分光光度法测定金樱子果中总皂苷的含量

彭焱辉，杨 熙，王志强，叶建斌，徐阳纯，林 晨

( 中国广州分析测试中心，广东省化学危害应急检测技术重点实验室，广东 广州 510070 )

金樱子，中药名。为蔷薇科植物金樱子Rosa laevigata Michx.的干燥成熟果实。分布于陕西、安徽、江西、江苏、浙江、湖北、湖南、广东、广西、台湾、福建、四川、云南、贵州等地[1-2]。

金樱子根皮提制拷胶.果实入药，有利尿、补肾作用.叶有解毒消肿作用.根药用，能活血散瘀、抜毒收釣、祛风驵湿。扦插或用种子繁殖.对土壤要求不严，宜生于阳坡。果实含维生素、苹果酸、枸樽酸、鞣质、皂甙等，具有广泛的生理活性，如抗炎、抑菌、降血脂、降血压、调节免疫、抗肿瘤、抗氧化等作用。金樱子的也适于软硬糖、果汁、汽水、果子露、气酒、香铒等着色产品开发[3-4]。金樱子野生资源丰富、生长快，也易于栽培，是一种理想的、具有开发利用潜力的天然果汁饮品原料。

皂苷是天然产物化学库的重要组成之一，具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗炎、免疫调节、抗病毒、抗真菌、杀精子、保肝活性等[5-7]。特别有些皂苷还具有抗菌的活性或解热、镇静、抗癌等有价值的生物活性，为保健功效重要成分。本实验采用紫外分光光度法测定金樱子果中总皂苷含量[8-12]，为深入研究与开发金樱子果的药用和保健功效价值提供理论依据。

1 材料与仪器

1.1 主要材料

产地为江西、广东、广西、湖北金樱子果烘干、粉碎、过筛保存，人参皂苷Re标准对照品：中国食品药品检定研究所(含量为91.7%)、冰醋酸、香草醛、 高氯酸、无水乙醇和无水甲醇等均为分析纯，实验室用水为去离子水。

1.2 主要仪器

UV-2450紫外可见分光光度计:日本岛津公司，电热恒温水浴锅:上海一恒科学仪器有限公司，电热鼓风干燥箱:上海一恒科学仪器有限公司，电子天平:Sartorius ，高速多功能粉碎机:永康市久品工贸有限公司。

2 实验方法与分析

2.1 试样液制备

准确称取各产地金樱子果试样1g于100mL容量瓶中，加入蒸馏水80mL，超声提取1h。室温冷却后，用蒸馏水定容至刻度线，摇匀，作为供试液。

2.2 标准储备液的制备

称取0.02269g含量为91.7%的人参皂苷Re对照品，置100mL容量瓶中，用无水甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成约0.2080mg/mL的人参皂苷Re对照品储备液。

2.3 测定波长的选择

取配置好的标准溶液1mL于10mL比色管中，水浴蒸干，加入0.2mL 5%香草醛-冰乙酸溶液，慢慢转动比色管，使残渣都溶解，再加入0.8mL高氯酸轻轻振荡，于60℃水浴加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀，用1cm比色池在可见光区进行扫描，扫描波长见图1，确定最大吸收波长546nm。

图1 人参皂苷Re标准溶液的扫描波长Fig.1 Scanning wavelength of ginsenoside Re standard solution

2.4 标准曲线的制定

分别吸取配制好的对照品使用溶液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL于7个比色管中，按2.3操作静待显色剂反应，在546nm测定其吸光度值。所得数据回归处理。得到标准曲线的线性拟合曲线见图2，回归方程为：Y= 3.6402x + 0.0287。式中：x为被测样品中人参皂苷Re的质量；y为吸光度，相关系数为R2=0.9992。该分析方法线性关系良好，可以进行定量分析。

图2 人参皂苷Re标准溶液线性拟合曲线Fig.2 Linear fitting curve of ginsenoside Re standard solution

2.5 试样测定

取适量树脂于烧杯中，加入无水乙醇覆盖树脂，缓慢搅拌树脂后静置30min后，过滤出树脂，用蒸馏水冲洗树脂至滤液无醇味，重复洗脱树脂两次。

图3 不同产地金樱子果总皂苷含量Fig.3 Total saponin content of Rosa laevigata from different habitats

选取层析柱，装入3cm预处理好的大孔树脂，再上加1cm中性氧化铝。精确加入1.0mL已处理好各产地的金樱子果试样溶液2.1，用25mL水过柱，弃去洗脱液，再用25mL70%乙醇洗脱液洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干，按2.3操作静待显色剂反应，在546nm测定其吸光度值，代入标准曲线中计算出试样中含有总皂苷含量。分析得出不同产地含量如图3，产自江西的金樱子果总皂苷含量为2.32mg/g，广东为3.58mg/g，广西为3.25mg/g，湖北为2.65mg/g。

2.6 精密性试验

取配置好的标准溶液0.6mL分别在不同日期，不同人员，不同仪器的情况下按2.3操作两次，在546nm下测定吸光度，计算六个测定结果的相对标准偏差(RSD)，结果见表1。

表1 测定方法的精密性Table 1 The precision of the assay method

结果显示RSD=0.87%，精密性良好。

2.7 稳定性试验

取配置好的标准溶液0.6mL按2.3操作后，分别稳定10、20、30、40、50、60min后，在546nm下测定吸光度，结果如表2。

表2 测定方法的稳定性Table 2 The stability of the assay method

结果显示在60min内基本稳定，RSD=0.43%，具有较好的稳定性。

2.8 重复性试验

用建立的方法对同一批次的金樱子果进行六次测定，计算六个测定结果的相对标准偏差(RSD)，结果见表3。

表3 测定方法的精密性Table 3 Intermediate precision of the determination method

从表3得出：RSD值0.85%，符合一般方法的RSD<5%的要求，该方法具有很好的重复性。

2.9 加标回收率测定

称取样品1.0g(精确到0.0001g)，共称取12个，每四个为一组一共三组，每组保留一个不加标，另外三个进行加标回收实验。样品称取后，按试验方法处理后按2.5操作，于样品中分别加入相当于样品含量的80%，100%，120%的人参皂苷Re对照品，按试验方法处理进行比色测定，即进行三组不同浓度的加标回收实验，具体实验数据见表4。

表4 回收率实验结果Table 4 Experimental results of recovery rates

从表4可知，此三组不同浓度的平均加标回收率分别为97.3%、98.1%、97.6%，满足一般检测方法对回收率90%～110%要求。

3 结论

以大孔树脂对金樱子果试样溶液总皂苷分离纯化，用70%乙醇溶液作为洗脱液进行提取，通过皂苷在强氧化性酸的作用下脱氢，再与香草醛成显色，采用人参皂苷Re作为对照品，用分光光度法是测定金樱子果中总皂苷的含量。该方法精密性、稳定性和重复性良好，满足样品加标回收实验，通过方法能很好的测得不同产地的金樱子果中总皂苷含量，其中产自广东的金樱子果总皂苷含量最高为3.58mg/g，江西产地的金樱子果总皂苷最低为2.32mg/g。