经皮穴位电刺激对高龄IVF-ET 患者卵巢颗粒细胞凋亡及妊娠结局的影响

帅振虹 杨卓欣

随着我国“二胎”政策的全面放开， 有妊娠需求的高龄妇女数量不断增加。有研究表明， 35 岁以后女性生育能力逐年下降， ＞40 岁尤为明显。细胞凋亡是受一系列基因控制的程序性细胞死亡， 机体通过卵巢颗粒细胞凋亡调控着卵泡的发育成熟和闭锁。若颗粒细胞过度凋亡， 导致卵泡异常闭锁， 可能影响卵母细胞的正常发育过程， 进而引起卵母细胞质量下降。因此， 如何通过降低颗粒细胞凋亡率来抑制卵泡异常闭锁， 提高卵母细胞发育潜能， 对于治疗高龄不孕具有十分重要的意义。本研究采用经皮穴位电刺激(transcutaneous electric acupoint stimulation， TEAS)对高龄IVF-ET 患者进行随机临床对照研究， 现具体报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料

选取2018 年3～9 月在本院接受IVF-ET 治疗的60 例高龄女性患者作为研究对象, 按照随机数字表法分为TEAS 组和对照组, 每组30 例。TEAS 组患者平均年龄(35.9±3.1)岁, 平均不孕年限(4.9±3.5)年；对照组平均年龄(36.1±2.6)岁, 平均不孕年限(5.0±3.2)年。两组患者的年龄、不孕年限等一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1. 2 方法

两组患者均采用短方案。①TEAS 组选穴：关元、天枢、肾俞、命门、腰阳关、子宫、三阴交穴, 患者自促性腺激素(gonadotropin, Gn)启动日至HCG 日采用HANS 仪治疗,设置电流强度为20～25 mA, 频率为2 Hz, 3 次/周, 20 min/次。②对照组患者仅采用IVF-ET 方案治疗, 不加用TEAS 干预治疗。

1. 3 观察指标

采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记(TUNEL)染色法, 按照TUNEL 试剂盒说明书操作, 用光学显微镜观察卵巢颗粒细胞凋亡数：阳性细胞的胞浆内呈棕黄色颗粒, 阴性细胞呈蓝色, 并比较其凋亡率。取卵后比较两组患者的获卵数、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率。

1. 4 统计学方法

采用SPSS20.0 统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用t 检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 两组患者卵巢颗粒细胞凋亡率比较

TEAS 组患者卵巢颗粒细胞凋亡率为(13.67±2.14)%, 明显低于对照组的(19.58±3.69)%, 差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组患者卵巢颗粒细胞凋亡率比较(±s, %)

表1 两组患者卵巢颗粒细胞凋亡率比较(±s, %)

注：与对照组比较, aP＜0.05

组别 例数 卵巢颗粒细胞凋亡率TEAS 组 30 13.67±2.14a对照组 30 19.58±3.69 t 7.589 P 0.000

2. 2 两组患者临床结局比较

TEAS 组患者的获卵数明显多于对照组, 优质胚胎率及临床妊娠率均明显高于对照组, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。两组患者受精率比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2 两组患者临床结局比较(±s, %)

表2 两组患者临床结局比较(±s, %)

注：与对照组比较, aP＜0.05

组别 例数 获卵数(个) 受精率 优质胚胎率 临床妊娠率TEAS 组 30 7.86±3.69a 71.43(5/7) 100.00(5/5)a 46.67(14/30)a对照组 30 5.64±3.72 66.67(4/6) 25.00(1/4) 20.00(6/30)

3 讨论

女性随着年龄增长， 卵母细胞衰老进程加速， 导致卵子质量下降， 是高龄女性生育力显著降低的关键［1-3］。观察闭锁卵泡的超微结构发现， 颗粒细胞内的凋亡小体数与卵母细胞质量呈负相关［4］。表明颗粒细胞凋亡在选择优势卵泡和闭锁卵泡的过程中发挥着重要作用。Lee 等［5］的研究报道， 观察34 个IVF-ET 周期中的330 个卵母细胞发现， 妊娠组颗粒细胞凋亡率明显低于未妊娠组。提示颗粒细胞凋亡的发生率可用于预测IVF-ET 结局。

中医针刺在增加获卵数、改善卵细胞质量等方面有一定的优势。TEAS 由于其无创伤、疼痛小等优点， 越来越受到临床医生和患者的热爱［5-8］。TEAS 可以调节机体神经-内分泌系统和卵巢局部微环境， 释放多种生物活性物质， 产生一系列的生物学效应， 从而促进卵泡发育成熟、改善卵母细胞质量。有报道显示， TEAS 可以通过提高卵泡液中的干细胞因子水平， 抑制卵泡颗粒细胞凋亡， 提高卵母细胞发育潜能， 改善IVF-ET 结局［9-12］。

本研究采用TUNEL 法检测卵巢颗粒细胞凋亡率的结果显示， TEAS 组患者卵巢颗粒细胞凋亡率为(13.67±2.14)%，明显低于对照组的(19.58±3.69)%， 差异有统计学意义(P＜0.05)。TEAS 组患者的获卵数明显多于对照组， 优质胚胎率及临床妊娠率均明显高于对照组， 差异均有统计学意义(P＜0.05)。两组患者受精率比较差异无统计学意义(P＞0.05)。上述结果表明， 卵巢颗粒细胞过度凋亡可能通过调控卵泡异常闭锁影响卵母细胞质量、胚胎质量及IVF-ET 妊娠结局。

综上所述， TEAS 疗法可能通过抑制卵巢颗粒细胞过度凋亡减少卵泡异常闭锁， 保证卵母细胞正常发育成熟， 进而改善卵母细胞发育潜能， 提高IVF-ET 治疗结局。