2017—2018年张家界市手足口病病原学检测结果分析

田晓辉 刘晶晶 龚育平 张淳轶

[摘要] 目的 分析张家界市手足口病病原体构成特征的变迁，为手足口病防控提供科学依据。方法 收集2017—2018年张家界市手足口病临床诊断患者的咽拭子样本，采用实时荧光定量PCR方法检测手足口病毒核酸。结果 321份咽拭子标本中，肠道病毒核酸总阳性检出率为34.89%（112/321），其中EV71检出率为3.12%，CoxA16检出率为10.90%，未分型肠道病毒检出率为20.87%。2017年、2018年未分型肠道病毒构成比分别为64.71%、55.73%，所占比例明显提高。病毒核酸阳性标本以<5岁儿童居多，占97.33%，男童阳性检出率高于女童（P<0.05）。结论 2017—2018年张家界市<5岁儿童为手足口病高发人群。各型别病毒感染同时存在，但引起流行的主要肠道病原体为未分型肠道病毒，应加强手足口病的病原学检测。

[关键词] 手足口病;病原学;肠道病毒核酸;实时荧光定量PCR

[中图分类号] R725.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2019）05（c）-0160-03

手足口病是由肠道病毒引起的传染病，主要通过消化道、呼吸道和密切接触者等途径传播，好发于5岁以下儿童[1]。可引起手、足及口腔等部位的疱疹和发热[2]，多数患儿一周自愈，少数可引起肺水肿、心肌炎和无菌性脑炎等并发症[3]，重症患者病情快易致死亡。引起手足口病的病毒有20多种，均属微小核糖核酸病毒科，其中以CoxA16和EV71最为常见[4]。

为了了解张家界市手足口病患者的病原体特征，制定防控策略，该次对2017—2018年321例临床诊断病人的咽拭子样本，采用实时荧光定量PCR方法进行EV71、CoxA16和肠道病毒的核酸检测，并对结果进行统计学差异分析，有利于提出更好的预防控制措施。现将结果报道如下。

1  材料与方法

1.1  研究材料

采集哨点医院手足口病患者咽拭子标本321份，采集后放入病毒采样管内，4℃保存并在12 h内送往实验室。

1.2  仪器与试剂

ABI7300荧光定量PCR仪（美国应用生物系统公司），AUI001核酸提取仪（百泰克科技有限公司）。试剂：硕世生物科技股份有限公司的病毒核酸提取试剂盒（货号：SDK60102），柯萨奇病毒A16型（CoxA16）、肠道病毒71型和肠道病毒通用型核酸检测试剂盒（货号：JC20302）。

1.3  方法

①参照试剂盒使用说明书，使用自动核酸提取仪提取病毒RNA。

②采用肠道病毒通用型、EV71和CoxA16核酸检测试剂盒，使用荧光定量PCR法进行核酸检测，同时设置阴性、阳性和空白对照。反应条件为：50℃、30 min;95℃、5min;按照95℃ 10 s;55℃、40 s。

③结果以Ct值≤35为阳性。EV71、CoxA16核酸测定分别阳性时则分别判为EV71阳性、Cox16阳性;当肠道病毒通用性核酸测定阳性，而EV71和CoxA16核酸测定分别为阴性时则判为未分型肠道病毒阳性。

④数据采用Excel和SPSS 18.0统计学软件进行统计描述和数据处理分析，组间计数资料的比较使用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  病原学检测结果

2017—2018年采集手足口病患者咽拭子标本321份，检出阳性样本112份，检出率为34.89%.其中EV71阳性检出率为3.12%，CoxA16阳性检出率为10.90%。见表1。

肠道病毒2018年总检出率（38.61%）高于2017年总检出率（31.29%）（P<0.05）;2018年未分型肠道病毒阳性率（21.52%）高于2017年（20.25%）（P>0.05）;2018年CoxA16型肠道病毒阳性率（13.29%）高于2017年（8.59%）（P>0.05）;2018年EV71型肠道病毒阳性率（3.80%）高于2017年（2.45%）（P>0.05）;2018年未分型肠道病毒检出率远高于EV71和CoxA16（P<0.05）;2017年、2018年未分型肠道病毒构成比分别为64.71%、55.73%，所占比例明显提高。

