胡晓薇 朱卫中 周慧敏 赵恩慧 叶明建 李金美
浙江省丽水市人民医院(323000)
安全套是实施安全节育的主要工具,也是人类辅助生殖技术(ART)不可或缺的辅助用品。为了解目前市场主流安全套的精子生物毒性,本研究进行了精子生物毒性分析。
西班牙SCA精子分析仪用于精子活力测定。
收集男科实验室当天完成精液分析且结果正常的精液20份,用含10%HAS的缓冲输卵管液培养液(SAGE产品,批号18200068)稀释混合精液,配制成精子浓度50×106/ml的精子应用液。取精前签署“剩余精液用于科研的知情同意书”。
从当地安全套最大批发商处获取市场销量最大的10个品牌共20个型号的安全套各2个包装。另取本院生殖中心常规阴道B超检查用金香安全套(无油)、取卵用的橡胶B超探头隔离护套(无油)和专用于ART的MaleFree SCD-Ⅰ型精液采集器(无油)各2只,所有安全套均在使用有效期内。23种安全套的品牌、型号、生产厂家与批次见表1。
表1 16个品牌23种安全套的型号、生产厂家与批次
1.4.1样本制备取各型号安全套1个,编号。 打开外包装,将安全套外展至5~6cm。 用加样器吸取混匀的精子应用液1.0ml加入到安全套球囊部,将安全套平放在震荡器托盘上并平压,使精液与安全套内表面充分接触,低速震荡3min,然后用加样器将精液转移至另一个带盖小试管。
1.4.2油滴观察取小试管内精子应用液10μl于载玻片上覆盖玻片,高倍镜镜检5个视野油滴数量。满视野油滴为“++++”,>1/2视野为“+++”, 1/2~1/4视野为“++”,10~20个油滴/视野为“+”,1~9个油滴/视野为“少量”,5个视野中油滴时有时无为“偶见”。至60min再次观察油滴数量。
1.4.3精子活力检测至第4min,分别取试管底部精子应用液各10μl至两块Makler计数板,至第5min依次在精液分析仪上检测精子活力,记录前向运动精子(PR)、非前向运动精子(NP)及不动精子(IM)的比率(%)。取二次结果平均值。至60min,重复精子活力检测。
1.4.4正常精液对照在开始1.4.3步骤前,直接检测精子应用液的精子活力,作为正常精液对照。
1.4.5检测条件所用耗材均为精子存活试验合格的胚胎实验室一次性用品,实验温度24~26℃。
精子存活指数=各型号安全套的活动精子(PR+NP)比率/正常精液对照的活动精子(PR+NP)比率。精子存活指数<0.80为有生物毒性[1]。
23种安全套中有18种的精子存活指数<0.80,其中有7种精子存活指数<0.50,表明在5min后有> 50%的精子被杀灭存在生物毒性。有5种安全套的精子存活指数>0.80,其生物毒性相对较弱,分别是市场上流通的爱超(活力)、杰士邦(爽滑倍润)、比翼鸟安全套和生殖中心用于阴道B超检查的金香安全套(无油)、MaleFree SCD-Ⅰ型精液采集器(无油)。取卵用的橡胶B超探头隔离护套(无油)的精子存活指数仅0.13,具有较强的杀精效果。
23种安全套的存活指数均<0.80,表明对精子有生物毒性。其中2种无油安全套的存活指数相对降幅较小,分别为0.79和0.79;其余21种安全套的存活指数均≤0.50,表明60min后有≥50%的精子被杀灭。
23种安全套除了3种无油安全套外,5min内均见到+~+++不等油滴,60min后油滴明显减少, >50%油滴消失。
品牌相同而型号不同的含油安全套检测结果相近,如6种杜蕾斯、2种亚马逊和2种激情地带安全套。而品牌相同的金香(无油)和金香(含油)安全套则结果差异明显。 16个品牌23种型号安全套的生物毒性结果见表2。
表2 16个品牌23种型号安全套的生物毒性
*精子存活指数 ≥0.80**精子存活指数≤0.50△说明书标明润滑剂成分为硅油▲说明书注明“未添加杀精剂” R:前向运动精子;NP:非前向运动精子;IM:不动精子
市场上的安全套采用天然乳胶为基质材料,添加防老剂、促进剂、硫化剂等橡胶助剂,增强安全套的物理化学性能,但对精子具有生物毒性[2-6]。根据添加润滑剂的不同, 安全套可分为硅油型和水溶性两大类,有的安全套在润滑剂中加入杀精剂与安全套的胶膜构成双重屏障[2,7-8]。
国家标准GB7544-2009对安全套添加润滑剂没有强制要求[9],但生产厂家为增加安全套的润滑度,一般在安全套的内外膜添加了硅油或其它水溶性润滑剂[5]。本次实验的市场主流的13个品牌20种安全套全部添加了润滑剂(有油),其中有17种安全套的外包装上注明润滑剂中不含杀精剂,但所有安全套在与精液接触5min后精子存活指数均<0.80,提示安全套皆有精子生物毒性。那么这些精子生物毒性是来自安全套的乳胶薄膜,还是与添加的润滑剂有关。
硅油为无色、无味和透明的油状液体,不溶水,广泛应用于医疗及日化用品[10-12]。本文结果显示硅油及其它润滑剂微溶于精液,其油滴随着时间延长逐渐减少或消失。然而无油的金香安全套和MaleFree SCD-Ⅰ型精液采集器的精子存活指数明显好于其它有油的安全套,似乎佐证硅油或其它润滑剂存在精子生物毒性。我们认为硅油或润滑剂本身没有毒性,而是胶乳基质、添加剂以及生产过程中产生的有害物质具有脂溶性,溶解于安全套的硅油或润滑剂中,从而表现出较明显的杀精作用。而无油的安全套与精液接触的时间短暂,其毒性尚未彻底释放,故表现不出明显的杀精能力。但无油的橡胶B超探头隔离护套却表现出很强的杀精效果,可能是产品材质或质量问题所致。
余美等[13]报道,安全套作为阴道B超探头的隔膜,可将安全套表面具有杀精功能的润滑液残留在女性阴道内,起到了抑制或杀死精子作用,从而影响卵泡监测妇女的正常受孕。本文结果也提示市场流通普通和生殖中心专用的安全套均具有精子生物毒性,若使用了较强精子生物毒性的安全套,会产生诸多副作用。
综上所述,用于ART相关检查或治疗所需的安全套,应该选择未添加杀精剂和无油的产品,在精子存活实验进行筛查,选用低精子生物毒性的安全套。