五味接骨胶囊对昆明种小鼠毒性的观察

王彦坤

（河南省通许县人民医院，河南 通许 475400）

五味接骨胶囊是我院制剂室研制的一种中药制剂，主要成分有马钱子、自然铜、地龙、枳壳、鸡蛋壳，具有散瘀止痛、接续筋骨的作用，用于治疗跌打损伤、骨折等。五味接骨胶囊中含有马钱子（有大毒），为保证临床用药安全，我们在河南大学药物研究所作了急性毒性试验，以急性毒性研究技术为指导原则［1］，观察昆明种小鼠灌胃（ig）给予五味按骨胶囊后的毒性反应及严重程度。

1 材料与方法

1.1 药材与药品

1.1.1 药材处方马钱子［制］，自然铜［制］、地龙、枳壳、鸡蛋壳组成，药材来源河南禹州市供应站，经鉴定符合《中国药典》一部收载药材，并对马钱子、自然铜依据《中药炮制大全》［2］进行炮制，鸡蛋壳自制，经洗、挑、拣，除去皮洗净即得。

1.1.2药品将五味药材混合均匀，粉碎成80目，装入0号胶囊制成五味制剂胶囊，80粒/瓶，每粒0.45 g。本次实验使用药品（河南省通许县人民医院制剂室提供，批号：20140211）。

1.2 试验材料

1.2.1 动物动物为昆明种小鼠（由河南省医学实验动物中心提供，合格证号：4100115），体质量18～22 g，雌雄各半，在实验观察1 w后，随机分组。基础饲料由河南省医学实验动物中心饲料厂提供，为全价营养颗粒饲料。

1.2.2 实验条件实验室温度：（23±3）℃，湿度：（55±10）%，自然光明7：00～19：00，自由饮水（常用自来水），定量投食，换气频率10～15次/h，笼具平均更换1次/3 d，更换后消毒，笼底垫料为刨花木屑，晾晒后消毒使用。

1.3 药物与试剂

将胶囊内药物4.05 g加入0.5%的羧甲基纤维纳（CMC-Na溶液，上海化学试剂采购供应站，批号：710419）中制成浓度为0.405 g/mL混悬药液备用。

1.4 实验与分组

1.4.1 预试验分组取小鼠20只，随机分为5组，每组4只，雌雄各半。第1组小鼠灌胃溶积0.2 mL/10 g，4只小鼠均死亡；第2组小鼠灌胃溶积0.18 mL/10 g，3只小鼠死亡。取浓度0.405 g/mL混悬药液5mL稀释成0.135 g/mL，备用。第3组小鼠灌胃溶积0.2 mL/10g，1只小鼠死亡；第4组小鼠灌胃溶积0.18 mL/10 g，无小鼠死亡；第5组小鼠灌胃溶积0.19 mL/10 g，1只小鼠死亡。故4/4死亡最小剂量为8.1 g/kg；0/4死亡最大剂量为243 g/kg。

1.4.2 试验分组取小鼠160只，体质量18～22 g，随机分为8组，每组20只，雌雄各半。试验前禁食12h，自由饮水。第1～7组为五味接骨胶囊组，相邻高、低组给药剂量比值为1∶0.8，则各组给药剂量分别为：8.1 g/kg、6.48 g/kg、5.184 g/kg、4.1472 g/kg、3.3178 g/kg、2.6542 g/kg、2.1234 g/kg。第8组为0.5%的CMC-Na溶液对照组。各小鼠灌胃溶积为0.2 mL/10 g。采用低比稀释法配药：根据预试结果，小鼠全死剂量Dmas＝8.1 g/kg、k=0.8、n＝20，小鼠体质量为18～22 g，每组20只，总体质量约为400 g，用药量为0.2 mL/10g（20 mL/kg）。

