液相色谱串联四级杆质谱联用测定苹果中的乙霉威残留

房崇琴 李红梅

摘 要：建立了一种液相色谱串联四级杆质谱联用测定苹果中乙霉威残留的实验方法。液相色谱仪器上的色谱柱采用安捷伦公司的C18（50mm×2.1mm; 5?m），此方法的流动相是乙腈（A有机相）+甲酸水溶液（0.1%）（B无机相）体积比为60：40作为流动相，磨碎的苹果样本经过提取浓缩后，采用液相串联四级杆质谱检测器测定苹果样本中的乙霉威残留量，本研究结果表明乙霉威农药的线性范围为100～1000ng/mL，在苹果样本中乙霉威最低检出限为0.5?g/kg，平均加标回收率80.2%-85.9%，RSD为3.63%-5.52%。该方法适用于苹果中乙霉威残留量的分析。

关键词：乙霉威;液相串联四级杆质谱;残留量

乙霉威学名N-3，4-二乙氧苯基氨基甲酸异丙酯是一种效果非常显著的内吸性杀菌剂，能够有效杀灭蔬菜水果的等多种病害，乙霉威还有防治作用，防治灰霉病上具有显著的效果，所以作为一种常用的杀菌剂用在蔬菜水果上面。我国国家标GB 2763-2016《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》里面苹果没有限量值，是不允许使用的一种杀菌剂，而在平时的检测中阳性率比较高，所以本文研究探讨液质串联四级杆联用仪方法检测苹果样本中乙霉威的残留量，为日常检测苹果中乙霉威残留量準确快速分析提供了定性定量依据。

一、材料与方法

1.材料和仪器。100μg/mL乙霉威（溶剂：甲醇，北京坛墨质检科技有限公司）;苹果（利群超市购买）;乙腈（色谱纯）（上海弗霓生物科技有限公司）;甲酸、氯化钠（分析纯）（国药）;超纯水机（Millipore）;高速组织捣碎机OS-1（上海标本模型厂），快速冷冻离心机BIOFUGE（美国热电）， 带电喷雾离子源（ESI）的Agilent 6410B 液相色谱-串联质谱仪 （美国，安捷伦）。

2.实验方法

（1）液相LC色谱条件。色谱柱：安捷伦公司的C18（50mm×2.1mm; 5?m）柱子，柱温度35℃;并且设定流动相流速为0.2mL/min;样品进样体积：1μL，方法的流动相：乙腈（A有机相）+0.1%甲酸水溶液（B无机相）=60：40，运行时间10min。

（2）MS/MS质谱条件。质谱电喷雾离子源（ESI），扫描方式为正离子模式（+），检测方式为多反应监测MRM模式，乙霉威定量的母离子峰及子离子峰（m/z 268.1和m/z 152.1）。质谱检测器的毛细管电压：5000V，干燥气流速为10L/min，质谱的离子源温度：700℃。

（3）标准溶液配制。称取乙霉威标准品0.1mg用色谱纯的甲醇溶液分别稀释为100、200、400、800、1000ng/mL的各个浓度梯度点的标准曲线溶液。

3.样品制备。准确称取20g左右磨碎好的苹果样本于80mL离心管中，在离心管加入40mL乙腈和5g氯化钠（分析纯），用OS-1高速组织捣碎机匀浆提取1min后放入高速冷冻离心机中离心速率为5000r/min离心5min，离心完毕后取出离心管中上清液20mL，在40℃水浴浓缩至干，残渣用1mL乙腈溶解，过滤膜供仪器测定。

二、结果与讨论

1.LC流动相选择。实验中比较了不同流动相对C18色谱柱分离苹果样品中乙霉威效果的影响，结果如下：首先乙腈（A有机相）+甲酸水（B无机相）跟甲醇（有机相）+水（无机相）流动相进行了比较，甲醇+水流动相分离乙霉威会出现拖尾现象，分离度达不到实验要求，乙腈（A有机相）+0.1%甲酸水（B有机相）作为流动相分离度好，达到实验要求。

2.质谱条件MS-MS的选择。乙霉威的分子式为C14H21NO4，相对分子质量为267.32，在电喷雾离子源（ESI）中得氢带正电荷（+）。在质谱中乙霉威容易被轰击丢失掉氨基甲酸异丙酯碎片（分子量116），所以其子离子检测为m/z 152.1，乙霉威标准品的ESI（+）质谱图和MRM图如下图1、图2，因此苹果样本中乙霉威残留量的定性定量采用母离子（m/z 268.1）和子离子（m/z 152.1）。

3.乙霉威检测方法的线性方程和相关系数

乙霉威按照1.2.3方法配制的五个浓度的标准溶液进行分析检测，以纵坐标仪器的响应值-横坐标乙霉威的浓度作回归曲线。结果显示：乙霉威标准品浓度在100～1000ng/mL之间标准曲线的线性关系良好，相关系数r2为0.998。

4.乙霉威检测方法的精密度、回收率和检测下限。以未检出乙霉威的苹果样本制作本次实验的空白样品，在每份空白样品中分别添加0.5、1、10?g/kg三个水平的加标回收率实验，每种加标浓度平行试验进行6次，得到苹果样本中乙霉威平均回收率跟相对标准偏差RSD（n=6）见表1，并在实验中以乙霉威基线的信噪比3为标准，测得样本中乙霉威标准品的检出限（LOD）为0.5?g/kg。说明此方法的回收率和精明度能够达到实验要求。

5.样品测定。根据本实验建立的方法对实际苹果样本进行检测分析，乙霉威标准品色谱图见下图3，乙霉威标准品出峰时间在1.65min左右，从图中可以看出，液质联用质谱仪分析乙霉威残留量快速灵敏度高，苹果样品的检测分析在5分钟之内就能完成。

三、 结语

本文研究建立了苹果样本中的乙霉威残留量的定性定量分析方法。结果如下：样品经过前处理提取浓缩后，进液相串联四级杆质谱电喷雾离子源检测，乙霉威浓度在100～1000ng/mL之间标准曲线的线性关系良好，在苹果样本中乙霉威的最低检出限为0.5?g/kg。本次研究结果能够为日常检测苹果样本中乙霉威残留量的定性定量分析提供依据。

参考文献：

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