慢性阻塞性肺疾病不同阶段血浆微纤丝相关蛋白4水平变化及其临床意义

王保贵，闵生萍，徐晓玲

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种以持续气流受限为特征的慢性肺部疾病，气流受限多呈进行性发展，且具有极高的发病率和致残率［1］。肺功能检查是目前诊断COPD的“金标准”，但其可能导致部分患者误诊［2］。因此，临床工作中还需要寻找一些新的、无创伤、经济实用的指标辅助诊断COPD。微纤丝相关蛋白4（MFAP4）是一种在肺内呈高表达的细胞外基质糖蛋白［3］，免疫组织化学及免疫电子显微镜发现其存在于肺血管弹性纤维组织、肺泡间隔、血管外膜、支气管黏膜下层［4-5］。目前，细胞外基质相关物质被认为是一种评估呼吸系统疾病活动性、严重程度的参考指标。本研究旨在分析COPD稳定期、慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患者血浆MFAP4水平变化及其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年4月—2017年4月在阜阳市人民医院门诊就诊的COPD稳定期患者50例作为A组，呼吸科收治的AECOPD患者30例作为B组，均符合《慢性阻塞性肺疾病诊治指南（2013年修订版）》［2］中COPD及AECOPD的诊断标准。另选取同期体检健康者30例作为对照组。三组受试者年龄、性别、吸烟指数比较，差异无统计学意义（P＞0.05，见表1），具有可比性。本研究经阜阳市人民医院医学伦理委员会审核批准，所有患者对本研究知情并签署知情同意书。

表1 三组受试者一般资料比较Table 1 Comparison of general information in the three groups

1.2 排除标准 （1）合并其他部位感染者；（2）合并免疫系统疾病、血液系统疾病、糖尿病及肿瘤者；（3）有其他肺部疾病者；（4）合并心、脑、肝、肾功能不全者。

1.3 观察指标 比较对照组与A组受试者入院时肺功能指标〔包括第1秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1%perd）、第1秒用力呼气容积与用力肺活量比值（FEV1/FVC）〕、6分钟步行距离（6MWD）、改良版英国医学研究会呼吸困难量表（mMRC）评分及血浆MFAP4水平；记录A组患者治疗3、6、9、12个月血浆MFAP4水平；比较B组患者入院时及治疗1个月后肺功能指标、mMRC评分、血浆MFAP4水平及炎性反应指标〔包括白细胞计数（WBC）、C反应蛋白（CRP）〕。

1.4 检测方法 （1）肺功能指标：要求受试者吸入硫酸沙丁胺醇0.5 mg，15 min后采用日本CHEST HI-801肺功能仪检测FEV1%pred、FEV1/FVC。（2）6分钟步行试验：选择一条长50 m的僻静平直走廊，备好急救药品，折返处设置锥形标记，起始处设置红色线条标记，记录受试者6 min内在自己体能允许范围内尽快走的距离。（3）采用mMRC评估患者呼吸困难程度，评分越高提示患者呼吸困难越严重［6］。（4）MFAP4：取受试者静脉血5 ml并置于乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中，3 000 r/min离心20 min（离心半径8 cm），留取上清液并置于-80 ℃冰箱中保存待测，采用人MFAP4酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测血浆MFAP4水平。（5）炎性反应指标：采用流式荧光染色法检测WBC，所用仪器为迈瑞BC-6900血液分析仪；采用免疫比浊法检测CRP，所用仪器为西门子生化分析仪。

1.5 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理，计量资料以（±s）表示，组间比较采用成组t检验，组内比较采用配对t检验；血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者入院时FEV1%pred、6MWD及同期FEV1%pred的相关性分析采用Pearson相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组和A组受试者入院时肺功能指标、6MWD、mMRC评分及血浆MFAP4水平比较 A组患者入院时FEV1%pred、FEV1/FVC低于对照组，6MWD短于对照组，mMRC评分和血浆MFAP4水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05，见表2）。

表2 对照组和A组受试者入院时肺功能指标、6MWD、mMRC评分及血浆MFAP4水平比较（±s）Table 2 Comparison of index of pulmonary function，6-minute walking distance，mMRC score and plasma MFAP4 level between control group and A group at admission

注：FEV1%pred=第1秒用力呼气容积占预计值百分比，FEV1/FVC=第1秒用力呼气容积与用力肺活量比值，6MWD=6分钟步行距离，mMRC=改良版英国医学研究会呼吸困难量表，MFAP4=微纤丝相关蛋白4

MFAP4（U/ml）对照组 30 91.37±5.03 86.60±7.04 598.33±48.78 0.17±0.38 5.94±0.76 A 组 50 51.58±16.68 51.26±11.89 408.30±69.45 2.10±1.08 10.64±2.92 t值 -16.697 -12.691 -14.333 9.492 8.593 P 值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01组别 例数 FEV1%pred（%）FEV1/FVC（%）6MWD（m）mMRC评分（分）

2.2 相关性分析 Pearson相关分析结果显示，血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者入院时FEV1%pred、6MWD呈负相关（r值分别为-0.948、-0.744，P＜0.05，见图1～2）。A组患者治疗3个月血浆MFAP4水平为（10.77±8.66）U/ml，治疗6个月为（10.92±8.79）U/ml，治疗9个月为（11.02±8.94）U/ml， 治 疗 12个 月 为（11.56±9.53）U/ml。Pearson相 关分析结果显示，血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者同期FEV1%pred呈负相关（r=-0.949，P＜0.05，见图3）。

图1 血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者入院时FEV1%pred关系的散点图Figure 1 Scatter plot for correlation between plasma MFAP4 level and FEV1%pred in patients with stable COPD at admission

图2 血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者入院时6MWD关系的散点图Figure 2 Scatter plot for correlation between plasma MFAP4 level and 6-minute walking distance in patients with stable COPD at admission

