微生态制剂在克氏原螯虾生态养殖中的应用试验

骆玉玲 张辉 白海锋 袁永锋 李引娣

摘 要：为了解复合芽孢杆菌微生态制剂对克氏原螯虾（Procambarus clarkii）养殖池塘水质及螯虾成活率的影响，设计了3组试验塘（使用复合芽孢杆菌）和3组对照塘（未使用复合芽孢杆菌）进行92 d的养殖对比试验。结果表明，试验塘总体水质优于对照塘，与对照池相比，试验池氨氮含量显著降低了69.6%，亚硝酸盐含量显著减少了545%，透明度显著降低了23.5%， pH值和电导率变化显著（P<0.05），试验塘克氏原螯虾成活率显著提高了128%，养成规格显著增加了27.8%，生长率显著高于对照塘（P<0.05）。研究表明，浓缩复合芽孢杆菌微生态制剂对养虾池塘的水质具有一定的净化效果，并可通过调节螯虾免疫系统减少病害发生，提高螯虾养殖成活率。

关键词：复合芽孢杆菌;水质调节;成活率;克氏原螯虾（Procambarus clarkii）

克氏原螯虾（Procambarus clarkii）是我国主要的淡水养殖品种之一[1]，也是稻虾共作、轮作模式首选品种。因其适应性强，养殖效益高，近年来养殖规模逐年扩大，集约化程度越来越高，但与此同时克氏原螯虾发病率也逐年提高[2]。此外，在克氏原螯虾养殖生产中常大量使用抗生素、激素及化学消毒剂等，其结果不仅导致养殖克氏原螯虾的药物残留超标，而且还对养殖区域水环境产生影响。在这种形式下，克氏原螯虾养殖走可持续发展的健康、生态之路迫在眉睫。微生态制剂因其遵循生态环境自然循环法则，在养殖水环境处理以及养殖动物饲料添加等方面具有“三无”（无残留、无污染、无毒副）作用和不产生抗性等优点已被公认为无公害生态制剂，可有效替代众多抗生素类以及促生长类药物[3]。基于此，为了更好地指导陕西地区克氏原螯虾生态健康养殖模式的示范与推广，笔者及其团队于2017年5-8月在渭河陕西华阴段克氏原螯虾养殖池塘开展了微生态制剂应用对比试验。

1 材料与方法

1.1 试验池塘

试验地点位于陕西省华阴市渭河滩养殖区，试验池塘面积均为0.4 hm2，水深1.5～1.8 m，池塘东西走向，长方形，池底平坦，坡比1∶2.5，池塘设置对角线排灌，四周铺设防逃网布，试验期间用水来自黄河，经抽取、沉淀、过滤三道程序后进入虾池。

1.2 试验前准备工作

1.2.1 池塘消毒 池塘在养虾前要进行冬排、淸整、除淤、冻土、消毒。在放养虾苗的前10 d，采用生石灰消毒，用2 250～2 700 kg/hm2生石灰溶化后全池泼洒。生石灰使用7 d后加水至20～30 cm，使用生物有机肥肥水，用量控制在525～750 kg/hm2，促进饵料生物生长繁殖。

1.2.2 水草移栽 伊乐藻是养殖克氏原螯虾的首选水草，在池塘消毒后种植，覆盖面积控制在20%左右，水位保持在20～30 cm。4月上旬开始在伊乐藻周边移栽轮叶黑藻和金鱼藻，水草覆盖面积25%～35%，此时加水至50～60 cm。6～8月份水温过高时，水草覆盖率50%～60%，水深控制在100～120 cm。

1.2.3 苗种选择与投放 虾苗采购于渭南市华阴小龙虾繁育场，选择标准为：体格健壮、附肢完整、反应灵敏、规格整齐（160～200只/kg），运输成活率不小于95%。5月初开始投放虾苗，放养密度为12万～15万尾/hm2，同时分别混养鲢鱼苗（20～40尾/kg）75～150 kg/hm2。虾苗和鱼苗入池前均要用3%～4%食盐水浸洗5～10 min进行消毒。投放虾苗时间选择在晴天水温较低的早晨，浅水区多点投放，幼虾自行爬入水中为宜。

