上皮性卵巢癌组织OIP5表达及其意义

丁杰 卢璐 武欣

[摘要]目的 探讨OPA相互作用蛋白5（OIP5）在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床病理学意义。方法 选择90例上皮性卵巢癌组织及配对的癌旁正常组织标本，运用免疫组化技术检测OIP5的表达及细胞定位。结果 与癌旁正常组织相比，OIP5蛋白在卵巢癌组织中表达明显升高（χ2=14.100，P<0.05），且其表达水平与卵巢癌的N分期、远端转移和不良预后等显著相关，差异均有统计学意义（χ2=5.000～10.106，P<0.05）。结论 OIP5在卵巢癌的发生发展中可能起着癌基因的作用。

[关键词]卵巢肿瘤;OPA相互作用蛋白5;肿瘤转移;预后;病理学，临床

[中图分类号]R737.31

[文献标志码]A

[文章编号] 2096-5532（2019）05-0560-05

doi：10.11712/jms201905014

[开放科学（资源服务）标识码（OSID）]

上皮性卵巢癌 （EOC）是一种常见的妇科恶性肿瘤，占卵巢肿瘤的50%～70%。由于EOC早期 （Ⅰ、Ⅱ期）缺乏典型的临床表观，大约76%的病人在就诊时往往处于癌症晚期阶段 （Ⅲ、Ⅳ期），发现时已有腹腔、肝、胸腔或颅内转移和种植，这是导致EOC较高病死率的主要原因。目前，EOC的侵袭和转移机制尚不明确。随着分子生物学的发展，人类基因组计划已极大的丰富了人类对肿瘤发生发展的分子机制认识，各种实验平台技术被用来发现和鉴定癌症相关基因或者治疗的靶标。OPA相互作用蛋白5（OIP5）基因最初被鉴定为OPA互作蛋白5[1-3]。PAWLAK等[4]研究显示，OIP5在一些肿瘤组织或者正常组织中均有表达。OIP5在细胞增殖的G1期或者细胞在静止、衰老与分化完毕时呈上调表达[1];亦有研究发现其对中心体或着丝粒的结构和功能是必要的，OIP5在细胞末期G1期的中心体上聚集，介导染色质和细胞周期的调控[2]。目前相关研究结果表明，OIP5参与了胃癌、结直肠癌、肺癌、食管癌、肾透明细胞癌、急性髓样白血病、胶质母細胞瘤、乳癌、肝癌和膀胱癌等疾病的发生和发展[5-13]。但OIP5在EOC组织中的表达目前尚未见有研究报道。为了明确OIP5在EOC中的表达及其与临床病理学的相关性，本文研究运用免疫组化技术对90例EOC及配对癌旁正常组织中的OIP5表达进行了检测。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

2010—2016年，我科诊治EOC病人 90例，年龄46～83岁，中位年龄61.5岁。根据美国癌症联合会 （AJCC） 2016年第8版TNM分期标准[1]：Ⅰ期10例，Ⅱ期33例，Ⅲ期34例，Ⅳ期13例;T1+T2期34例，T3+T4期56例;淋巴结转移72例，无淋巴结转移18例;远端转移60例，无远端转移30例;黏液型卵巢癌18例，浆液型卵巢癌46例，子宫内膜型卵巢癌14例，卵巢移行细胞癌5例和卵巢透明细胞癌7例。本研究通过了医院医学伦理委员会的批准，病人均知情同意。

