高吸水性止血材料中透明质酸钠含量的测定

汤祥忠 刘东 杨永环

摘 要：本文阐述了使用紫外-可见分光光度法（Ultraviolet-visible Spectral Analysis，UV-VIS）测定高吸水性止血材料中透明质酸钠含量的方法和步骤。试验结果显示，方法回收率为97%～98%，方法的相对标准偏差分别为：0.68%和0.90%，线性范围是0～11.4μg/mL，相关系数为0.9968。该方法是一种简单、快速、准确测定高吸水性止血材料中透明质酸钠含量较好的方法。

关键词：高吸水性止血材料;紫外-可见分光光度法;透明质酸钠

中图分类号：R927 文献标识码：A 文章编号：1003-5168（2019）34-0119-03

Determination of Sodium Hyaluronate in Superabsorbent

Hemostatic Materials

TANG Xiangzhong LIU Dong YANG Yonghuan

（Medical Instrument Testing of Henan，Zhengzhou Henan 450003）

Abstract： This paper described the method and procedure of determining the content of sodium hyaluronate in superabsorbent hemostatic materials by UV-VIS. The results show that the recovery of the method is between 97% and 98%， and the relative standard deviation of the method is 0.68% and 0.90%. The linear range is 0～11.4μg/mL， and the correlation coefficient is 0.996 8. It is a simple， rapid and accurate method for the determination of sodium hyaluronate in superabsorbent hemostatic materials.

Keywords： super absorbent hemostatic material;UV-VIS;sodium hyaluronate

1 研究背景

透明质酸（商品一般为钠盐，Haluronic acid、HA）又名玻璃酸、玻尿酸，是一种酸性粘多糖，广泛存在于动物各种组织细胞间质中，如皮肤、关节滑液、软骨、眼球玻璃体等及公鸡鸡冠里。1934年，美国Meyer等人首先从牛眼玻璃体中分离出该物质。透明质酸是粘多糖中最具代表性的一种，因为透明质酸被认为是唯一几乎存在于从细菌到人类所有动物体之中的粘多糖。透明质酸钠具有多样的生理功能和优良的物化性质，同时也是我国卫生部公布的第一批新资源食品之一，已被广泛应用于医药、保健食品、化妆品等领域。随着对透明质酸钠的研究逐渐深入，透明质酸钠在组织工程、纳米材料等领域也表现出巨大的应用潜力[1]。

笔者所在的课题组通过潜心研究，创新性地将胶原、透明质酸钠和丝素肽等生物材料交联起来，复合成新型的生物医用止血材料，該材料具备以下优点：①止血迅速且效果好，尤其对动脉活动性出血和实质性脏器广泛渗血;②有良好的生物相容性，有促进受损组织创面愈合的作用。对该材料中透明质酸钠含量的测试，笔者所在的课题组参考了《组织工程医疗产品 透明质酸钠》（YY/T 1571—2017）中关于透明质酸钠的测定方法[2]，并对该方法进行改进，对该方法的回收率和重复性进行测定。

2 材料与方法

2.1 材料与试剂

D-葡萄糖醛酸标准品（≥99.8%，中国食品药品检定研究院生产）;咔唑（分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）;无水乙醇（分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）;四硼酸钠（分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）;浓硫酸（分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）。

2.2 仪器与设备

紫外-可见分光光度计（Agilent Cary 60，美国安捷伦科技有限公司）;XP205DR分析天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司];IKA MS3漩涡振荡器（上海莱贝科学仪器有限公司）。

2.3 试验方法

2.3.1 溶液的配制

2.3.1.1 咔唑试液。称取0.125g咔唑，加无水乙醇100mL溶解，置暗处保存。

2.3.1.2 葡萄糖醛酸（GA）标准溶液。精密称取经105℃以五氧化二磷为干燥剂，真空干燥至恒重的葡萄糖醛酸对照品约0.1g，置于100mL量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液5.0mL，置100mL量瓶中，加水制成每1.0mL中含50μg的溶液，摇匀，4℃下贮存。

2.3.1.3 0.025mol/L的四硼酸钠硫酸溶液。称取四硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）9.54g，加入1L浓硫酸中，加盖。不定时地振摇，直至四硼酸钠完全溶解。室温下贮存。

