戴娟 郝青 郭远明 缪诗超 孙秀梅 李铁军 金衍建
摘要[目的]通过比较不同固相萃取小柱对除草剂的净化效果,建立8种除草劑残留的气相色谱分析方法。[方法]样品依次经15 mL正己烷和15 mL乙酸乙酯超声波萃取,再经中性氧化铝固相萃取小柱(1 g,6 mL)净化,用DB-35MS毛细管气相色谱柱分离质谱检测器检测。[结果]8种除草剂的质量浓度在5~500 μg/L与相应的峰面积呈线性关系。对样品进行加标回收试验,回收率为93%~112%。[结论]该方法可以用于海洋沉积物中8种除草剂的检测。
关键词固相萃取;除草剂;沉积物;气相色谱质谱法
中图分类号X 592文献标识码A
文章编号0517-6611(2019)18-0204-03
doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2019.18.056
开放科学(资源服务)标识码(OSID):
Determination of 8 Herbicides in Marine Sediments by Gas Chromatography-Mass Spectrometry
DAI Juan,HAO Qing,GUO Yuan-ming et al(Marine Fishery Institute of Zhejiang Province,Marine and Fishery Research Institute of Zhejiang Ocear University,Key Laboratory of Mariculture and Enhancement of Zhejiang Province,Zhoushan,Zhejiang 316000)
Abstract[Objective]By comparing the purification effects of different solid phase extraction cartridges on herbicides,a gas chromatographic analysis method for 8 herbicides residues was established. [Method]The sample was ultrasonically extracted with 15 mL of n-hexane and 15 mL of ethyl acetate,and then purified by a neutral alumina solid phase extraction cartridge (1 g,6 mL),and detected by a DB-35MS capillary gas chromatography column mass spectrometer.[Result]The mass concentration of the 8 herbicides was linear with the corresponding peak area in the range of 5-500 μg/L.The samples were spiked and recovered,and the recovery rate was 93% - 112%.[Conclusion]This method can be used for the detection of eight herbicides in marine sediments.
Key wordsSPE;Herbicides;Sediment; GC-MS
除草剂是一种在农业生产生活中的常见农药。2,4-D是第一个被合成的有机除草剂,自此以后,种类越来越广泛,主要有三嗪类、酰胺类、磺酰脲类和苯氧羧酸类[1]。目前为止,中国农药市场的除草剂产品有近百种。三嗪类、酰胺类的除草剂如莠去津、扑草净、乙草胺、丁草胺等,对鱼类、甲壳类有高毒性。有研究表明,大规模使用除草剂会对渔业水质、沉积物和生物体造成伤害,对生态安全和食品安全存在潜在威胁。比如水体和土壤中的丁草胺、乙草胺的残留可对水产养殖环境和生态环境造成破坏[2-3],甲草胺和乙草胺因其对环境和生物的影响在20世纪90年代被美国环保局定为B-2类致癌物质;三氮苯类除草剂阿特拉津,有类似于苯环的结构,光解和水解速度缓慢并且使用量较大,使其持久性吸附于土壤,残留于湖泊、河流、海洋生态环境中,其活性可保持数年,极易造成环境污染,甚至危害人类健康[4-5];除草剂二甲戊乐灵残留影响动物和人类激素的分泌和代谢,干扰内分泌系统,引发相关疾病[6-7]。由于生产生活的需要,这些除草剂仍在使用,当然对环境造成的破坏也在继续,该研究中选择的8种除草剂均是海洋和渔业活动中常见的除草剂,在近几年仍具有现实意义和研究价值。