1.2 免疫组化方法

EOC组织切片于60 ℃烤箱中过夜后，依次经二甲苯脱蜡、梯度乙醇溶液水化后浸泡于蒸馏水中待用。OIP5蛋白采用柠檬酸进行组织抗原修复：取200 mL修复缓冲液于耐高温的修复盒，将脱蜡水化后的组织切片置于切片架上，放入缓冲液中，将修复盒放入微波炉中，调至解冻温度，20 min后取出，冷却至室温，取出玻片，先用蒸馏水冲洗2次，每次5 min，之后再用磷酸盐缓冲液（pH值7.2～7.4）冲洗2次，每次5 min。甩去PBS液后，每张切片加200 μL的兔抗人OIP5抗体（稀释度1∶100，Abcam公司），放入湿盒内，置于4 ℃冰箱内过夜。甩去PBS液，每张切片加200 μL辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗（北京中杉金桥生物技术公司），37 ℃恒温箱内孵育30 min。PBS冲洗3次，每次5 min。甩去PBS液，每张切片加200 μL新鲜配制的DAB溶液，光学显微镜下控制显色，并及时终止反应。自来水冲洗，苏木精复染20 s，用自来水冲洗30 min，使切片返蓝。切片经过梯度乙醇脱水、二甲苯透明后，中性树胶封固。以已知阳性的病例作为阳性对照，以正常兔IgG代替一抗作为免疫组化实验的阴性对照。

1.3 免疫组化评分

OIP5蛋白表达定位于细胞膜和细胞浆，均为棕黄色、棕褐色颗粒。阳性细胞数比例评分：阳性表达细胞<5%为0分，5%～20%为1分，21%～50%为2分，>50%为3分。阳性细胞表达染色强度评分：基本不着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。综合阳性细胞数比例和染色强度，以两者之和为最后得分判断：0～1分为阴性（-），2分为弱阳性（+），3～4分为中阳性（），5～6分为强阳性（）。在低倍镜（100倍）下观察整张切片，随机选择4个高倍视野（200倍）计数阳性细胞。最后以阴性和弱阳性表达为OIP5低表达组、中阳性和强阳性为OIP5高表达组进行临床病理学参数的相关性分析。

1.4 统计学分析

采用SPSS 17.0软件对所得结果进行数据处理和分析，计数资料的组间比较用χ2检验。生存资料单因素分析采用Kaplan-Meier法，差异的显著性分析采用Log-rank检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 OIP5在卵巢癌组织中的表达

免疫组化结果显示，OIP5阳性颗粒定位于细胞膜和细胞质/浆中。OIP5的表达具有高度的异质性，其在肿瘤组织中的表达从阴性、弱阳性到中阳性表达。90例EOC组织中，OIP5阴性表达者18例，弱阳性表达者20例，中阳性表达者52例，未见强阳性表达。在正常组织中OIP5呈阴性表达的有73例，中阳性表达的有17例。与癌旁正常组织相比，OIP5在EOC组织中显著性上调，其差异具有统计学意义（χ2=14.100，P<0.05）。见图1。

2.2 OIP5高表达与EOC临床病理特征的相关性

本文结果表明，OIP5的表达水平与N分期和远端转移有关，差异具有统计学意义（χ2=5.000、8.221，P<0.05）。与其他临床病理学参数，比如病人年龄、T分期、临床分期、肿瘤大小和病理学分型等均不具有统计学相关性（P>0.05）。值得注意的是，虽然OIP5的表达与病理学分型不具有统计学相关性，但是具有统计学差异的趋势（P=0.068）。即在黏液型、浆液型、子宫内膜型及混合型卵巢癌组织中，OIP5蛋白在浆液型EOC组织中倾向性高表达。见表1。

2.3 OIP5表达与EOC病人预后的关系

本文90例EOC病人中，手术时间为2010—2016年，生存时间0.5～37.5个月，平均21.38个月。存活24例，死亡66例;OIP5高表达52例，低表达38例。Long-rank分析显示，OIP5的表达与不良预后具有统计学意义相关性（χ2=10.106，P<0.01）。其表达水平越高，总生存率越低。见图2。

3 讨论

在本研究中，我们报道了OIP5在EOC组织中的表达水平及其临床病理学意义。本文结果表明，OIP5在EOC组织中相比癌旁正常组织显著性上调;且OIP5表达与卵巢癌的N分期、远端转移和不良预后等具有显著相关性，提示OIP5可能参与了EOC的发生发展。

