新疆罗布红麻花、种子及叶中金丝桃苷含量比较

张孟丽 张卫明 束成杰

摘要：为了比较罗布红麻（Apocynum venetum L.）花、种子、叶中的金丝桃苷含量差异，采用回流提取法提取罗布红麻花、种子及叶中的金丝桃苷，利用高效液相层析法（HPLC）测定3器官中金丝桃苷的含量。结果表明，金丝桃苷浓度在0.01～0.10 mg/mL与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.998 1;花、种子、叶中金丝桃苷的得率分别为0.085%、0.012%、0.052%。

关键词：罗布红麻（Apocynum venetum L.）;金丝桃苷;高效液相层析法;含量;比较

中图分类号：R282.71         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2019）17-0066-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.17.017           开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Abstract： To compare the hyperoside in flowers， seeds and leaves of Apocynum venetum， the hyperoside extracted by reflux extractions， and content was determined by HPLC assay. The results showed that within the range of 0.01to 0.10 mg/mL， hyperoside showed a good linear correlation with peak area， and the coefficient was 0.998 1. The hyperoside yield in the flowers， leaves and seeds were 0.085%， 0.012%， 0.052%.

Key words： Apocynum venetum L.; hyperoside; HPLC; content; comparion

罗布红麻（Apocynum venetum L.）为罗布麻属夹竹桃科多年生宿根草本植物，含乳汁[1]，具有很强的抗逆性[2]。罗布麻在3月下旬至4月中旬萌芽，5月下旬至6月中旬进入花初期，8月下旬至9月中旬进入花末期，花期通常持续90 d左右，之后种子进入成熟期，年生长大约180 d[3]。

研究表明，绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮素、紫云英苷、槲皮素、山萘酚是罗布麻中主要的化学成分[4，5]。其中，金丝桃苷具有抗急性肝损伤、抗抑郁、抗炎症、抗血栓、抗癌、抗菌、抗氧化应激和抗细胞凋亡等药理作用[6-9]。但对罗布红麻的研究开发大多集中于叶片。本试验利用液相色谱法测定新疆罗布红麻花、种子、叶片金丝桃苷的含量，旨在为罗布红麻的综合开发利用提供科学依据。

1  材料与方法

1.1  材料与仪器

材料：罗布红麻（产地新疆阿勒泰），南京野生植物综合利用研究院提供。

仪器：NH-4数显恒温水浴锅，金坛市三坛仪器厂;SHZ-DⅢ循环水式真空泵，巩义市予华仪器责任有限公司;RE-52AA旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂;KF-1209电子天平，凯丰集团有限公司;液相色谱仪1200 系列，美国Agilent公司;微孔滤膜，上海嘉鹏科技有限公司。

试剂：金丝桃苷标准品，上海源叶生物科技有限公司;甲醇、乙腈（色谱纯），美国Fisher Scientific公司;磷酸（优级纯）、乙腈（优级纯）、乙醇（分析纯）、甲醇（分析纯），均购自南京化学试剂有限公司。

1.2  方法

1.2.1  金丝桃苷提取  用乙醇作为提取剂，采用回流提取法提取金丝桃苷。将罗布红麻花、种子、叶除杂干燥，粉碎，各称取粉末50 g，分别加入8倍体积的80%乙醇在80 ℃下回流提取3次，1 h/次，合并提取液，离心后过濾，放至室温，减压回收溶剂，收集滤液，微膜过滤，得3份样品液[10，11]。

1.2.2  色谱条件  流动相为乙腈-0.25%磷酸，流速1.0 mL/min，检测波长为360 nm[12-14]。

1.2.3  标准曲线  准确称取金丝桃苷标准品10.0 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得金丝桃苷标准品溶液，稀释成浓度为0.01，0.02，0.03，0.04，0.05，0.06，0.07，0.08，0.09、0.10 mg/mL的溶液，分别精密吸取20 μL进样，得线性关系良好的回归方程。