1号药液浓度＝Dmax/用药量=8.1 g/kg/20 mL/kg=0.405 g/mL。

每组药液量=每组小鼠总体质量×用药量=400 g×20 mL/kg=8 mL（最少8 mL，为配药方便并留有余地，取10 mL）。

1号药液量＝每组药液量/（1-k）=10/（1-0.8）mL=50 mL。

精确配制浓度为0.405 g/mL混悬药液50 mL，从中吸取10 mL为1号液供第1组用药。在余下的40 mL药液中加入0.5%的CMCNa溶液10 mL，混匀后，从中吸取10 mL为2号液，供第2组用药。依此类推，配制出一系列比值为1∶0.8的药液。

1.5 观察指标

包括一般指标（如动物外观、行为、分泌物、排泄物等）；死亡情况（死亡时间、死亡时反应等）。大体解剖所有小鼠，器官出现异常时进行组织病理学检查。

1.6 统计学方法

采用改良寇氏法计算LD50：

注：Xmax为最大剂量的对数值，∑P为各组小鼠死亡率总和，i为相邻两组剂量的对数之差。

注：Sx50为LD50的标准差，n为各组小鼠数，∑P为各组小鼠死亡率总和，∑P2为各组小鼠死亡率平方的总和，i为相邻两组剂量的对数之差。

LD50的95%平均可信限=LD50士4.5LD50Sx50。

2 结果

2.1 一般指标

用药后1～7组小鼠均出现明显镇静、闭目等中枢抑制现象，表现为自主活动减少；皮毛、清洁度、两便均无异常；瞳孔、眼险、分泌物均正常，未见流泪、流涎等现象。对照组小鼠均未出现明显兴奋躁动、竖尾等兴奋现象；皮毛、清洁度、两便均无异常；瞳孔、眼险、分泌物均正常，未见流泪、流涎等现象。

2.2 死亡情况

1～7组小鼠均出现死亡，死亡时间为灌胃后30～85 min。死亡前均出现明显的兴奋不安，逐渐转为精神萎磨不振，并出现四肢强直性痉挛。对照组无小鼠死亡。各组死亡情况见表1。

2.3 计算结果

按改良冠氏法计算：

LD50的95%平均可信限＝LD50±4.5×LD50×SX50＝ 3.8361±4.5×3.8361×0.02318＝3.8361±0.4001

2.4 脏器

各小鼠于给药后第14天处死解剖，各器官体积、颜色、纹理均正常。

表1 1～7组小鼠死亡情况

3 讨论

五味接骨胶囊中马钱子为马钱子科植物马钱子（Strychnos nux-vomicaL）或云南马钱子（S.PierrianaA .W.Hill）的干燥成熟种子，味苦、寒、有大毒，归肝、脾经，且有通络止痛、散结消肿，用于风湿顽痹、麻木瘫痪、跌打损伤、面神经麻痹、坐骨神经痛等。马钱子虽有大毒，却临床疗效显著，应用千年而不衰，被称为“毒药猛剂，善起沉疴”的典范。药以用量而能，药以用量而用［3］，马钱子用量范围为0.3～0.6 g。马钱子含总生物碱2%～5%，主要为番木鳖（士的宁）及马钱子碱，番木鳖碱约占总生物碱45%左右，是主要的有毒成分。为减少马钱子的毒性，使用之前常需炮制。一般炮制方法为砂炒，实验发现，砂炒马钱子因砂烫时受热程度不同，番木鳖碱的含量亦不同，当温度达到210℃以上，该碱的含量降低，温度达290℃时，颜色变成褐色，番木鳖碱含量持续降低，但治疗效果也大大降低［4］。为防止番木鳖碱受热过分分解，砂烫温度应控制在220℃～240℃，5～6 min即可，颜色一般以棕色至棕褐色为度［5］。我院炮制马钱子合格，用量适宜，为临床用药安全，特对五味接骨胶囊进行小鼠灌胃［ig]毒性试验，结果显示，五味接骨胶囊LD50为3.8361（灌胃），相当于临床用量的56.83倍，提示五味接骨胶囊具有一定的毒性，但毒性较低，对机体产生的毒性反应及严重程度较低，临床用药安全。