在恶性肿瘤中，最先开展OIP5的研究是在胃癌中，随后陆续地在结直肠癌、肺癌、食管癌、肾透明细胞癌、急性髓样白血病、胶质母细胞瘤、乳癌、肝癌和膀胱癌等中均发现OIP5呈上调表达[5-13]，这与本研究的结果是一致的。这些研究结果提示，OIP5在A为黏液型卵巢癌组织，B为浆液型卵巢癌组织，C为子宫内膜型卵巢癌组织，D为正常卵巢组织。A、B、C表示OIP5中阳性表达;B1表示弱阳性表达;B2、D表示阴性表达或不表达。图中比例尺为200 μm。

恶性肿瘤中可能是一个癌基因，参与了癌症的发生发展及恶性表型。CHUN等[6]运用RT-PCR技术对66例结肠癌组织和9例正常组织的检测结果显示，OIP5在肿瘤组织中的表达是其在正常组织的3.7倍;但是OIP5的表达与临床分期（Ⅱ期和Ⅲ期之间）和复发与否（复发与非复发之间）均无显著相关性。本研究结果与其一致，这说明OIP5的表达不太可能作为EOC临床分期的一个潜在标志物。KOINUMA等[7]在336例非小细胞性肺癌和305例食管鳞癌中分析OIP5表达的临床病理学意义，结果显示，OIP5的表达与非小细胞性肺癌和食管鳞癌的预后均具有统计学相关性。并且通过多因素分析确认了OIP5的表达在非小细胞性肺癌中是一个独立的预后因素。本研究结果与其基本一致。由于本研究未进行多因素分析，因而无法得出OIP5的表达水平是否在EOC中是一个独立的预后因素。因此，这需要在后续研究中用较大样本进行确认。GONG等[8]运用免疫组化技术检测OIP5在肾透明细胞癌表达的结果表明，其表达不仅与T分期、N分期和临床分期有关，而且多因素分析显示OIP5还是肾透明细胞癌的一个独立预后因素。这与我们的研究有所不同。本研究结果未显示，OIP5的表达与T分期和临床分期无显著相关性。其差异可能与使用的抗体不同或者使用的组织标本不同有关。OIP5已被证实为是一种组织特异性基因，其表达具有一定的组织特异性[5]。此外，OIP5在膀胱癌中亦被鉴定为发挥着癌基因的作用[13]。在乳癌中OIP5被发现除了介导染色质结构之外，在调控细胞周期及有丝分裂中正常染色体分离等方面起着重要的作用[11]。尽管如此，有关OIP5的分子机制的研究鲜有报道。研究发现，在肝细胞癌中OIP5参与了肿瘤细胞的增殖和转移，该作用是通过miR-15-5p调控OIP5来完成的[12]。在乳癌中OIP5是通过miR-139-5p/NOTCH1通路而起作用的[16]。OIP5在EOC中的作用机制尚不明确，有待于进一步研究。由于其机制研究离不开体外细胞培养系统，在本研究中我们未能开展体外EOC细胞系培养工作，因而有关其具体的生物学功能及相关机制尚不明确，需要在后续实验中进一步研究探讨。此外，在我们的研究中，仍有两点需要注意。首先，由于免疫组化的评分有较大的主观性，因此免疫组化的评分标准可能会潜在地影响最终统计学相关性分析。其次，鉴于OIP5在EOC组织中表达的高度异质性，在本研究中我们只使用了一种实验方法探讨OIP5在卵巢癌组织中的表达或许不够充分。免疫印迹或者实时荧光定量PCR技术可能是免疫组化的一个强有力的实验技术验证或补充。

总之，本研究结果显示EOC组织中OIP5表达显著上调;上调表达的OIP5與卵巢癌的N分期、远端转移和不良预后等显著相关，提示OIP5可能参与了EOC的发生发展。鉴于本研究的样本例数有限，因而有必要在后续实验中进行多中心大样本的实验验证。

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（本文編辑 于国艺）