透明质酸促进犬髋关节炎改善的效果研究

吕 莉 王 元 颜泽清 娄红军

透明质酸(Hyaluronic Acid，HA)是由D-葡糖醛酸和N-乙酰氨基葡糖构成的双糖单位连接而成的高分子黏性多糖，是构成机体内关节软骨及滑液的主要成分，它在机体关节内能起到保护软骨以及合成滑膜内HA的作用。1934年美国的Meyer等首先从牛眼玻璃体中分离出该物质。相关研究表明，HA具有独特的皮肤保湿、营养、抗衰老、抗菌消炎、促进伤口愈合、改善关节功能及药物载体等功能。相比于传统的关节内注射透明质酸治愈关节炎，口服透明质酸在改变传统给药方式的同时，还能通过不同的途径发挥作用功效。商品用HA多以其钠盐形式存在，即透明质酸钠（Sodium Hyaluronate）。目前，口服透明质酸钠功效的研究仅仅涉及到改善软骨病症状、缓解关节炎的病痛等方面。本试验主要通过饲喂含有一定比例的透明质酸钠犬粮后，研究观察其对于改善犬髋关节发育的效果及预后。

据有关报道，犬类关节炎损害程度与其关节软骨中所含透明质酸呈强烈负相关（r＝-0.696，p＜0.001），因而派生出一种临床治疗关节炎的方法，直接在关节腔中注射透明质酸，也取得了良好的效果。然而，注射级别的HA对无菌、蛋白等指标要求严格，成本高昂，手术操作对医生要求较高。国外也有许多报道，在动物饲料中添加HA，也取得了良好的效果。本实验比较在饲料中添加氨基葡萄糖、软骨素和透明质酸钠的几种方式，研究其治疗犬类关节炎的效果。

一、材料与方法

（一）试验材料

试验用犬粮由南京警犬研究所科技开发中心动物食品厂特制。其中，基础犬粮中不含有葡萄糖胺、软骨素及透明质酸钠。

本实验用透明质酸钠由华熙生物科技股份有限公司提供的贝熙TM饲料添加剂 透明质酸钠。各组犬用日粮营养成份见表1：

表1：实验用日粮营养成份表

（二）试验犬

在退役老年德国牧羊犬中，选取临床上具有典型髋骨关节炎症状的30头犬进行试验；外观症状主要表现为后肢行走异常、关节有压痛等；X线观察主要表现有关节间隙增宽、承压关节面不平整等情况。将这30头犬随机分成5组，每组6头犬，采用Lequesne 指数进行关节评分后，进行个别调整，降低组间评分差异。各组Lequesne评分情况如表2：

表2：实验初各组Lequesne评分均数表

经过方差分析，各组间Lequesne评分均数不存在显著性差异（＞ 0.05）。

（三）试验犬管理

所有试验犬按统一采用封闭式饲养管理，集中饲养，一犬一舍，定量喂食（按体重的2%计算饲喂量每天，约0.6kg），喂食对应：基础犬粮组喂食1组，葡萄糖胺+软骨素组喂食2组，0.03%HA组喂食3组，0.09%HA组喂食4组，葡萄糖胺+软骨素+HA组喂食5组。

每天早晚各饲喂一次，试验中注意观察各组犬的食欲，保证饮水，每天定时打扫犬舍卫生，每周给犬体进行一次体表梳理和清洁，每月进行一次驱虫处理。除试验测试外，不安排犬舍外运动。试验观测时间为24周。

（四）测试方法与评定标准

实验24周后，观察记录实验犬的关节表现及关节指数，观察记录疼痛或不适、晨僵、关节肿胀、步行痛等。

本试验采用国际骨关节的评分标准Lequesne 指数：

1.关节休息痛:正常行0分;轻度疼痛主1分;疼痛较重计2分;疼痛严重计3分。

2.活动痛:正常计0分;上下楼有症状计1分;上下楼疼痛计2分;行走时疼痛计3分。

3.压痛：正常计0分;重压时疼痛计1分；中度压痛计2分；轻度压痛计3分。

4.肿胀：正常计0分;稍肿计1分；软组织肿胀计2分；肿胀严重计3分。

5.晨僵：正常计0分;僵硬但很快恢复（小于5分钟）计1分；僵硬但短时间恢复（5～10分钟）计2分；僵硬但较长时间恢复（10分钟以上）计3分。

6.行走能力：行走没有限制计0分；步态行走异常计1分；步态行走异常缓慢计2分；步态严重缓慢计3分；

7.均分小于0.5，表示轻度功能障碍；均分处于0.5～1.33之间，表示中度功能障碍；处于1.33～2.33之间，表示重度功能障碍；大于2.33分以上表示功能障碍极其严重。

