抗核抗体联合肿瘤标志物在肺癌早期诊断中的应用价值

麦涛，刘琳，王加强，谭泰昌，苏杨

(1.四川省医学科学院·四川省人民医院检验科，四川 成都 610072；2.西藏自治区人民政府驻成都办事处医院检验科，四川 成都 610041)

原发性肺癌(肺癌)早期表现隐匿且多样化，易被忽略[1]。因此，早期发现和鉴别诊断对临床有效治疗和良好预后非常重要。目前，肺癌诊断依赖组织学和影像学(如低剂量螺旋CT、多排CT)，但其假阳性率较高，常需随访[2]。此外，多次辐射暴露及侵入性操作，也使患者的心理负担及经济负担增加[3]。神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)、鳞状上皮细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen，SCC)、细胞角蛋白片断21-1(cytokeratin 19 fragment，CYFRA21-1)等对肺癌的诊断、疗效观察及预后判断具有一定临床价值，而单个指标因敏感性及特异性不高，对各种组织类型肺癌的早期诊断应用价值不大。为提高肿瘤标志物在肺癌诊断方面的敏感性，联合检测成为一种趋势[4]，其可提高诊断的敏感性，但也因特异性较低，往往易导致误诊。寻找特异性及敏感性高的新肿瘤标志物或肿瘤标志物的新组合来提高诊断的质量已成为新的研究热点。研究[5]证实，自身抗体可由体内肿瘤细胞诱导产生，且可以作为特异性肿瘤标志物，为肿瘤诊断提供重要信息。本研究拟通过自身抗体联合肿瘤标志物检测及其对肺癌诊断性能指标的比较，探讨其在肺癌早期诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

43例肺癌患者(肺癌组)和50例肺部良性疾病患者(肺部良性疾病组)分别来自2017年1月至6月四川省医学科学院住院者和就诊者。肺癌组中，男性29例，女性14例，年龄36～80岁，男性平均年龄(63±14.5)岁，女性平均年龄(50±9.5)岁；肺部良性疾病组中，男性31例，女性19例，年龄22～73岁，平均(48.5±12.5)岁。另选50例健康体检者作为对照组，其中男性25例，女性25例，年龄28～65岁，平均(44.5±10.5)岁。所有病例均经临床、病理及影像等资料确诊。排除标准：所有参与实验者均未患自身免疫性疾病。

1.2 方法

入选研究对象取空腹静脉血4 mL，收集血清，保存待检。NSE、SCC、CYFRA21-1为化学发光磁珠法，按照试剂生产商推荐操作说明上机检测；抗核抗体(ANA)为间接荧光法，根据试剂生产商提供的操作说明，以1∶10；1∶32，1∶100，1∶320，1∶1 000，1∶3 200滴度系列稀释，以明确最终滴度。3项标记物阳性界定值为 NSE>15.2 ng/mL、 SCC>1.5 ng/mL、CYFRA21-1>3.3 ng/mL。ANA以荧光显微镜20倍放大，能清晰观察到Hep2细胞结构时的滴度为阳性。联合应用Ⅰ：NSE+SCC+CYFRA21-1中一个指标阳性即判为阳性；联合应用Ⅱ：ANA+(NSE+SCC+CYFRA21-1)中ANA阳性同时NSE+SCC+CYFRA21-1三者中有一个阳性，则判为阳性。

NSE、SCC、CYFRA21-1三项肿瘤标志物检测试剂购自安图生物有限公司，使用仪器为安图生物有限公司产AUTO LUMO A2000全自动化学发光测定仪。抗核抗体检测试剂购自欧蒙医学诊断(中国)有限公司，观察所用荧光显微镜为EUPOSTARⅢ PLUS荧光显微镜。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 各组血清ANA、NSE、SCC、CYFRA21-1检测水平比较

对ANA结果采用Log10X方式(X为检测样本ANA滴度)转换，就这四项指标在三组实验对象中的分布进行采用单因素方差检验进行统计分析。肺癌组患者血清 ANA、NSE、SCC、CYFRA21-1水平均高于良性疾病组和对照组，差异比较有统计学意义(P<0.05) 。而良性疾病组与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 肺癌组和其他受试组血清中ANA及肿瘤标志物检测水平比较

*P<0.05，与良性疾病组和对照组相比；#P>0.05，与对照组相比。

2.2 抗核抗体与肿瘤标志物不同组合检测对肺癌诊断的性能评价

以43例肺癌患者作为实验组，以50例健康体检者和50例肺部良性疾病者为对照组，计算各个指标及其组合应用的各项诊断性能评价指标，分析肿瘤标志物单项以及两种联合应用检测对肺癌患者的检出效能。结果表明，肿瘤指标联合应用Ⅰ或Ⅱ明显优于单个肿瘤指标的检测性能。联合应用Ⅱ与Ⅰ相比，敏感性差异无统计学意义(P>0.05)，而特异性差异有统计学意义(P<0.05)。见表2-表4。

