不同基质对β-受体激动剂回收率的影响

张慧利，张 佳，左英芳，成林林，屈俊成，杨美荣

（焦作市畜产品质量安全监测中心，河南焦作 454000）

1 前言

β-受体激动剂是一类人工合成的苯乙胺类物质，能刺激动物体神经系统，使之产生兴奋从而提高机能状态的一类药物。它可促进动物（如猪、牛、羊等）的生长，且由于胴体组成的重新分区，能减少脂肪沉积，提高肌肉质量，被大量应用于畜牧生产，以促进家畜生长和改善肉质。但人体食用含有一定量β-受体激动剂的动物性食品会出现肌肉兴奋性增强、分解脂肪成游离酸进入血液、内脏横纹肌和平滑肌兴奋性增强等中毒症状。因此，准确检测畜产品中β-受体激动剂显得尤为重要。

2 试剂、材料与溶剂

除特别注明外，以下试剂均为分析纯；水为符合GB/T 6683规定的一级水。

克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇对照品（纯度均大于98.0%）；乙酸乙酯；甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；甲酸（色谱纯）；氨水；碳酸钠；混合型阳离子交换固相萃取柱（规格60mg，3ml）；微孔滤头（孔径0.22μm）孔径0.22μm

3 仪器与设备

液相色谱-串联质谱仪（配电喷雾离子源，美国Waters公司Waters ACQUTYTMUPLC-Xevo TQ-S）、天平（感量0.01g）、涡旋混合器、振荡器、组织均浆机、离心机、氮吹仪、固相萃取装置

4 方法与步骤

4.1 样品前处理

猪肉、牛肉、羊肉共三组，每组六个平行样。准确秤取2（±0.02）g样品于50ml离心管中，加入5ml10%碳酸钠溶液，10ml乙酸乙酯提取，涡旋振荡10min，12000r/min离心10min，重复提取一次，合并两次上清液；向合并的上清液中加入0.1mol/L盐酸溶液5mL，涡旋混匀，震荡10min，5000r/min离心5min，重复提取一次，合并两次水相，备用。

4.2 净化

使用Oasis MCX 3cc（60mg）柱子，依次用3ml甲醇、水活化，取全部备用液过柱，依次用3ml水、甲醇淋洗，用5%氨化甲醇溶液3ml洗脱。

4.3 浓缩

洗脱液于50℃下氮气吹干后，残余物用甲醇-0.1%甲酸水溶液（5±95，V/V）1ml充分溶解后，15000r/min高速离心10min，取上清液过0.22μm滤膜，上机测定。

4.4 色谱条件

仪器：Waters公司UPLC Xevo TQ-S液质联用仪；色谱柱：BEH C18（50×2.1mm，1.7μm）；流动相：A相乙腈溶液、B相0.1%甲酸水溶液；流速：0.4ml/min；柱温：30℃；进样量：5μl。

4.5 标准品制备与添加

分别称取盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇约10.0mg，置不同100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释成浓度为100μg/ml的标准储备液。分别准确量取盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇储备液于同一100mL容量瓶中，用甲醇稀释成浓度为20ng/ml的混合标准中间工作液。准确吸取混合标准中间工作液100μl添加到不同基质的空白样中。

4.6 方法定量计算

空白添加法单点校正：

5 结果

经上机检测，不同基质对超高效液相色谱-串联质谱法测定β-受体激动剂回收率的影响如下：

表1 不同基质对液质方法测定β-受体激动剂回收率的影响

综上，基质不同，回收率不同。回收率由大到小依次为猪肉、牛肉、羊肉。

6 分析

基质效应是指在样品测试过程中，由于待测物以外其他物质的存在或者其他的物理、化学因素，直接或间接影响待测物响应的现象。样品中含有的内源性物质、体内药物的多个代谢产物或其他同类药物可引起基质效应，如动物组织中蛋白质、脂肪、其他内源性物质等的影响。因猪肉、牛肉、羊肉中蛋白质、脂肪、脂肪、无机盐等含量不一致，进而影响回收率。消除基质效应，可采用最大限度地去除基质成分，如沉淀蛋白法、液液萃取、固相萃取法；柱切换技术，即将大分子、无机盐等与待测物分离，排除内源性物质干扰；优化色谱质谱条件，因ESI源受基质影响较大，可选择合适的有机相、加入甲酸等，改善分离增加保留时间减少共流出物，梯度洗脱等；也可采用内标法消除基质效应，提高动物组织中提取β-受体激动剂残留的回收率，使检测更准确。