对平衡盐冲洗液中杂质葡萄糖二酸钠的研究

俞幸嘉， 陈 婧

(东莞市人民医院， 广东 东莞 523059)

平衡盐冲洗液为手术用冲洗液，在国家标准中没有收载杂质的检查项目，也未见有相关的报道，但该产品为手术使用，会直接接触创口，对杂质也是有控制的必要。葡萄糖二酸钠杂质为本品原料葡萄糖酸钠生产过程中由葡萄糖过氧化产生，笔者采用阳离子色谱法对该产品的葡萄糖二酸钠杂质检查进行了研究并建立了检测方法。

1 仪器与试药

Waters2695高效液相色谱仪(2487紫外检测器)；Waters2695高效液相色谱仪(2996 DAD检测器)；BT125D 电子天平(十万分之一)赛多利斯公司；色谱柱：Agilent TC-C18色谱柱(250×4.6 mm，5μm)；色谱甲醇(天地公司)；硫酸(国药集团化学试剂有限公司)、纯化水；葡萄糖二酸钾对照品(SIGMA，以葡萄糖二酸根折算葡萄糖二酸钠的含量)；研究用样品(平衡盐冲洗液，河北天成药业生产)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

选用氢型阳离子交换色谱柱；以0.025 mol/L的硫酸溶液为流动相；用水为稀释溶剂；检测波长210 nm[1]；柱温30℃；流速1.0 mL/min；进样量20 μL。

2.2 供试品溶液与对照溶液的配制

供试品溶液：取本品作为供试品溶液。对照溶液：精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加稀水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.3 葡萄糖二酸钠的定位

分别取质量研究用样品制成有关物质项下的供试品溶液和25.0 μg/mL的葡萄糖二酸钠(以葡萄糖二酸根计为22.5 μg/mL)对照品溶液，按上述确定的色谱条件，进样20 μL并定位，结果葡萄糖二酸钠于4.996 min出峰；供试品溶液中葡萄糖酸钠于保留时间5.358 min出峰，并分离出保留时间与葡萄糖二酸钠接近的4.969 min的杂质。见图1。

1为杂质葡萄糖二酸钠；2为主成分葡萄糖酸钠图1 紫外检测器

为进一步确认本品有关物质检查项下供试品溶液保留时间4.969 min杂质即为葡萄糖二酸钠，另取上述葡萄糖二酸钠对照品溶液与上述有关物质检查项下供试品溶液按1∶1混匀后进样40 μL，结果葡萄糖二酸钠保留时间为4.920 min，葡萄糖酸钠保留时间为5.358 min；葡萄糖二酸钠与原供试品溶液中保留时间为4.969 min的杂质峰重叠。我们通过二极管阵列检测器，对混合溶液中的杂质进行峰纯度检查，结果葡萄糖二酸钠的纯度角为7.986，小于要求的阈值8.621，表明混合溶液中葡萄糖二酸钠为纯峰，原供试品溶液中保留时间为4.969 min的杂质为葡萄糖二酸钠，葡萄糖二酸钠为已知结构的杂质，确定采用外标法对葡萄糖二酸钠进行检查。见图2。

1为杂质葡萄糖二酸钠；2为主成分葡萄糖酸钠图2 DAD检测器

2.4 葡萄糖二酸钠的定量限与检测限

取25 μg /mL的葡萄糖二酸钠对照品溶液用水逐级稀释，使其峰高为基线噪音10倍，此时的进样浓度约为1.96 μg/mL，进样体积为20 μL，故定量限为39.2 ng，同时，将定量限溶液连续进样6次，记录色谱图。将定量限溶液进一步稀释，使其峰高为基线噪音的3倍，此时的进样浓度为0.59 μg/mL，进样体积为20 μL，故检测限为11.8 ng。

2.5 葡萄糖二酸钠标准曲线

精密称取葡萄糖二酸钠约10 mg(葡萄糖二酸单钾盐实称11.01 mg，折算成葡萄糖酸钠为10.30 mg，含量98.0%)，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取该溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5 mL至10 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μL，记录色谱图。结果表明：葡萄糖二酸钠在1.96～50.45 μg/mL范围内浓度与色谱峰面积线性关系良好，线性方程为：y=932.56 x -1354.8，R2=0.9998。

2.6 葡萄糖二酸钠加样回收率

取本品有关物质项下供试品溶液，测定葡萄糖二酸钠含量，由于葡萄糖二酸钠含量极低，按对照品浓度的80%、100%和120%精密加入葡萄糖二酸钠对照品(因称取量太低，通过称量后配成溶液加入)，照有关物质检查项下供试品溶液制备方法，平行制备高、中、低浓度9份。按外标法测定葡萄糖二酸钠的含量，并计算葡萄糖二酸钠的加样回收率，测得平均回收率97.08%，RSD0.74%。结果表明， 葡萄糖二酸钠加样回收率较好，本测定方法准确度较高。

2.7 进样精密度试验

取浓度约为25 μg/mL葡萄糖酸钠对照品溶液，在上述色谱条件下，连续进样20 μL 6次，记录色谱图，考察其进样精密度试验，测得RSD0.92%。结果表明：本品杂质葡萄糖二酸钠对照品溶液定量测定法进样精密度较好。

2.8 葡萄糖二酸钠对照品溶液的稳定性

取浓度约为25 μg/mL葡萄糖二酸钠对照品溶液，与室温下放置，分别于0、2、4、6、8、12、18、24 h依法进样20 μL，考察葡萄糖二酸钠的稳定性，测得RSD0.89%。结果显示：葡萄糖二酸钠对照品溶液室温24 h内稳定。

2.9 样品的葡萄糖二酸钠杂质检查

经对样品按上述方法进行检查，样品的葡萄糖二酸钠杂质为0.01%。

3 结论

平衡盐冲洗液国内引进的时间约为2013年，当时并未对该产品的杂质提出要求，笔者此次用氢型阳离子交换色谱柱能对该杂质进行良好的分离测定，建立了葡萄糖二酸钠杂质的检测方法。笔者也对上述检测条件进行了耐用性试验，调整了柱温为28℃及32℃，对检查结果无影响；调整流动相硫酸浓度为0.024及0.026 mol/L，对对检查结果无影响。该方法可靠、灵敏度高、重现性好，是一种实用的检测方法。