1.2.4  样品测定  3份样品溶液，分别吸取20 μL进样，通过标准曲线计算花、种子及叶中金丝桃苷含量，3次重复。

1.3  数据处理

所有数据均为平均值±标准差。数据分析使用SPSS 12.0软件。

2  结果与分析

2.1  标准曲线绘制

从图1可以看出，金丝桃苷标准品在12～14 min出现单一的显著峰。将上述金丝桃苷标准品的梯度浓度分别进样，得峰面积，绘制标准曲线，结果如图2所示。计算得知，金丝桃苷的峰面积（y）与质量浓度（x）呈线性关系，回归方程为y=29.051x-86.807，R2=0.998 1，说明金丝桃苷进样浓度在0.01～0.10 mg/mL与峰面积线性关系良好。将新疆罗布红麻花、种子、叶样品分别进行高效液相色谱分析，得各样品的峰面积，色谱结果如图3所示，与金丝桃苷标准品对比，确认花、种子、叶中的金丝桃苷的出峰时间及峰面积。

2.2  儀器的精密度

为评价仪器的精密度，需测定花、种子、叶样品液中金丝桃苷的峰面积，计算金丝桃苷含量的相对标准偏差（RSD）。分别取花、种子、叶样品液，精密吸取20 μL，按“1.2.2”色谱条件分别连续进样6次，测定花、种子、叶样品液中金丝桃苷的峰面积，计算金丝桃苷含量的RSD。结果显示，花、种子、叶中金丝桃苷含量的RSD分别为2.9%、2.5%、1.9%（n=6），表明仪器精密度良好[15-17]。

2.3  供试溶液的稳定性

为评价供试品溶液的稳定性，按“1.2.2”色谱条件，分别取花、种子、叶样品液20 μL，在0、2、4、6、8、10 h进样，测定各样品溶液中金丝桃苷的峰面积，计算金丝桃苷含量的RSD。结果显示，花、种子、叶中金丝桃苷含量的RSD分别为1.6%、1.1%、1.4%（n=6），表明花、种子、叶样品液在配制24 h内稳定[18]。

2.4  方法重复性

取花、种子、叶样品液各3份进行HPLC测定，记录峰面积，计算金丝桃苷含量的RSD，以评价方法的重复性。结果显示，花、种子、叶中金丝桃苷含量的RSD分别为1.86%、0.20%、0.61%（n=3），表明该方法的重复性满足要求[19，20]。

2.5  回收率

分别取罗布红麻花、种子、叶样品液各1 mL，加入对照品，制备供试品溶液，并在相同色谱条件下进样20 μL，测定峰面积，计算平均加样回收率及RSD，结果如表1所示。由表1可知，花、种子、叶中金丝桃苷平均加样回收率分别为102.00%、98.40%、94.00%（n=6），RSD分别为3.28%、1.60%、1.10%（n=6），表明罗布红麻花、种子、叶样品液中金丝桃苷含量稳定[21]。

2.6  新疆罗布红麻花、种子、叶各部位金丝桃苷含量比较

根据金丝桃苷标准曲线，由峰面积计算得出罗布红麻花、种子、叶浓度，再结合提取液体积，计算得出各自含量，结果如表2所示。由表2可知，花、种子、叶中金丝桃苷的平均得率分别为0.085%、0.012%、0.052%，3个部位中金丝桃苷的含量分布为花>叶>种子。

3  讨论

目前，罗布红麻产品多集中于对叶的开发利用，本试验对罗布红麻花、种子、叶3个器官的金丝桃苷含量进行比较分析，采用回流提取法提取罗布红麻花、种子及叶中的金丝桃苷，利用高效液相层析法测定3器官中金丝桃苷的含量。结果显示，新疆罗布红麻花、种子、叶中金丝桃苷的得率分别为0.085%、0.012%、0.052%，其中叶中金丝桃苷与芦丁含量与石秋梅等[20]研究发现的新疆产罗布红麻中芦丁和金丝桃苷含量结果基本一致。新疆罗布红麻不同器官中金丝桃苷的含量为花>叶>种子，该结果可为罗布红麻的开发及综合利用提供科学依据。

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