据目前的研究来看,国内外对除草剂的研究一直没有间断,现在了解到的检测方法有气相色谱法[8]、液相色谱法[9-10]、气相色谱质谱法[11]和液相色谱串联质谱法[12]等,提取方法和净化方法有液液萃取[13]、固相萃取[14-15]、凝胶色谱净化[16-17]等。其中气相色谱法和液相色谱法是较传统的方法,质谱分析方法前处理的优点是条件简单、选择性好、检测限低,与其他比较起来气相色谱质谱仪维护简单,使用成本较低,被广泛使用于痕量经超声提取和固相萃取净化的样品。该研究采用气相色谱质谱法测定海洋沉积物中8种除草剂的回收率。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1仪器、试剂。
MS3涡旋振荡器(德国IKA公司);7890B/5977A气相色谱-质谱联用仪(美国Agilent科技有限公司);R-215旋转真空蒸发仪(瑞士Buchi公司);Centrifuge5810台式高速离心机(德国艾本德公司);氮吹仪(美国Inc公司);烘箱(上海一恒仪器有限公司)。丙酮、正己烷、二氯甲烷(均为色谱纯);无水硫酸钠;CNWBOND 硅胶SPE小柱(1 g/6 mL);CNWBOND 弗罗里硅土SPE小柱(1 g/6mL);CNWBOND中性氧化铝SPE小柱(1 g/6 mL)。
1.1.2样品来源。样品采集自浙江省三门及乐清的养殖区,采集时间為2017年4月,经冷冻干燥、研磨、过筛后密封保存于干燥器内待检测。
1.1.3标准品。8种除草剂标准品:氟乐灵、莠去津、西玛津、甲草胺、乙草胺、扑草净、二甲戊灵、丁草胺溶液浓度均为 100 mg/L。试验用水为二次蒸馏水。
1.2标准储备液配制
1.2.1标准储备液。8种除草剂100 mg/L标准溶液用移液枪各取300 μL,置于容量瓶中,加27 600 μL的正己烷溶液,配制成1 mg/L的除草剂标准溶液,储存于4 ℃的冰箱中。
1.2.2标准工作溶液。取1 mg/L标准溶液,配制成浓度梯度为20、50、100、200、500 μg/L的标准溶液。
1.3样品前处理
称取样品多份,各5 g,放入离心管中,样品中均加入1 mg/L的除草剂100 μL,各加15 mL的乙酸乙酯溶液,用涡旋振荡器振荡2 min,用离心机以5 000 r/min的转速离心5 min,提取上层清液于旋蒸瓶中。样品中再加 15 mL 正己烷,重复以上操作,提取上层清液于相应的旋蒸瓶中。旋蒸瓶中各加少量铜粉,静置24 h。将提取液在水浴 40 ℃的水中用旋蒸仪蒸发至干,用1 mL的正己烷定容,用涡旋振荡器振荡。
取1 g中性氧化铝固相萃取柱,加0.2 g的活性炭,先用5 mL的正己烷活化,配制的二氯甲烷∶正己烷∶丙酮(2∶1∶1)的洗脱液,活化萃取柱后接上旋蒸瓶,将浓缩的提取液转移至萃取柱中,加入4 mL洗脱液进行洗脱。将收集到的滤液进行氮吹,用1 mL正己烷定容,使用涡旋振荡器振荡确保检测样品能充分溶解在正己烷中,将定容后的溶液收集于1 mL气相小瓶,用气质联用仪测定。
1.4气相色谱-串联质谱分析条件
色谱柱的规格是30 m×0.25 mm×0.25 μm,并进行分离分析,载气使用高纯氮气(纯度为99.99%),选用EI离子源,选择离子扫描模式(SIM),脉冲不分流方式进样,进样量为1 μL,进样口温度为280 ℃,四级杆温度为150 ℃,传输线温度为280 ℃,离子源温度为 300 ℃,升温程序:70 ℃保持2 min,以25 ℃/min升至 150 ℃,再以3 ℃/min升至200 ℃,再以8 ℃/min升至 280 ℃保持10 min。8种除草剂的选择离子气相色谱图如图1所示。
2结果与分析
2.1萃取剂的选择