表2抗核抗体与肿瘤标志物联合应用对肺癌诊断的评价性能指标

检测指标敏感性(%)特异性(%)阳性预测值(%)阴性预测值(%)约顿指数ANA70.6784.2167.3987.630.55NSE66.6771.0560.4285.260.38SCC40.0086.8456.6676.990.27CYFRA21-166.0075.1125.8383.330.41联合应用Ⅰ81.2073.0056.4590.120.54联合应用Ⅱ78.3381.2164.1590.000.59

表3 两种肿瘤标志物组合阳性检出结果比较(n=43)

联合应用Ⅰ及Ⅱ两者比较，χ2=2.25，P>0.05。

表4 两种肿瘤标志物组合阴性检出结果比较(n=100)

联合应用Ⅰ及Ⅱ两者比较，χ2=6.13，P<0.05

3 讨论

CYFRA21-1、SCC、NSE等肿瘤标志物在肺癌早期敏感性较低，特异性较差，因此对肺癌的早期诊断价值有限[6]。综合考虑检测成本、患者负担等因素。目前临床上采取SCC+NSE+CYFRA21-1三联检测，使其诊断效率得到较大提高[7]。本研究结果也证实，三种标志物在肺癌患者、肺部良性病患者及健康人群中的分布均具有统计差异(P<0.05)，可以用于肺癌的早期诊断。但方法学性能分析表明，其敏感性较好，特异性较差。这将导致肺癌早期筛查时会存在较高的假阳性率，给患者带来精神和经济方面的负担。因此，在肺癌早期发现和诊断方面，其临床应用价值是有限的。

在肿瘤发生发展的过程中，免疫系统发挥着重要作用。实体肿瘤自身免疫的研究[8]表明，肿瘤的发生过程中，肿瘤细胞凋亡或坏死过程所释放的异常蛋白即肿瘤相关抗原可诱导机体产生特异性的免疫反应。因此，在肿瘤患者血清中不但可检测到多种肿瘤标记性抗原和小分子，还可检测到其相关自身抗体。而且这些自身抗体在患者尚未出现临床症状、影像检查未能发现时就已存在，这既表明体液免疫对识别肿瘤抗原起着作用，同时也提示其可以作为一个特异性肿瘤标志物，为肿瘤诊断提供重要信息。研究[9]显示，虽然肿瘤早期只有低浓度的肿瘤抗原被释放入血，但仍将刺激机体产生高滴度的相应抗体，即肿瘤相关自身抗体(tumor-associated autoantibodies，TAAs)。另有研究[10]表明，TAAs 具有早期即可检测出、较高特异性与敏感性、样本稳定、检测方法简单等特征，因而被认为有望成为新一代血清肿瘤标志物，用于监测肿瘤发生发展、监测治疗反应。ANA现已定义为针对细胞中所有成分包括细胞核、细胞浆、细胞骨架等自身蛋白的抗体，目前主要用于协助自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、非风湿关节炎等的诊断、疗效监测和预后判断。但是ANA(IIF)检测技术是通过与玻片上固定的肿瘤细胞即Hep2细胞反应最终得到的抗体滴度结果，因此，也可用于检测肿瘤患者血清TAAs[11]。本研究结果表明，在肺癌患者中存在较高的ANA阳性率。这提示自身抗体在肺癌病程进展中可能存在重要作用，具体机制需进一步研究。对联合应用Ⅱ对肺癌的早期诊断性能的分析结果表明，其敏感性、特异性均较高，假阳性较少，更适合用于肺癌的早期诊断。

有学者利用筛选出来的肺癌特异性自身抗体来进行早期诊断，取得较好的效果。对其方法学性能分析结果显示，灵敏度为57.89～62%，特异度为82.13～89.80%，AUCROC为0.69～0.769。其敏感性相对高于各自身抗体单项检测[12]。但总体而言，其仍存在敏感性不高的问题，这可能与所选用的肺癌自身抗体仅占整个肺癌肿瘤自身抗体一部分有关。且这种肺癌自身抗体组合联用，检测费用价格昂贵，给病人带来较大经济负担，也限制了其在临床上的广泛应用。而本研究所分析的ANA与肿瘤标志物的联合应用，价格相对较低，更有利于临床应用。

综上所述， ANA 联合NSE、SCC、CYFRA21-1肿瘤标志物检测可以显著提高检测的敏感性，同时减少假阳性，对临床应用具有重要参考意义。