ISSR分子标记技术在作物遗传育种中的应用

孙玥，苏京平，王胜军，闫双勇，孙林静

文章编号： 1005-2690（2019）12-0026-02       中图分类号： S336       文献标志码： B

摘   要：ISSR分子标记是目前生物标记上新型的标记技术模式，通过引用设计简单的SSR技术，按照两端碱基础序列，实施高重复性操作，完成多信息的综合重组。在作物的种植鉴定、遗传定位、多样性区分上具有良好的标记作用，可以实现多态化的操作。针对ISSR分子标记技术的相关特点进行了分析，研究作物实验操作上，通过遗传育种技术领域的操作，完成作物遗传育种的整体应用操作过程。

关键词：ISSR分子标记;遗传作物;育种;应用

通过SSR技术标记，对卫星序列两侧的保守序列进行引物设计分析，完成PCR扩容和卫星序列的增序操作。通过SSR序列的拷贝，可以重点分析其中的差异，依照技术的稳定和重复情况，分析遗传种质标准，明确SSR技术两侧引物的操作和特异性，依照引物设计费用消耗比例关系，分析一定程度上技术的广泛应用。

1   ISSR技术标准特点分析

ISSR技术是以多分子标记为基础，通过组建内的扩容，实现微卫星序列的单一设计操作。依据两侧的反向序列对DNA进行SSR排列，完成单引物的扩增。通过染色体、色谱、色带电泳等相对位置，判断相同ISSR品间标记下的多态数据内容;通过ISSR的碱基数据引物操作分析，判断串联重复组建序列下的组成标准。按照3端、5端的锚定位碱基分析，确保ISSR引物下SSR的DNA数据序列扩增水平;通过卫星基因的增效分布判断，对灯位变异状态进行分析，明确ISSR技术检测的多态性操作;通过物种的特异性判断，将ISSR、SSR进行特异性的研究;通过与动植物等各类基因的对比分析，可以从不同角度进行设计要求分析，判断产物的多态水平，提供必要的基因组数据信息。

2   ISSR作物遗传育种标记上的作用分析

依照国际上的先进技术，通过组建分析获取更加便捷、快速的多态性数据分析。通过对小麦的作图分析、定位基因判断、多样遗传分配等确定多方面的广泛应用操作模式。

2.1   遗传作图数据分析

ISSR标记中包含高度多态模式的整体基因组操作过程。根据有效绘制遗传连图操作，确定ISSR标记下的小麦遗传作图数据。根据相关操作结果，对ISSR数据图进行标记，确定整体分布下的染色体组成过程。按照图位置与之处理，明确标记的区域范围。分析饱和度的增加情况水平，通过分子标记组建进行缩小，调整遗传作图数据的分析过程。

2.2   基因的定位数据分析

按照ISSR标记数据作物，对基因进行定位，明确小麦、水稻的标记过程。分析与小麦之间的分子标记，完成与小麦种子之间的连锁操作。通过大种子之间的连锁标记，确定组建寻找控制的连锁型模式。通过引物、定位完成数据基因的恢复操作。按照恢复基因的连锁定位，落实在1B染色体上。依照ISSR引物定位的T型模式，逐步恢复系列因素;按照标记小麦的T连锁状态后才能对细胞质基因的连锁处理，控制遗传基因的距离范围。通过轮回本位分析，判断相关基因下的数据分析，发现基因连锁下的ISSR标记过程。依照细胞质不育与之强化恢复系列的配组操作，通过不同群体的恢复性定位群体判断。使用ISSR引物，完成恢复基因的定位连锁分析，表明数据紧缩的连续性，确定交换律和成图距离范围。

2.3   中间种质数据资源的分析

按照ISSR数据的高度应用多态标准，以准确高效地鉴别数据等位分析，通过区别不同物种的基因，判断在引物状态下的多倍体小麦品种扩增情况。通过引物可以清晰地观察其谱带情况。按照ISSR数据的对比信息分析，判断谱带的多态程度，分析标记多态性能的估测。按照小麦品种间的亲缘关系，通过标记确定结果的一致性[1]。根据标记构建，明确小麦品种体系的图谱。通过使用PAPD进行对比分析，发现数据中二核苷酸的重复引物类型，分析亲缘关系，确定品系间的分别。

通过引入的供试小麦品种，采用明显区分的操作方法，对各个基因之间的遗传差异、亲缘关系进行判断。依照具体的ISSR分子，合理标记小麦杂种的划分优势，确定结论关系。按照具体的作物数据分析，通过ISSR标记完成品种遗传差异的数据效果分析。根据作物的多样性，及时检查ISSR数据分析标记的栽培过程。

依据结果的ISSR引物判断，确定扩增的多态链条模式，根据每一个引物的平均扩增标准，明确多态性链条的模式。扩增产物中，需要根据大小进行区间分析，按照普通化的栽培遗传关系亲密度，判断野生稻之间的亲缘关系水平。通过聚类标准分析，明确栽培野生稻的显示分组关系。按照标准建立水稻光温度敏感不育体系的核算圖谱。利用ISSR引物完成引物检测分析，通过多态形式的数据分析，判断ISSR引物检测的比例关系，完成更多大段的数据分配，确定聚合类型。通过材料确定聚合形式，按照不育体系标准，分析显示的亚类群，将衍生的不育体系聚集在一起。通过遗传差异的数据分析，判断总体计算遗传距离内容。根据收到的数据模式，分析多态下的状况水平[2]，完成多态ISSR数据标记。利用ISSR标记、PAPD标记，完成组建多栽培品种的遗传多样数据分析。通过品类数据分析，判断现骨干多态性带因素。结合2种标记，完成聚合类物质的研究、供货引物操作类别的区分。

