桃红四物汤对急性深静脉血栓模型大鼠血清 IL-6和TNF-α水平的影响

柳景红　刘登义　陈振中　李乐平　曹建雄

〔摘要〕 目的 观察桃红四物汤对急性下肢深静脉血栓（deep vein thrombosis，DVT）大鼠血清肿瘤坏死因子-α（tumor-necrosisfactor-α，TNF-α）与白介素- 6（interleukin-6，IL-6）水平的影响。方法 将80只雄性SD大鼠随机分为假手术（A）、DVT模型（B）、桃红四物汤（C）、阿司匹林（D）4组，每组20只。A组：只开腹，不结扎股静脉，再灌胃生理盐水;B组：予以结扎近心端左股静脉造模后灌胃生理盐水;C组：予以结扎近心端左股静脉造模后桃红四物汤灌胃给药;D组：予以结扎近心端左股静脉造模后灌胃阿司匹林;7 d后停止灌胃，分别于术前、术后第1天、7天用放射性免疫分析法测定各组血清中TNF-α、IL- 6 的水平，并进行组间比较。结果 术后第1天、7天，与A组比较，B组血清IL-6和TNF-α水平递增（P<0.05），3个时点间两两比較差异均有统计学意义（P<0.05）;与B组比较，C组IL-6和TNF-α水平均降（P<0.05）。结论 DVT大鼠经桃红四物汤治疗后其血清IL-6和TNF-α水平均明显降低，提示桃红四物汤对深静脉血栓的防治疗效较好，具有抗凝聚、提高纤溶活性的作用。

〔关键词〕 桃红四物汤;深静脉血栓;白介素-6;肿瘤坏死因子-α

〔中图分类号〕R285.5;R543.6       〔文献标志码〕A       〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2019.01.008

Effect of Taohong Siwu Decoction on Serum Levels of IL-6 and TNF-α in a Rat

Model of Acute Deep Venous Thrombosis

LIU Jinghong， LIU Dengyi， CHEN Zhenzhong， LI Leping， CAO Jianxiong*

（The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China）

〔Abstract〕 Objective To observe the effect of Taohong Siwu Decoction on the serum levels of tumor necrosis factor-α （TNF-α） and interleukin-6 （IL-6） in rats with acute deep venous thrombosis （DVT） of the lower extremities. Methods Eighty male Sprague-Dawley （SD） rats were randomly divided into four groups： sham-operated group （group A）， DVT model group （group B）， Taohong Siwu Decoction group （group C）， and aspirin group （group D）， with 20 rats in each group. The rats in group A were given open surgery without femoral vein ligation， and then given intragastric administration of saline. The rats in group B were given proximal ligation of the left femoral vein to establish a DVT model， and then given intragastric administration of saline. The rats in group C were given intragastric administration of Taohong Siwu Decoction after proximal ligation of the left femoral vein for establishing the DVT model. The rats in group D were given intragastric administration of aspirin after proximal ligation of the left femoral vein for establishing the DVT model. The intragastric administration in the rats of all groups was withdrawn 7 days later. The serum levels of TNF-α and IL-6 in the four groups were measured by radioimmunoassay before and at 1 and 7 days after operation， and were compared between the four groups. Results Group B had significantly higher serum levels of IL-6 and TNF-α than group A at 1 and 7 days after operation （P<0.05）， and the two proinflammatory cytokines were significantly different between the three time points （P<0.05）. However， group C had significantly reduced serum levels of IL-6 and TNF-α compared with group B after operation （P<0.05）. Conclusion The serum levels of IL-6 and TNF-α in SD rats with acute DVT decrease significantly after intragastric administration of Taohong Siwu Decoction， suggesting that Taohong Siwu Decoction has good efficacy in preventing and treating DVT， with anticoagulant and fibrinolytic activity.

