精乌颗粒薄层鉴别方法

李 哲 李 菲 郭华静2 高 杰 郝娟娟 刘铁军

1.神威药业集团有限公司，河北 石家庄 051430；2.河北北方学院，河北 张家口 075000

精乌颗粒收载于部颁标准中药成方制剂第十五册，由黄精(制)、制何首乌、女贞子(制)、墨旱莲4味饮片制成[1]，可补肝肾，益精血，壮筋骨，临床应用于失眠多梦，耳鸣健忘，头发脱落及须发早白等证[2]。精乌颗粒原质量标准(部颁标准中药成方制剂第十五册WS3-B-3012-98)鉴别一以大黄素对照品进行薄层色谱考察，结果大黄素Rf值大，且展开剂含有毒性较大的试剂苯，苯对人体的危害巨大，有必要对展开剂进行改进；鉴别二为黄精药材薄层鉴别，样品展开后拖尾严重，影响结果判定。为完善精乌颗粒质量标准，我们对何首乌、黄精的样品处理方法及展开条件进行进行优化，同时建立墨旱莲、女贞子的薄层定性鉴别方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 CPA225D分析天平(赛多利斯)、JM-A5002电子天平(余姚市纪铭称重校验设备有限公司)、加热套(北京科伟永兴仪器有限公司)，电热恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司)，旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)。

1.2 材料 何首乌(批号：120934-201410)、女贞子(批号：121041-201404)、黄精(制)(批号：121553-201202)、墨旱莲(批号：120958-201708)、大黄素(批号：110756-201512)等对照药材及对照品均为中国药品生物制品检定所提供。精乌颗粒(批号：1902131、1902132、1902133，神威药业集团有限公司)。乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯、正己烷、甲酸、石油醚(60～90 ℃)均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 何首乌的薄层鉴别

2.1.1 原标准存在问题 该方法展开后大黄素的Rf值太大，斑点在溶剂前沿，不易判定结果，结果见图1。

2.1.2 何首乌鉴别方法优化

2.1.2.1 供试品制备方法改进 由于制成的颗粒为无糖颗粒，样品中不含蔗糖粉，将提取溶剂由乙酸乙酯改成乙醇，其他处理方法不变。

2.1.2.2 展开剂摸索 采用三氯甲烷-甲醇(7∶3)，展距为3.5 cm，取出晾干，再以三氯甲烷-甲醇(20∶1)重新展开7.5 cm[3]。此方法何首乌的分离度低，重复性低，操作繁琐，需要的展开条件严格。其次采用石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)为展开剂[4]。结果何首乌的斑点分离度低，虽然进行了分层，但是展开过程中仍然有分层现象；最后以正已烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶1∶0.1)展开。结果何首乌分离度好，斑点清晰，比移值合适。

2.1.3 改进前后的质量标准对比 改进后质量标准在与对照药材和对照品相对应的位置，供试品显相同颜色的荧光斑点，且阴性对照在相对应位置无干扰。结果见表1、图2。

表1 改进前后何首乌鉴别方法对比

2.2 黄精的薄层鉴别

2.2.1 原标准中存在问题 由于样品中辅料蔗糖影响黄精斑点的分离度，致使斑点呈条带状，无法判定结果，结果见图3。

2.2.2 黄精鉴别方法优化

2.2.2.1 供试品制备方法改进 由于样品中多糖等成分的影响，致使斑点分离度低，因此供试品处理方法增加精制过程，首先将提取后的滤液用水饱和的正丁醇40 mL分两次洗涤，最终正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，结果黄精斑点显色清晰。

2.2.2.2 展开剂摸索 首先尝试石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-甲酸-甲醇(5∶4∶1∶1)，结果黄精样品斑点显色不清晰，样品的分离度低。且展开剂出现分层现象，导致斑点错乱，将展开剂进行分层之后重新展开，薄层板出现分层现象，所显示的斑点依然不明显。其次考察展开剂石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲醇(5∶4∶1)，结果显色后黄精斑点出现拖尾现象；将该展开剂中甲醇换成甲酸，其他条件不变，结果黄精的Rf值太大，且出现分层现象。将石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯、甲酸的比例调整为5∶2∶0.1[5]，结果样品分离度好，斑点清晰，但黄精Rf值太小；最终将三者的比例调整为5∶3∶0.1，结果黄精的斑点清晰，分离度高。

