血清维生素D 与乙肝肝硬化疾病的相关性分析

陈晓艳 张一文 范妮

作者单位：1 山东中医药高等专科学校西医教学部，山东 烟台 264100；2 青岛市第六人民医院一病区，山东 青岛 266000

维生素D除参与钙磷代谢，还可参与细胞的增殖、分化及凋亡，具有免疫调节、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物学功能[1]。维生素D在肝内活化为25-羟维生素D（25-hydroxyvitamin D，25（OH）D），被认为是测定维生素D水平最可靠的指标，可反映机体维生素D状态。乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）损伤肝细胞线粒体内25-羟化酶的活性，减少了25（OH）D的生成。同时肝病患者维生素D减少又会加速肝脏疾病本身的进展。维生素D缺乏已被证明会增加肝硬化患者的总体死亡率和感染风险，与晚期肝癌和预后不良有关[2]。本文收集青岛市第六人民医院就诊的乙型肝炎肝硬化患者327例，通过检测患者血清维生素D含量、乙型肝炎病毒复制水平及肝纤维化程度，就两者之间的相关性进行探讨分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2016年11月—2018年11月在青岛市第六人民医院就诊的乙型肝炎肝硬化初治患者327例，均经临床表现、生化指标、腹部B超或CT等检查确诊，诊断符合2015年《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》标准[3]。排除合并其他嗜肝病毒感染、药物性肝损害及酒精性肝病患者。其中男215例，女112例；年龄35～77岁，平均年龄（48.5±8.3）岁。患者均知情同意，并经医院伦理委员会批准。

1.2 检测方法

所有受试者取晨起空腹静脉血3 mL，以3000 r/min离心20 min，分离血清待检。采用酶联免疫法检测血清25（OH）D含量，＜30 ng/mL者列为实验组；≥30 ng/mL者列为对照组[4]。荧光定量PCR法检测血清HBV-DNA水平，放射免疫分析法检测肝纤维化指标：透明质酸（hyaluronic acid，HA）、层粘连蛋白（laminin，LN）、Ⅲ型前胶原（type Ⅲ procollagen，PC-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（type Ⅳ collagen，C-Ⅳ）。

1.3 观察指标

检测血清HBV-DNA定量、透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0软件对数据进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，计量资料组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 根据血清25（OH）D含量分组情况

检测327例乙肝肝硬化患者，血清25（OH）D含量＜30 ng/mL者246例，列为实验组；＞30 ng/mL者81例，列为对照组。实验组男性159例，女性87例，年龄37～77岁，平均年龄（49.3±8.1）岁；对照组男性56例，女性25例；年龄35～77岁，平均年龄（48.2±9.5） 岁。两组在性别、年龄无显著性差异。

2.2 不同组别病毒学结果比较

实验组HBV-DNA（6.17±2.12）log10 copies/mL，对照组HBV-DNA（4.93±1.96） log10 copies/mL，实验组明显高于对照组，有显著性差异（t=4.650，P=0.000）。

2.3 不同组别肝纤维化指标比较

见表1。实验组HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ明显高于对照组，有显著性差异（P＜0.05）。两组LN无显著性差异（P＞0.05）。

3 讨论

维生素D能刺激细胞免疫，活化单核细胞，抑制Th1细胞激活，减少白介素（IL）-2等细胞因子的分泌，促进Th2细胞分泌IL-4、IL-5等抗炎因子[5]。这些机制对于乙肝病毒感染的细胞免疫至关重要。本研究发现，实验组HBV-DNA水平明显高于对照组，提示25（OH）D不足与HBV高复制相关，这与多项研究结果一致。Yu R等[6]发现，25（OH）D水平是病毒学应答的独立预测因子，但与乙型肝炎e抗原（HBeAg）血清转化率或丙氨酸氨基转移酶（ALT）正常化无关。He LJ等[7]报道CD3+、CD4+T淋巴细胞比例及CD4+/CD8+比值均随着血清维生素D水平的升高而显著升高，但CD8+比例有所下降；HBeAg、HBsAg、HBV DNA滴度阳性率随血清维生素D的增加而下降。

表1 不同组别患者肝纤维化指标比较 （μg/L）

表1 不同组别患者肝纤维化指标比较 （μg/L）

组别 HA LN PC-Ⅲ C-Ⅳ实验组 325.1±95.6 177.2±36.2 322.7±119.4 251.8±96.8对照组 290.3±86.3 185.5±55.4 275.2±98.3 182.5±84.1 t 值 2.909 1.552 3.236 5.765 P 值 0.004 0.122 0.001 0.000

维生素D与心肌、肾、肺等多种组织器官的纤维化相关。25（OH）D在肝脏产生，Shan B等[8]研究9个关键单核苷酸多态性，发现多种基因与维生素D代谢相关。Reiter FP等[9]通过研究硬化性胆管炎小鼠，发现1，25（OH）2D3可下调肿瘤坏死因子受体1和CD11b+细胞的表达，改善肝脏炎症损伤，延缓肝纤维化进程。Zhu L等[10]应用 Vit D 缺乏的食物饲养小鼠后，发现Vit D 缺乏可以通过增加 Fas 和 FasL，降低Bcl2和Bclx，从而引发肝实质细胞凋亡，并激活 HSC 诱导肝纤维化。Papapostoli I等[11]研究发现，短期应用维生素D 20 000 IU/周，4周，可改善肝脏炎症进展。Jamil Z等[12]认为，晚期肝硬化患者（Child-Pugh B级和C级）应定期检查维生素D水平，必要时需以补充，以改善肝硬化患者的总体状况。亦有研究得出不同结论， Ren Y等[13]认为，25（OH）D与肝脏炎症活动度相关，但与纤维化程度并无相关。出现这种争议必须考虑到，血清维生素D水平受人种、地理位置、年龄、饮食习惯、服饰、光照条件等多种因素的影响，不同实验显示这种看似矛盾的结论，可能与这些影响因素有关。

本研究以HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ、LN作为肝纤维化的观察指标。HA是肝细胞外间质中的蛋白多糖，LN是构成细胞间质的非胶原糖，PC-Ⅲ反映肝内胶原合成，C-Ⅳ是基底膜的主要成分。测定上述指标的血清含量，可反映肝脏内皮细胞、储脂细胞、成纤维细胞的变化。本研究发现，实验组肝纤维化指标HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ明显高于对照组，提示25（OH）D不足与肝纤维化进程相关。两组LN未表现显著差异，可能与肝硬化所致门静脉压力升高、食管胃底静脉曲张程度相关。

综上所述，慢性乙型肝炎肝硬化患者普遍存在维生素D缺乏，且血清维生素D含量低下与HBV复制高水平、肝纤维化程度进展相关。应维持乙肝肝硬化患者的血清维生素D的正常水平，以抑制HBV复制，延缓肝脏纤维化进程。采用血清维生素D含量作为肝硬化的严重程度的评价指标，维生素D作为乙肝抗病毒的辅助治疗等方面也有广泛的研究前景。由于维生素D在体内的靶细胞种类很多，各种反馈调节机制复杂，如何补充维生素D来控制乙型肝炎患者病情发展，同时避免高钙血症的发生还有待进一步的探索。