1.3 对比试验

1.3.1 试验用微生态制剂 试验所用的微生态制剂为西安富祺生物科技有限公司生产的复合芽孢杆菌纯粉，其主要成分包括枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、硝化细菌等多种有益活菌，总菌数≥2.8×1010ind/g（有效期2年）。

1.3.2 试验方法 试验在3个面积相同的相邻池塘中进行，复合芽孢杆菌使用量为每水深1 m时全池泼洒750～900 g/hm2，使用频次15 d;此外，采用拌饵形式，添加量控制在1 kg饲料添加2～3 g，同时选择3个情况相似池塘作为对照池塘，对照塘不使用复合芽孢杆菌，6个池塘保持一致性日常管理。试验期间，投喂饵料以人工配合虾饲料为主，天然动植物性饵料为辅，坚持“两头精，中间粗”的投喂原则，日投喂量控制在3%～5%。通过加注新水和使用微生态制剂进行水质管理，池塘透明度保持在30～40 cm，同时15～20 d用生石灰150～225 kg/hm2对池塘进行水质调节和底质改良，生石灰的使用时间与微生态制剂的使用时间相隔10～15 d。

1.4 水质监测与虾苗测定

试验期间每15 d对各个池塘的氨氮（NH+4-N）、亚硝态氮（NO-2-N）、溶解氧（DO）、pH值、电导率（EC）、透明度（SD）、水温（WT）、水深（WD）等指标进行现场采样及检测，检测时间选择在上午，每個池塘固定4个检测点。随机取螯虾样本50尾，用游标卡尺测量体长，用电子秤（001 g）测定体重。

1.5 数据处理与分析

特定生长率（SGR）和成活率（SR）计算依据下面公式：

SGR（%/d）= 100 ×（lnWb- lnWa）/T

SR（%）= 100×（Pb/Pa）

其中，Wa、Wb分别为试验开始和结束时克氏原螯虾的体重，mg;Pa、Pb分别为试验开始和结束时的克氏原螯虾数量，尾;T为试验时间，d。

使用SPSS17.0统计软件进行试验数据统计，显著性分析采用单因素分析中的最小显著差数法检验比较（P<0.05）。

2 结果与分析

2.1 池塘水环境监测

从5月8日至8月10日共监测水质理化指标7次，结果显示试验池塘氨氮含量显著低于对照池塘（P<0.05），相比降低了69.6%，亚硝酸盐含量显著低于对照池塘（P<0.05），相比减少了54.5%，两个池塘的pH值和电导率均存在显著差异（P<0.05），透明度均值相比显著降低了235%（P<0.05）。试验池塘和对照池塘在水温、水深和溶解氧之间无显著差异（P>0.05），见表1。

注： 同一行相同字母代表差异不显著（P>0.05），不相同字母代表差异显著（P<0.05）。

2.2 小龙虾生长及成活

5月8日开始放苗，经过3个月的对比试验，8月10日开始4口塘同时采用多点位设置地笼的方式进行捕捞上市。统计测量结果（见表2）显示，试验开始时试验塘与对照塘放养的螯虾苗种大小无显著性差异（P>0.05）;试验结束时试验塘螯虾养殖平均成活率为76.5%，显著高于对照池塘（P<0.05）。生长参数：试验塘特定生长率为1.89%/d，平均规格为38.6 g/尾，均显著大于对照塘（P<0.05），两个池塘的螯虾平均体长差异不显著（P>0.05）。