选用15 mL正己烷+15 mL乙酸乙酯先后萃取2次和15 mL正己烷+15 mL丙酮先后萃取2次,结果发现(图2),使用15 mL正己烷+15 mL乙酸乙酯萃取时,8种除草剂的浓度和回收率都相对较高(98%~105%),而使用15 mL正己烷+15 mL丙酮萃取时,整体的回收率相对较低(68%~102%)。因此试验中依次采取15 mL正己烷+15 mL乙酸乙酯超声波萃取2次。
2.2固相萃取小柱的选择
沉积物样品基质较为复杂,所以选择合适的固相萃取柱净化试样,减少对仪器的污染和检测物质的干扰是十分有必要的。在前处理过程中通常加入活化铜粉脱硫。在农残检测中,使用的固相萃取柱大多是佛罗里硅土柱、硅胶柱和氧化铝柱。此次试验对比了同等容量的3种柱子在相似的净化条件下对试样中杂质的去除效率及8种除草剂的回收率,结果表明(图3),使用硅胶SPE小柱时,8种除草剂的回收率为68%~83%;使用弗洛里硅土SPE小柱时回收率相对较低,为66%~79%;中性氧化铝固相萃取柱效果最好,整体的回收率为79%~95%。加入20 mg石墨化炭黑,可以更好地净化样品中的杂质。
经过比对分析数据发现,使用1 g中性氧化铝固相小柱净化效果较好,再加20 mg的碳粉有效去除沉积物中色素、腐殖酸等杂质,加标回收率高。最终,试验中选用1 g中性氧化铝SPE小柱。
2.3洗脱剂的选择试验中使用1 g中性氧化铝固相萃取小柱,关于洗脱剂的选择,进行了多组对比试验,结果表明(图4),使用二氯甲烷∶正己烷∶丙酮(2∶1∶1,V/V/V)的混合溶液4 mL洗脱总体的回收率相对较高(92%~109%);使用二氯甲烷∶正己烷(1∶1,V/V)的混合溶液洗脱时,除了氟乐灵、二甲戊灵和丁草胺的回收率相对较高(108%、109%、95%),莠去津、西码津、乙草胺、甲草胺、扑草净的回收率相对较低(4%~49%)。最终洗脱时先加5 mL正己烷,再加二氯甲烷∶正己烷∶丙酮(2∶1∶1,V/V/V)的混合溶液4 mL。
2.4方法的检出限、定量限及线性范围
配制除草剂标准工作溶液,准确移取适量除草剂标准使用溶液用正己烷分别配制成浓度为5、10、20、50、100、200和500 μg/L的8种除草剂标准混合工作溶液,供气相色谱-质谱分析,以标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标、被测组分浓度为横坐标绘制标准曲线,计算得出回归方程及决定系数(R2)。结果发现,8种除草剂标准工作溶液线性范围均为5~500 μg/L,此方法线性范围广,均达到相关标准,R2为0.997~0.999。
2.5样品分析分别对待检的海洋沉积物进行分析检测,检测结果见表1。结果表明,沉积物中扑草津和二甲戊灵均有检出,含量较少,氟乐灵有少量检出。
2.6基质分析
参照Matuszewski等[18]建立的方法考察基质效应的影响,选择几个沉积物作为代表,每个样品做6个平行样,分别测定了8种除草剂标准品溶液的色谱峰面积和(S1)和空白样品基质提取液添加标准溶液后的色谱面积(S2),以S2/S1(%)的比值来评价绝对基质效应[19]。试验结果表明,氟乐灵的基质效应为97%~102%,莠去津的基质效应为99%~108%,西玛津的基质效应为99%~107%,甲草胺的基质效应为99%~108%,乙草胺的基质效应为99%~106%,扑草净的基质效应为68%~97%,二甲戊灵的基质效应为40%~63%,丁草胺的基质效应为98%~109%。扑草净和二甲戊灵的基质效应波动较大,所以该试验的标准曲线采用空白样品基质提取添加标准溶液的方法。
3小结
该研究主要是选择合适的提取剂,再利用固相萃取净化、氣相色谱质谱检法检测海洋沉积物样品中的除草剂,方案中对提取剂、萃取剂以及固相萃取小柱都进行了优化,并选择合适量的吸附剂含量以及洗脱剂。样品采用先后用 15 mL乙酸乙酯和15 mL正己烷超声波萃取2次,提取液在旋蒸蒸干后加二氯甲烷∶正己烷∶丙酮(2∶1∶1,V/V/V)的洗脱液,将洗脱液转移至中性氧化铝固相萃取小柱洗脱,另在固相萃取小柱中加0.2 g活性炭净化,用气相色谱质谱仪分析,得出数据计算回收率。通过样品的加标回收检测得到,8种除草剂的回收率为93%~112%;该方法具有方便、精确度高、灵敏度高、机体干扰小和准确性好等优点,能够满足海洋沉积物样品检测的要求,并可进一步应用于土壤样品检测。
参考文献
[1]梁丽娜,郭平毅,李奇峰.中国除草剂产业现状、面临的问题及发展趋势[J].中国农学通报,2005,21(10):321-323.