（五）统计分析

实验数据采用Excel方差分析，比较其P-value。差异判断标准为：P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著，具有统计学意义。

二、结果

试验24周后，Lequesne指数各项评分与分别与实验初相比，其休息痛、活动痛、压痛、肿胀、晨僵、行走能力等各项指标均有变化。各组实验犬的Lequesne指数平均数的变化情况如下图1所示：

图1 犬关节炎Leguesne评分变化

其中，实验2组与1组间不存在显著性差异（P＞0.05），说明在实验期间，添加0.5%的葡萄糖胺和0.2%的软骨素组，对犬的关节炎没有明显的改善作用。实验3组与1组间存在显著性差异（P＜0.05），说明在实验期间，添加0.03%的透明质酸，对犬的关节炎具有明显的改善作用。实验4组与1组间、实验5组与1组间存在极显著性差异（P＜0.01），说明在实验期间，添加0.09%的透明质酸钠，或者添加0.25%的葡萄糖胺、0.1%的软骨素、0.03%透明质酸钠组合，对实验犬关节炎具有明显的改善作用。具体方差比较数据见表3：

表3：实验末各组与第1组间的Lequesne值方差比较情况

第1组实验犬的Lequesne评分值，实验末（均值1.64）与实验初（均值1.44）相比，有所上升，但经过方差分析，二者差异不显著。表明实验犬的关节炎状态经过24周的发展，虽有加重趋势，但其差异不具备统计学意义。其方差比较情况见表4：

表4：第1组实验初与实验末Lequesne值方差比较

经过方差分析，实验末第3组与第2组间存在显著差异；说明在实验期间内，相比较添加葡萄糖胺和软骨素，添加0.03%的HA对犬关节炎具有明显的改善作用。第4组与第2组间、第5组与第2组间存在极显著差异；说明在实验期间内，相比较添加葡萄糖胺和软骨素，添加0.09%的HA或者添加葡萄糖胺+软骨素+HA组合，对犬关节炎具有极其明显的改善作用。其具体P值如表5：

表5：其它各组间Lequesne值方差比较情况

三、分析与讨论

透明质酸为关节软骨基质及滑液的主要成分，在关节腔内对修复细胞提供网状支持和营养环境、活化细胞表面特殊膜受体，并具有润滑、缓冲应力等作用。近几年，透明质酸钠常用于治疗骨关节炎，其治愈功能备受关注，在临床中的应用越来越多。目前，对于关节炎而言，常常通过注射外源性的HA，或口服含HA的营养物，能够补充关节滑液中消耗的HA，并促进修复磨损的软骨膜层，改善受损的关节；另外HA在关节内具有清除自由基功能，调节关节内巨噬细胞吞噬作用及白细胞趋化性，从而抑制炎症反应，阻止关节软骨退化。

通常，在许多先期的处方犬粮中，辅助治疗关节炎的营养添加物就是葡萄糖胺和软骨素，在本实验中，没有明显的效果，并非否定它们对修复关节软骨的作用，在本实验中没有药物介入，葡萄糖胺和软骨素的辅助治疗作用难以单独发挥。在许多HA治疗犬的关节炎的报道，有的是犬保健品，有的是添加在犬粮中，其组方一般葡萄糖胺+软骨素+透明质酸钠组合，其中透明质酸的添加量很少，主要是与其成本较高有关。本实验设5组，其中有3组分别添加了0.03%、0.09%和0.03%（另加葡萄糖胺和软骨素），相对剂量比较大，在没有其它药物干预的情况下，在24周内，实验犬的关节状态分别得到了明显的改善。但其剂量或者组方，还需要进一步优化，以期找到添加量更合理、治疗效果更好的组方。

本试验中，添加葡萄糖胺和软骨素，对犬关节炎的改善作用不如添加HA的组。在犬粮单独添加0.03%HA，能起到改善关节炎的作用，如果HA添加量达到0.09%，作用更加显著。在传统配方中添加少量HA，能非常显著地改善关节炎状态。在临床应用时，要保障犬的营养供应、同时限制犬运动。

从实验犬的实验末期表现来看，虽然第3组、第4组、第5组犬的关节炎从重度功能障碍状态改善到中度功能障碍状态，但离轻度功能障碍状态或恢复正常状态，还有较大差距。但也有个体，基本上恢复正常，其实验初的关节炎程度很微小，也就是说，HA或含HA组方，对轻度关节炎具有一定的治愈作用，对重度关节炎也具有明显的改善作用。

透明质酸对骨关节的修复是一个复杂的过程，在其治疗机理上，有些报道相互矛盾，因而需要进一步的研究，但其应用会得到进一步推广。