2.3 B组患者入院时及治疗1个月后肺功能指标、mMRC评分、血浆MFAP4水平及炎性反应指标比较 B组患者入院时及治疗1个月后FEV1/FVC比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗1个月后B组患者FEV1%pred和血浆MFAP4水平高于入院时，mMRC评分及WBC、CRP低于入院时，差异有统计学意义（P＜0.05，见表3）。

表3 B组患者入院时及治疗1个月后肺功能指标、mMRC评分、血浆MFAP4水平及炎性反应指标比较（±s）Table 3 Comparison of index of pulmonary function，mMRC score，plasma MFAP4 level and inflammatory reaction indicators in group B at admission and 1 month after treatment

表3 B组患者入院时及治疗1个月后肺功能指标、mMRC评分、血浆MFAP4水平及炎性反应指标比较（±s）Table 3 Comparison of index of pulmonary function，mMRC score，plasma MFAP4 level and inflammatory reaction indicators in group B at admission and 1 month after treatment

注：WBC=白细胞计数，CRP=C反应蛋白

时间 FEV1%pred（%） FEV1/FVC（%） mMRC评分（分） MFAP4（U/ml） WBC（×109/L） CRP（mg/L）入院时 41.13±11.01 44.30±11.22 2.67±0.16 9.26±2.08 11.81±2.22 62.90±21.71治疗 1 个月后 47.70±9.84 48.70±11.01 2.20±0.72 11.09±2.06 6.82±1.23 6.61±2.21 t配对值 -2.436 -1.533 2.311 -3.420 10.747 14.131 P值 0.018 0.131 0.024 0.001 ＜0.01 ＜0.01

3 讨论

COPD是中老年人群的常见病、多发病，其发病机制复杂，可能由多种因素相互作用所致。近年来随着环境污染加重及人们不良生活习惯增多，COPD发病率呈现逐年上升趋势，已引起临床高度重视［7-8］。目前，临床医生主要依据患者临床症状、肺功能检查结果、血气分析结果、mMRC评分等评估COPD严重程度，尚缺乏操作简单、易行、无创伤的生物学标志物。

图3 血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者同期FEV1%pred关系的散点图Figure 3 Scatter plot for correlation between plasma MFAP4 level and FEV1%pred in patients with stable COPD during corresponding period

MFAP4主要位于血管外基质纤维，其含有一个能与整合素结合及具有激活能力的N端引入RGD序列［9-10］，可直接与弹性蛋白、肌原纤维蛋白、胶原蛋白结合［11］，但其生物学功能尚不完全明确。既往研究表明，MFAP4与动脉粥样硬化、主动脉瘤、肺动脉高压、肝硬化等发生发展有关［10，12-13］。肺动脉高压患者MFAP4水平升高，但稳定期动脉粥样硬化患者MFAP4水平降低［14］。MFAP4在肺部呈高表达，可存在于肺弹性纤维、肺泡组织、支气管黏膜下层及肺血管中，但其在COPD发病机制中的具体作用尚未十分清楚。既往研究发现，MFAP4可使血管外平滑肌细胞活化、增殖，导致血管狭窄、弹性纤维聚集及肺气肿［10，15］，但其是否可以作为COPD不同时期生物学标志物尚存在争议。

本研究结果显示，A组患者入院时FEV1%pred、FEV1/FVC低于对照组，6MWD短于对照组，mMRC评分和血浆MFAP4水平高于对照组，提示COPD稳定期患者肺功能及心肺耐力降低，血浆MFAP4水平升高。FEV1%pred和6MWD是目前评估COPD严重程度的经典临床指标，因此本研究仅分析血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者入院时FEV1%pred、6MWD的相关性，结果显示，血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者入院时FEV1%pred、6MWD呈负相关，提示血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者病情严重程度有关。既往研究表明，随着年龄增长，肺容量呈下降趋势，机体各个脏器、组织趋于萎缩，肺功能也不断减退，而COPD患者肺功能减退更明显［16］。笔者还发现，治疗3、6、9、12个月COPD稳定期患者血浆MFAP4水平有升高趋势，进一步行Pearson相关分析结果显示，血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者同期FEV1%pred呈负相关，提示血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者肺功能进行性减退有关，可作为评估COPD稳定期严重程度的新指标。

因考虑到AECOPD患者安全性，因此未测量6MWD。本研究结果显示，治疗1个月后B组患者FEV1%pred和血浆MFAP4水平高于入院时，mMRC评分及WBC、CRP低于入院时，提示治疗1个月后AECOPD患者肺功能明显改善及炎性反应明显减轻，但血浆MFAP4水平却出现升高情况，与血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者病情严重程度及肺功能进展有关不同，分析其原因可能为AECOPD患者伴有的炎性反应影响血浆MFAP4水平［17］，故AECOPD患者血浆MFAP4水平反而较COPD稳定期患者降低，但具体原因尚有待进一步研究探索。

综上所述，COPD稳定期患者血浆MFAP4水平升高，而AECOPD患者血浆MFAP4水平较COPD稳定期降低；血浆MFAP4水平与COPD稳定期患者肺功能呈负相关，可作为评估COPD稳定期严重程度的新指标；但本研究样本量较小，入组前患者治疗情况及合并症可能影响研究结果，且AECOPD患者血浆MFAP4水平降低原因尚未明确，仍有待大样本量、多中心前瞻性研究进一步证实。

作者贡献：王保贵进行文章的构思与设计，结果分析与解释，负责撰写论文，对文章整体负责，监督管理；徐晓玲进行研究的实施与可行性分析；王保贵、闵生萍进行数据收集、整理、分析；闵生萍负责文章的质量控制及审校。

本文无利益冲突。