0.05），其他组之间差异不显著（P ＞0.05）。与对照组相比，CAT 的活性分别增加了5.63%（P ＜0.05）、17.58%（P ＜0.05）、11.26%（P ＜0.05）、2.90%，Ⅱ组与Ⅰ组之间差异显著（P ＜0.05），Ⅱ组与Ⅲ组，Ⅳ组之间差异不显著（P ＞0.05）。与对照组相比，GSHP x 的活性分别增加了3.1 4%（P ＞0.05）、9.40%（P ＜0.05）、5.40%（P ＞0.05）、4.27%（P ＞0.05），Ⅱ组与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组之间差异均不显著（P ＞0.05），其他组之间差异不显著（P ＞0.05）。与对照组相比， MDA 的含量分别降低了9.09%（P ＞0.05）、34.09%（P ＜0.05）、18.18%（P ＞0.05）、11.36%（P ＞0.05），各试验组之间差异均不显著（P ＞0.05）。

3 讨论

3.1 绞股蓝多糖对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响

动物细胞在正常的新陈代谢过程当中，或受到外界不良环境条件刺激时，都会使体内氧化还原状态失去平衡，使机体处在氧化应激状态, 都会不断地产生活性氧自由基，主要有羟自由基、超氧阴离子、烷氧自由基、单线态氧和氮氧自由基等[11-13]。大量的试验结果表明，多糖可以提高动物机体各种抗氧化酶的含量，降低脂质过氧化的终末产物丙二醇的含量，清除体内的自由基，提高动物的抗氧化性能。薛凌峰等[25]研究表明，香菇多糖能够提高断奶仔猪的抗氧化性能，在仔猪的日粮中添加一定量的香菇多糖后，血浆中GSH-Px 和SOD 的活性能够显著提高，而MDA 的含量降低。杨侃侃等[26]研究表明，仔猪日粮中添加适当水平的刺五加多糖时，血液中SOD 和GSH-Px的活性显著提高，MDA 的含量也显著降低。王海元等[23]通过实验表明日粮中添加一定量的绞股蓝多糖能明显提高小鼠体内组织的抗氧化性能，可以有效地除去运动中产生的自由基，以防止脂质的过氧化反应，从而能够保证运动过程中正常的氧化供能。申红春[24]通过试验证明日粮中添加低剂量的绞股蓝能够显著提高仔猪的抗氧化性能，降低了血清中脂质过氧化物的生成。本试验结果表明:日粮中添加低剂量（400 mg/kg ）的绞股蓝多糖能显著提高断奶仔猪的抗氧化能力，血清中SOD、CAT 和GSH-Px的活性显著升高，显著降低MDA的含量，这与以上的研究结果大致相同。

表2 绞股蓝多糖对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响

表3 绞股蓝多糖对断奶仔猪空肠黏膜抗氧化指标的影响

3.2 绞股蓝多糖对断奶仔猪小肠黏膜抗氧化指标的影响

当由于各种原因导致动物机体自由基产生过多或者是机体清除自由基的能力下降时，动物机体就会出现各种氧化应激反应。机体的每个部位都可能会产生氧化应激，但由于小肠是机体消化吸收食物的主要场所，消化酶能把食物消化成小分子物质，与此同时也产生了醛和脂质过氧化物等很多致氧化因子，因此，肠道也是最易遭受自由基攻击的部位之一。断奶应激可能会使得仔猪机体中产生过量氧自由基，引起肠黏膜细胞损伤。边连全等[27]通过试验表明，在仔猪日粮中外源添加谷氨酰胺能显著提高仔猪小肠黏膜中CAT 和GSH-Px 的活性，减少MDA 的含量。冷炜博等[28]通过试验表明，在仔猪日粮中添加天冬氨酸能提高仔猪肠黏膜的抗氧化酶的活性，有效降低仔猪机体的氧化应激，从而提高仔猪的抗氧化性能。但多糖对仔猪肠道黏膜抗氧化性能的影响的报道并不多见，有待进一步深入研究。本试验结果表明：仔猪日粮中添加一定量（400 mg/kg）的绞股蓝多糖能够显著提高小肠黏膜中CAT、SOD 和GSH-Px的活性，减少MDA的含量。

4 结论

在本试验范围内，饲料中添加一定量的绞股蓝多糖可提高断奶仔猪的抗氧化性能，且以400 mg/kg的量添加时效果最佳。