2.2.3 改进前后质量标准对比 改进后质量标准在与对照药材相对应的位置，供试品显相同颜色的斑点，且阴性对照在相对应位置无干扰。结果见表2、图4。

表2 改进前后黄精鉴别方法对比

2.3 墨旱莲、女贞子鉴别方法摸索

2.3.1 供试品制备方法建立 墨旱莲、女贞子中有效成分为脂溶性，因此样品制备过程中先将精乌颗粒加水溶解，过滤后将滤液用乙酸乙酯萃取，挥干溶剂，残渣分别用无水乙醇-三氯甲烷(3∶2)、甲醇1 mL溶解，结果甲醇溶解效果较好。

2.3.2 墨旱莲鉴别展开条件摸索 以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(9∶2∶2∶0.5)的上层溶液展开，结果墨旱莲的分离度低，而且出现分层现象。在做何首乌鉴别时，发现墨旱莲用何首乌的展开剂的分离度较好，所以将墨旱莲的展开剂改为何首乌的展开剂。结果墨旱莲斑点清晰，分离度好，Rf值合适。

2.3.3 女贞子鉴别展开条件摸索 根据查阅文献，考察以环己烷-丙酮-乙酸乙酯(5∶2∶1)[6]为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，结果显色依然不清晰，且斑点分离度低；将展开剂换成三氯甲烷-甲醇-甲酸(40∶1∶1)[7-8]，显色剂不变，结果斑点显色清晰，但比移值太小；以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)为展开剂，显色剂不变，结果斑点明显，分离度高。由于在进行黄精的鉴别实验时，发现女贞子的显色更明显，所以最终显色剂为5%香草醛的硫酸溶液。

2.3.4 新建墨旱莲、女贞子薄层鉴别方法 由表3、图5、图6可知，墨旱莲、女贞子质量标准在与对照药材在相对应的位置上，供试品显相同颜色的荧光斑点和斑点，且阴性样品无干扰。

表3 新建薄层鉴别方法

3 讨论

3.1 精乌颗粒何首乌的薄层鉴别方法研究 精乌颗粒原标准中大黄素鉴别方法展开剂为苯-乙醇，毒性较大，对人体的危害巨大；同时大黄素对照品的Rf值太大，斑点在溶剂前沿，不易判定结果，因此本实验对供试品溶液处理方法及展开剂进行优化意义重大，改进后的方法以何首乌对照药材、大黄素对照品同时作为对照，控制指标更全面。样品的点样量由10 μL减少到1～3 μL，操作更简便快捷；最终确定展开剂为正已烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶1∶0.1)，样品斑点清晰，分离度高，阴性样品无干扰，该方法可用于何首乌的鉴别。

3.2 精乌颗粒黄精的薄层鉴别方法研究 精乌颗粒原标准中黄精鉴别样品处理方法简单，由于辅料蔗糖的影响，展开后斑点拖尾严重，甚至呈条带状，首先对样品处理方法进行优化，增加正丁醇萃取，由图3、图4对比结果可见，方法改进后薄层色谱中各斑点无拖尾现象。其次对展开剂进行摸索，分别考察石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸不同比例，最终确定比例为5∶3∶0.1时，黄精斑点清晰，分离度高，且阴性对照无干扰，该方法可用于黄精的鉴别。

3.3 精乌颗粒墨旱莲、女贞子的薄层鉴别方法研究 墨旱莲、女贞子的鉴别采用同一供试品溶液，简化了操作流程，节约检验成本。起初二者采用同一展开剂，结果与墨旱莲对照药材相对应斑点的比移值太大，而与女贞子对照药材相对应斑点的比移值太小，二者不能兼顾，经过摸索确定墨旱莲的展开剂同何首乌鉴别方法。女贞子的展开剂为石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(6∶4∶0.1)。

3.4 薄层鉴别方法耐用性研究 本实验所建立的精乌颗粒4味饮片薄层鉴别方法均经过方法学验证，分别对环境温湿度及薄层板耐用性进行考察，环境温湿度包括低温(2 ℃)、常温(25 ℃)、高温高湿(温度40 ℃，湿度75%)三种条件，薄层板耐用性分别考察烟台江友硅胶开发有限公司预制G板、青岛海洋化工厂分厂预制G板以及青岛海洋化工厂硅胶G自制板三种载体，均得到满意的分离效果，说明新建的薄层鉴别方法耐用性良好。

综上，改进后精乌颗粒质量标准中何首乌，黄精的薄层鉴别方法以及新建的女贞子、墨旱莲的薄层鉴别方法操作简便，重现性好，专属性高，可更全面的评价精乌颗粒的质量。