〔Keywords〕 Taohong Siwu Decoction; deep venous thrombosis; interleukin-6; tumor necrosis factor-α

静脉血栓栓塞（venous thromboembolism，VTE）是临床三大血栓性疾病（心肌梗死、缺血性脑卒中及静脉血栓）之一，也是临床上最常见的静脉疾病之一[1]。急性下肢深静脉血栓（deep vein thrombosis，DVT）是临床常见的外周血管疾病，若治疗不及时，易继发致命的肺栓塞和慢性静脉瓣功能不全。目前DVT的临床治疗主要以中西医结合为主[2]。而中医药治疗DVT不良反应小，安全性高，对促进再通和侧支循环的建立都有可靠疗效，可以弥补西药治疗溶栓抗凝治疗带来的易致出血的不良反应，以及其量效关系不确切的不足[3]。桃红四物汤为中医传统活血化瘀经典方剂之一， 源自于清·吴谦的《医宗金鉴》， 由桃仁、红花、当归、白芍、熟地黄、川芎6味中药组成，具有活血化瘀、养血补血的双重功效。全方养血而不滞血， 活血而不破血， 补中有行， 破中有收， 诸药合用， 达到活血行气、扶正祛邪之功效， 在现代中医临床被广泛应用， 且有较好疗效。近几年来现代医学研究发现炎症与血栓形成之间存在着密切的联系，一方面炎症促进高凝状态，另一方面血栓形成中的物质也可引起炎症。肿瘤坏死因子-α（tumor necrosisfactor-α，TNF-α）与白介素-6（interleukin-6，IL-6）是重要的早期炎症因子。本研究采用桃红四物汤对大鼠DVT模型进行干预后，试图通过检测血清IL-6和TNF-α水平的变化，研究桃红四物汤治疗深静脉血栓的作用机制，为中医药防治深静脉血栓形成提供实验依据。

1 材料与方法

1.1  实验动物及分组

选用体质量（250±20）g的雄性清洁级SD大鼠80只，16周龄，由湖南中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（湘）2012-0004。随机分为A、B、C、D 4组，每组20只。

1.2  药物试剂与仪器

IL-6和TNF-α ELISA 试剂盒均购自武汉默沙克生物科技有限公司（IL-6试剂盒产品编：kt40133，TNF-αELISA 试剂盒产品编号：kt30484）。其他相关仪器由湖南中医药大学实验室提供。桃红四物汤按照《医宗金鉴》的配比：桃仁20 g，红花20 g，当归20 g，熟地黄20 g，赤芍20 g，川芎10 g。依据成人（60 kg）与动物体表面积换算公式得出大鼠等效剂量为7.56 g/kg，桃红四物汤3次煎煮药液混合并浓缩至含生药1.1 g /mL，由湖南中医药大学第一附属医院中药煎剂室提供。阿司匹林肠溶片（批准文号：国药准字J20130078，安徽仁济制药有限公司提供）以生理盐水配成0.075 mg/mL。

1.3  实验方法

1.3.1  造模  各组大鼠常规饲养1周后开始手术造模，予以大鼠腹腔内注射2%戊巴比妥钠40 mg/kg 麻醉后，仰卧位固定，常规消毒铺巾，沿左侧下肢股静脉走行切开皮肤约4.5 cm，暴露、分离左侧股静脉，抽取股动脉血液做检测标本。A、B、C 3组用4号丝线于暴露的股静脉近心端结扎股静脉，结扎线以下1 cm处放置微型血管夹，6 h后拆除结扎线及血管夹，造模完成，无菌缝线縫合手术创口，D组（假手术组）大鼠不予结扎，只将丝线置于血管处，6 h后无菌缝线缝合手术创口。

1.3.2 ; 干预措施  造模术后6 h，肉眼见模型大鼠左下肢肿胀，行彩色多普勒超声检查大鼠左下肢静脉血栓形成，则提示造模成功，造模成功后，立即实施干预措施。假手术组（A组）20只，术后6 h灌胃20 mL/kg生理盐水;模型组（B组）20只，术后6 h立即灌服20 mL/kg生理盐水;桃红四物汤组（C组）20只，术后6 h立即桃红四物汤浓缩液灌胃给药，剂量20 mL/kg;阿司匹林组（D组）20只，术后6 h立即灌服阿司匹林肠溶片悬浊液20 mL/kg。以上灌服方法均为每日2 次，持续时间为一周。