2.2  性别分布

321例病例中男童为172例，女童为149例，男女比例为1.15：1，病毒核酸阳性数之比为1.38：1.男童总肠道病毒检出率（37.79%）显著高于女童（31.54%）（P<0.05），而EV71、CoxA16及未分型肠道病毒检出率差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.3  年龄分布

实验室确诊手足口病病例中，年龄最小的3个月，最大的11岁。实验室确诊病例以1～3岁居多，阳性构成比为79.47%（表3）。

3  讨论

實时荧光定量PCR利用荧光信号积累实时监测 PCR进程中产物总量的方法，具有特异性强、准确性高和灵敏度高等优点，可用于感染性疾病的初筛，也可用于相关医疗机构检验工作中的辅助手段[5]。

利用实时荧光定量PCR检测病毒快速、敏感的特点[6]，对张家界市321份手足口病病原标本进行检测。结果显示：2017年、2018年未分型肠道病毒构成比分别为64.71%、55.73%，所占比例明显提高，由此可见引起张家界市手足口病流行的主要肠道病原体为未分型肠道病毒。结果显示，所有报告病例中男性比例高于女性，与类似研究报道一致[7]。女童病例低于男童，可能与男童与人群接触的机会多、不注重卫生习惯和更为好动等因素有关，因此需要帮助他们养成好的卫生习惯和大力开展卫生知识宣传，从而切断手足口病的发生和流行[8]。另外临床诊断病例主要集于5岁以下儿童，需加强此类儿童病原学的检测。

此次检测，321份手足口病临床确诊病例咽拭子标本EV阳性检出率仅为3.12%，比报道的阳性检出率偏低[9]，可能与标本类型、试剂和采用方法等存在差异有关。有文献报道，粪便标本与咽拭子标本阳性检出率比较有统计学意义[10，表现为咽拭子阳性检出率低。若条件允许，则采集粪便或肛拭子标本，助于提高检出率。

[参考文献]

[1]  贺天锋，谢蕾，易波，等.2012年宁波市手足口病病原学特征分析[J].中国卫生检验杂志，2014，24（2）：198-200.

[2]  谢运清，吴修凤.2010-2013年枣庄市手足口病核酸检测结果分析[J].中国卫生检验杂志，2015，25（5）：731-734.

[3]  姚相杰，何雅青，蔡春林，等.2011年深圳市疑似重症手足口病的病原学检测及流行特征分析[J].中国卫生检验杂志，2014，24（2）：566-568.

[4]  Zhi-Chao Zhuang，Zeng-Qiang Kou，Yong-Juan Bai ，et al.Epidemiological Research en Hand， Foot and Mouth Disease in Mainland China[J].2015 Viruses，2015，7（12）：6400-6411.

[5]  郭陈，苏婧，许海燕，等.2014年-2015年南通市手足口病病原学监测结果分析[J].中国卫生检验杂志，2017，27（1）：117-119.

[6]  李燕，汪东篱，姚炜，等.深圳市光明新区2014年手足口病病原学监测结果分析[J].中国卫生检验杂志，2015，25（21）：3728-3730.

[7]  周帅锋，张帆，黄威，等.2009年湖南省哨点医院手足口病病原学检测与分析[J].南华大学学报;医学版，2010，38（4）：479-483.

[8]  苏艳.手足口病的流行病学特征分析与临床预防[J].中国现代药物应用，2016，10（1）：71-72.

[9]  秦玉君，牟广臻，刘靖宇，等.2007-2008年山东省烟台市手足口病的流行病学特征分析及主要病原鉴定[J].疾病监测，2010，25（1）：12-14.

[10]  于秋麗，申悦霞，韩彩芝，等.河北省年2009年手足口病病原学研究[J].现代预防医学，2012，39（8）：2026-2031.

（收稿日期：2019-02-21）

[作者简介] 田晓辉（1971-），男，土家族，湖南张家界人，本科，副主任技师，主要从事实验室质量管理工作。