2.3.1.4 试样制备。精密称取5g高吸水性止血材料样品（以下称止血材料），然后剪成1cm×1cm的小块于100mL烧杯中，并在烧杯中加入量取的20mL水，用玻璃棒充分搅拌，使止血材料中透明质酸钠充分溶解于水中，然后过滤去除不溶物，并用水洗涤不溶物三次以上，滤液合并转移至100mL容量瓶中，并用水定容至刻度。

2.3.2 测定步骤

2.3.2.1 标准曲线的制备。精密量取标准溶液0、0.4、0.8、1.2、1.6mL和2.0mL，分别置于25mL具塞试管中，各加水至10mL，混匀，冰浴中冷却，缓缓加入已冷却的硼砂硫酸溶液5.0mL，密塞，混匀，沸水浴加热10min，冰浴中冷却至室温。精密加入咔唑试液0.2mL，混匀，沸水浴加热15min，冰浴中冷却至室温。按紫外-可见分光光度法，在600nm波长处测定吸光度，以葡萄糖醛酸的浓度对相应的吸光度计算回归方程。

2.3.2.2 测定。精密量取供试品溶液10mL置于具塞试管中，按标准曲线制备自冰浴中冷却起依法操作，测定吸光度，由回归方程计算出供试液中葡萄糖醛酸浓度[C1]。

2.3.2.3 计算。含量[X]按式（1）计算。

[X=C1×100×10-6×401.3W1×100%]                         （1）

式中：[C1]为回归方程计算出的供试品溶液中葡萄糖醛酸浓度，μg/mL;[W1]为试样质量，g;401.3为玻尿酸分子量;194.1为葡萄糖醛酸的分子量。

3 结果与讨论

3.1 标准曲线的绘制

依次进样0.0、2.28、4.56、6.84、9.12μg/mL和11.4μg/mL葡萄糖醛酸标准溶液，对其吸光度值进行测定，结果如表1所示。

葡萄糖醛酸标准曲线是在参考仪器测定结果基础上拟合出来的，标准曲线如图1所示。通过线性拟合，葡萄糖醛酸标准曲线在被测范围0～11.4μg/mL内的回归方程和相关系数依次为：[y=0.008 7x+0.281]与[R2=0.996 8]。

3.2 测定相对标准偏差

选取两批次的高吸水性止血材料，分别对其透明质酸钠含量测定5次，具体结果如表2所示。通过对两组样品的相对标准偏差进行分析，样品1的[RSD]为0.68%，样品2的[RSD]为0.90%，相对标准偏差均在5%以下，说明该方法对同一样品测试的重复性较好。

3.3 测定加标回收率

选取一定量的高吸水性止血材料样品，测定高吸水性止血材料的加标回收率。依次将1、2μg/mL和5μg/mL透明质酸钠标准溶液加入样品中，然后同样品制备方法一样进行样品的处理和测试，具体测定结果如表3所示。

3.4 检出限的测定

連续进行11次空白测试，并按公式（2）计算检出限：

[QL=3S0b]                                    （2）

公式（2）中，[QL]、[S0]、[b]依次代表检出限、11次空白测定的标准偏差、标准曲线斜率。

11次空白测定吸光度值分别为：0.279、0.277、0.279、0.277、0.278、0.278、0.281、0.283、0.279、0.278、0.277;空白测定标准偏差为0.006 6，标准曲线斜率为0.008 7。根据公式（2）计算检出限，计算结果为0.76μg/mL。

4 结论

通过对测试结果进行分析发现，本文建立的测定高吸水性止血材料中透明质酸钠含量的紫外-可见分光光度法，方法回收率为97%～98%，方法的相对标准偏差分别为0.68%和0.90%，线性范围在0～11.4μg/mL，相关系数为0.996 8。可见，此方法可以作为高吸水性止血材料中透明质酸钠含量的测定方法，且具有较高的应用价值。

参考文献：

[1]刁立琴，韩婷，高保栓，等.透明质酸钠修护贴敷料的生物学评价[J].中国医疗器械信息，2019（10）：27-28.

[2]国家食品药品监督管理总局.组织工程医疗器械产品 透明质酸钠：YY/T 1571—2017[S].北京：中国标准出版社，2017.