3   ISSR体系作物的鉴定应用分析

ISSR是按照准确的聚合酶链接反应操作完成分子标记。通过检查各类因素的影响情况，判断其反应体系和建设程序流程。依照鉴定的通用反应水平体系，分析扩增程序流程。充分利用扩增标准稳定性，判断ISSR快速标记下的作物品鉴视频，明确ISSR技术反应体系和反作用程度特异性。依照ISSR分子反应程序进行优化，明确不同作物的优化建设模式，获取ISSR反应体系完成鉴定分析效果的准确判断。

3.1   试验分析

选取小麦、棉花、水稻、玉米、烟草等品种进行试验分析。采用聚合酶蛋白下DNA数据标记的模式，分析测定其浓度和质量水平。

3.1.1   ISSR数据反映优化

按照ISSR数据反映优化体系，对名称、序列信息进行调整，记录ISSR反映优化的过程，分析聚合酶DNA以判断数据水平，结合相关组合完成数据优化的测试分析。记录PCR反映程序，通过对温度、扩增循环数的组合分析，调整扩增谱带内容。按照火温梯度试验水平进行判断，明确反映下的测算。通过分析混合扩容增产物，按照琼脂糖凝胶染色，通过凝胶图像数据，检测拍图，判断PCR反应试剂情况[3]。通过聚合酶的合生分析，判断优化方式。

3.1.2   反应稳定检验物品鉴定分析

依照不同的作物，分析优化适应的PCR体系模式。通过利用反应体系确定扩增、筛选多态的引物品种，完成数据的鉴定分析。

3.2   结果分析

ISSR检验结果显示，不同作物的PCR反应不同。根据扩增结果判断电泳，明确DNA测定的保准。通过准确的反应体系逐步增容扩效，优化适应ISSR反应体系。退火稳度不同，扩增谱带、清晰度不同。在低温退火下，调整拖尾和弥散的情况下。在高温退火下，调整稳定条带关系，逐步减少确定最佳的温度范围。

3.2.1   烟草鉴定结果分析

通过利用ISSR体系，对烟草的生物体系进行鉴定，确定PCR稳定反应。其中有16条ISSR增扩容达65条，平均引物为4.1条。其中有30条多态条带，多台比率为46%。通过引物可以鉴别出品类。

3.2.2   小麦鉴定结果分析

通过ISSR对反应体系进行鉴定，判断相关反应体系下的稳定性。按照扩增产物大小，判断间值，明确谱带范围。根据多态磁条情况，分析每条ISSR引物扩增条目，确定引物标准。

3.2.3   水稻鑒定结果分析

依照100条ISSR引物所筛选出的多态性水稻品种进行鉴定，其中有17条多态引物，共产生98条谱带，平均每条5.76。按照引条完成组合分析，判断带型，明确鉴别的型号和标准，完成组建品类的分析。

3.2.4   玉米鉴定结果分析

共5条多态ISSR引物，且共增扩出48条谱带，平均引物为9.6条。按照扩增的大小进行分析，确定48条谱带中有40条多态谱带，多态比率为83%。通过对引脚扩增的多态进行目标分析，确定3条引物组合，最终鉴定分析玉米的品种。

3.2.5   棉花鉴定结果分析

按照棉花最适应的反应体系，分析优化棉花的最佳标准。依照ISSR引物，分析棉花的PCR扩增比例关系，确定体系的稳定性。通过试验结果的优化，加强对反应体系下不同棉花品种的分析，适应不同的ISSR引物操作。按照ISSR组合引物，调整棉花的品类鉴定过程，明确棉花的最佳品类。

3.3   PCR反应体系的优化分配

按照ISSR数据分析标记，判断遗传多样图谱数据内容。通过资源信息的收集，对ISSR进行鉴定分配，调整扩增的比例关系。通过用量数据分析，判断聚合酶的用量特异性。分析电泳图谱的比例关系，判别合成速率和产量关系。对比DNA聚合酶活性，控制浓度标准水

综上所述，ISSR技术是一项快速、准确、多态的分子标记操作方法。通过大规模的数据基因分析，按照指纹数据、遗传数据、基因定位数据等模式的判断，从物种遗传学角度，分析相关的整体作用发挥水平，判断其实际的作用标准和应用价值意义，满足现代基因数据种植标记分析的研究需求。

参考文献：

[ 1 ] 孙洪，程静，詹克慧，等.ISSR标记技术及其在作物遗传育种中的应用[J].分子植物育种，2005（1）.

[ 2 ] 林志坤，孙威江，陈志丹，等.ISSR分子标记技术及其在茶树研究中的应用[J].广东农业科学，2014（9）.

[ 3 ] 白成科，文苗苗，于凤，等.基于ISSR分子标记技术构建黄芩核心种质的方法研究[J].中药材，2010（11）.