1.3.3  IL-6和TNF-α水平检测  术后第1天、7天取大鼠动脉血采用ELISA 法检测血清中IL-6和TNF-α水平，具体操作均按照ELISA试剂盒说明书进行，并于450 nm波长处测定吸光度（OD）值。

1.4  统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行分析。计量资料以“x±s”表示，同时点4组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用q检验;同组内各时点比较采用重复测量资料的方差分析，两两比较采用q检验。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1  彩色多普勒超声检查DVT组大鼠模型

实验过程中无大鼠死亡，建模前彩色多普勒超声检查提示所有大鼠的左下肢深静脉通畅、无DVT发生;术后1 d行彩色多普勒超声检查提示DVT组大鼠均有左下肢DVT 形成。

2.2  各组大鼠各时点的血清IL-6和TNF-α水平

术前假手术组、模型组、桃红四物汤组与阿司匹林组的血清IL- 6水平和TNF-α术前水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）;但术后第1天、7天，与假手术组比较，模型组血清IL- 6和TNF-α水平递增（P<0.05）;除假手术组外其余3组组内3个时点间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较，桃红四物汤组IL- 6、TNF-α水平均降低（P<0.05）。见表1、表2。

3 讨论

DVT的形成系指血液在深静脉腔内不正常地凝结，阻塞静脉管腔，从而导致静脉回流障碍，是创伤、手术、瘫痪等之后常发生的并发症，常好发于下肢。若治疗不及时，易继发致命的肺栓塞和慢性静脉瓣功能不全。现代医学研究[4-7]表明，炎症反应与血栓形成之间存在着密切的联系，一方面炎症促进高凝状态，另一方面血栓形成中的物质也可引起炎症。IL-6与TNF-α是重要的早期炎症因子，与创伤后DVT形成[8-9]、创伤后感染[10]、创伤后预后有着密切联系。中医学认为DVT是各种原因致瘀血瘀阻脉中，历代医家多采用活血化瘀法治疗DVT[11]，在临床上我们发现桃红四物汤治疗效果甚佳。亦有实验研究[12]表明，桃红四物汤能显著延长大鼠体内凝血时间和血栓形成时间，能显著降低血瘀大鼠全血比黏度、血浆比黏度及血清比黏度，具有较好的活血化瘀作用。桃红四物汤为中医活血化瘀经典方剂之一， 源自于清·吴谦的《医宗金鉴》，由四物汤衍生而来，共有药物6味，由桃仁、红花、当归、赤芍、熟地黄、川芎组成，具有活血化瘀、养血补血的双重功效。全方养血而不滞血， 活血而不破血， 补中有行， 破中有收， 诸药合用， 达到活血行气、扶正祛邪之功效， 在现代中医临床被广泛应用， 且有较好疗效。

本实验通过结扎股静脉以建立大鼠DVT模型，且用彩色多普勒超声检查提示大鼠左下肢DVT建立成功后，立即实施干预措施。术后第1天、7天，与A组比较，B组血清IL-6和TNF-α水平递增（P<0.05），3个时点间两两比较差异均有统计学意义（P<0.05），说明结扎术导致了DVT的形成及炎症因子的释放，炎症因子IL-6和TNF-α在DVT形成中具有重要作用;与B组比较，C组IL-6、TNF-α水平均降低（P<0.05），说明桃红四物汤能下调TNF-α，IL-6炎症因子的水平，其机制主要可能是桃红四物汤药能有效地抑制TNF-α和IL-6的失控性释放，清除体内炎症介质，并可能在一定程度上改善微循环、改善血流动力学、减少炎症渗出，促进炎症吸收，从而抑制了DVT 的进一步发展。

综上，桃红四物汤能明显改善炎症因子IL-6、TNF-α的血清学水平，在一定程度上揭示了其防治深静脉血栓的作用机制，为临床实践及实验研究提供了实验基础和理论依据。深化了中医药养血活血法治疗DVT的研究，为在中医辨证论治理论的指导下，应用养血活血等方药对深静脉血栓的防治提供较为客观、科学的数据支持。

参考文献

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