注：同一列相同字母代表差异不显著（P>0.05），不相同字母代表差异显著（P<0.05）

3 讨论

有研究显示，微生态制剂在水产养殖中泼洒使用后可快速分散，分布于水体各水层不同部位，参与养殖动物残饵、粪便以及水体中有机质的分解，加快水环境改良，抑制有害微生物滋生[4]。本研究显示，复合芽孢杆菌纯粉能有效降低克氏原螯虾池塘的pH值、亚硝酸盐浓度、氨氮浓度，增加溶解氧含量，这一结果与南美白对虾、中华绒螯蟹养殖中使用微生态制剂试验结果相似[4-5]。这表明水产用微生态制剂在淡水经济甲壳类养殖期间对维持池塘水环境平衡具有积极的促进作用。

微生态制剂作为水产养殖饲料添加剂，其作用主要表现为在养殖动物体内产生各种消化酶参与能量代谢，提高动物对饲料的利用率，同时产生的有些酶类对促进养殖动物的生命活动起着重要作用[3]。此外，微生态制剂所产生的大量有益菌群与病原菌间就生存和繁殖的空间、时间、定居部位以及营养素等展开竞争，有效抑制了病原菌的生存、繁殖、定居以及附着，改善了养殖动物体内外生存环境，提高了养殖动物的存活率[6]。对比试验结果显示，试验池塘克氏原螯虾成活率和生长效果均显著高于对照组，此结果与贾秋红等[7]、高宏伟等[8]研究的结果一致，这说明水产用微生态制剂在提高养殖动物成活率上具有重要作用。有研究发现，水产用的微生态制剂中大部分有益菌能使动物机体免疫器官发育加快，T、B、淋巴细胞的数量增多，从而增强机体免疫力，提高养殖成活率[9]。此外，微生态制剂可通过物种间的竞争抑制动物肠道中的有害细菌生长繁殖，其中芽孢杆菌还能通过提高饲料转化和吸收，促进动物的生长。

近年来随着生物技术不断创新，具有特异性和针对性的新菌株获得成功培育，同时其稳定性也在很大程度上得到了提高，因此，适宜在水产上使用的微生态制剂终将成为饲料工业和养殖业中最具潜力的添加剂与改良剂[10]。在我国目前生态环境大保护的历史背景下，水产养殖要向着提质增效、绿色环保方向发展，陕西省克氏原螯虾养殖也必将走一条清洁养殖、健康养殖之路，微生态制剂在克氏原螯虾健康生态养殖中的应用前景广阔。

参考文献：

[1] 王克行. 虾蟹类增养殖学[M].北京：中国农业出版社，1997：302-310.

[2] 葉雄平，牟东，牟长军.标准化健康养小龙虾[M].北京：化学工业出版社，2016：5-12.

[3] 王亚敏，王印庚.微生态制剂在水产养殖中的作用机理及应用研究进展[J].动物医学进展，2008，29（6）：72-75.

[4] 曹静，樊靖，郭伟利.微生态制剂在南美白对虾生态养殖中的应用试验[J].科学养鱼，2015（12）：33-34.

[5] 贾秋红，白海锋，张星朗，等.微生态制剂对河蟹养殖成活率的影响[J].河北渔业，2016（12）：5-8.

[6] FULLER R W，PERRY K W.Effects of buspirone and its metabolite，1-（2-pyrimidinyl）piperazine，on brain monoamines and their metabolites in rats[J].Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，1989，248（1）：50-56.

[7] 贾秋红，李文香，李晓春，等.微生态制剂对异育银鲫“中科3号”苗种培育效果的影响[J].水产养殖，2016（3）：17-18.

[8] 高宏伟，李文香，李晓春，等.微生态制剂对长丰鲢苗种培育成活率的影响[J].水产养殖，2016， 37（8）：14-15.

[9] 陈永青，林亮，杨莺莺，等.微生态制剂在水产养殖中的应用[J].生态科学，2005，24（1）：80-83.

[10] 许金花，肖克宇.微生态制剂在水产养殖中的应用及前景[J].河北渔业，2006（2）：1-4.