[2]徐蒋来,胡乃娟,张政文,等.两种除草剂对稻田土壤微生物数量和酶活性的影响[J].水土保持通报,2015,35(4):168-171.
[3]罗方方,王艳君,叶玫,等.气相色谱-质谱法测定渔业水质中8种除草剂的残留量[J].渔业科学进展,2015,36(4):132-138.
[4]吴柳,豆小文,孔维军,等.阿特拉津残留快速检测技术研究进展[J].分析科学学报,2017,33(6):879-884.
[5]GAO Y P,FANG J G,ZHANG J H,et al.The impact of the herbicide atrazine on growth and photosynthesis of seagrass,Zostera marina(L.),seedlings[J].Marine pollution bulletin,2011,62(8):1628-1631.
[6]DANION M,LE FLOCH S,LAMOUR F,et al.Effects of in vivo chronic exposure to pendimethalin on EROD activity and antioxidant defenses in rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)[J].Ecotoxicology and environmental safty,2014,99:21-27.
[7]DANION M,LE FLOCH S,KANAN R,et al.Effects of in vivo chronic exposure to pendimethalin/Prowl 400on sanitary status and the immune system in rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)[J].Science of the total environment,2012,424:143-152.
[8]李卫建,聂志强,蔡彦明,等.气相色谱法同时测定农田土壤中13种三嗪类除草剂残留量的方法研究[J].农业环境科学学报,2009,28(1):211-215.
[9]李爱强,陈军,张宗祥.高效液相色谱法测定土壤中三嗪类除草剂[J].环境监测管理与技术,2008,20(3):44-46.
[10]杨志富,高川,韦婧,等.固相萃取-高效液相色谱法同时检测土壤中4种咪唑啉酮类除草剂残留[J].农药学学报,2014,16(4):433-438.
[11]CAMINO-SNCHEZ F J,ZAFRA-GMEZ A,P-REZ-TRUJILLO J P,et al.Validation of a GC-MS/MS method for simultaneous determination of 86 persistent organic pollutants in marine sediments by pressurized liquid extraction followed by stirbar sorptive extraction[J].Chemosphere,2011,84(7):869-881.
[12]平华,马智宏,王纪华,等.分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定农田土壤中12种除草剂残留[J].农药,2015,54(2):122-125.
[13]王晓春,刘庆龙,杨永亮.高效液相色谱—串联质谱法同时测定农田土壤中31种三嗪类除草剂残留[J].分析化学,2014,42(3):390-396.
[14]XU X Q,YANG H H,WANG L,et al.Analysis of chloroacetanilide herbicides in water samples by solid - phase microextraction coupled with gas chromatography-mass spectrometry[J].Analytica chimica acta,2007,591(1):87-96.
[15]任传博,田秀慧,张华威,等.固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定海水中13种三嗪类除草剂残留[J].质谱学报,2013,34(6):353-361.
[16]张华威,刘慧慧,田秀慧,等.凝胶色谱-固相萃取-气相色谱串联质谱法测定水产品中9种三嗪类除草剂[J].质谱学报,2015,36(2):177-184.
[17]陈溪,刘梦遥,曲世超,等.海产品、底泥、海水中扑草净药物残留量的液相色谱 - 串联质谱检测[J].化学通报,2013,76(2):183-186.
[18]MATUSZEWSKI B K,CONSTANZER M L,CHAVEZ-ENG C M.Strategies for the assessment of matrix effect in quantitative bioanalytical methods based on HPLC-MS/MS[J].Analytical chemistry,2003,75(13):3019-3030.
[19]李佩佩,张小军,严忠雍,等.免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱检测鱼虾中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸[J].食品科学,2016,37(24):257-261.