联合检测儿童难治性支原体肺炎肺泡灌洗液IL-8、IL-10及INF-γ的意义

许柏华　胡婷　梁燕　刘清彪

【摘要】 目的：探討联合检测儿童难治性支原体肺炎（RMPP）肺泡灌洗液（BALF）白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-10（IL-10）及干扰素-γ（INF-γ）的意义。方法：回顾性分析2016年11月-2018年5月本院收治的RMPP患儿65例的临床资料为研究组，其中行支气管肺泡灌洗35例为A组，行支气管肺泡灌洗无效再接受激素治疗的30例患儿为B组。将同期行支气管肺泡灌洗的肺炎支原体肺炎患儿45例设为对照组。结果：研究组患儿BALF中细胞总数、上皮细胞及中性粒细胞比例均显著高于对照组（P<0.05），但淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞比例和对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗前，研究组BALF中的IL-8、INF-γ水平均高于对照组，IL-10水平低于对照组（P<0.05）;治疗后，B组患儿IL-8、INF-γ水平均高于A组，IL-10水平低于A组（P<0.05）;研究组患儿BALF中的IL-8、INF-γ水平与疗效呈负相关，而IL-10水平与疗效呈正相关。结论：难治性支原体肺炎患儿BALF中的IL-8、IL-10及INF-γ会出现异常表达，各指标水平与患儿的疗效有密切关系，值得推广和应用。

【关键词】 难治性支原体肺炎; 肺泡灌洗液; IL-8; IL-10; INF-γ

【Abstract】 Objective：To explore the significance of combined detection of interleukin-8（IL-8），interleukin-10（IL-10）and interferon-γ（IFN-γ）in bronchoalveolar lavage fluid（BALF）of refractory Mycoplasma pneumonia（RMPP）in children.Method：The clinical data of sixty-five children with refractory Mycoplasma pneumonia admitted to our hospital from November 2016 to May 2018 were retrospectively analyzed（the study group）.Thirty-five children who underwent bronchoalveolar lavage were selected as group A，thirty children who underwent bronchoalveolar lavage but failed to respond to hormone therapy were selected as group B，and the bronchoalveolar lavage bronchoalveolar bronchoalveolar bronchoalveolar bronchoalveolar 45 children with protoplast pneumonia were selected as the control group.Result：The proportion of total cells，epithelial cells and neutrophils in BALF of the study group was significantly higher than those of the control group（P<0.05），but there were no significant differences in the proportion of lymphocytes，eosinophils and macrophages between the study group and the control group（P>0.05）.Before treatment，the levels of IL-8 and INF-γin BALF of the study group were higher than those of the control group，and the levels of IL-10 was higher than that of the control group，there were significant differences in two groups（P<0.05）.After treatment，the levels of IL-8 and INF-γ in group B were higher than those in group A，and the levels of IL-10 were lower than those in group A，there were significant differences in two groups（P<0.05）.The levels of IL-8 and INF-γ in BALF in study group were negatively correlated with the curative effect，while the levels of IL-10 was positively correlated with the curative effect.Conclusion：The abnormal expression of IL-8，IL-10 and INF-γ in BALF of children with refractory Mycoplasma pneumonia is closely related to the curative effect of children，which is worth of popularizing and applying.

【Key words】 Refractory Mycoplasma pneumonia; Alveolar lavage fluid; IL-8; IL-10; INF-γ

First-authors address：Dongguan Tung Wah Hospital，Sun Yat-sen University，Dongguan 523110，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.04.033

难治性支原体肺炎是近年来儿科常见的疾病之一，具有病程长、治疗难度大、复发率高的特点，病情严重者临床症状一般表现为剧烈咳嗽、呼吸困难、存在意识障碍、有紫绀现象、有胸腔积液、拒食且有脱水症等。若不及时接受治疗，会导致脏器功能不全，发病人群一般集中在儿童或青少年群体[1]。迄今，难治性支原体肺炎的发病机制仍不明确，从流行病学的角度来说，该病是飞沫通过呼吸道传播的，春、冬为发病的高峰季节。但越来越多的国外学者发现，难治性支原体肺炎的发病和人体的免疫因素有关[2-3]。本院检测难治性支原体肺炎患儿BALF中的IL-8、IL-10及INF-γ水平表达，发现表达异常，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性研究2016年11月-2018年5月本院收治的儿童难治性支原体肺炎患儿65例的临床资料为研究组，根据治疗方法和疗效再分为A、B组，A组为仅行支气管肺泡灌洗的难治性支原体肺炎患儿，B组为行支气管肺泡灌洗后再加用甲泼尼松龙等治疗的患儿。另外，将同期行支气管肺泡灌洗的肺炎支原体肺炎患儿45例设为对照组。纳入标准：患儿均符合支原体肺炎的诊断标准且双侧均存在肺炎;年龄3～10岁;排除标准：对本研究药物过敏;其他病原体感染的患儿;心肺功能异常。该研究已经伦理学委员会批准，患儿家属知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法 所有患儿入院后先接受阿奇霉素（生产厂家：辅仁药业集团有限公司，国药准字H20034169，规格：0.25 g×6 s）静脉治疗，10 mg/（kg·d），主要以化痰治疗为主，3 d后再接受肺泡灌洗术与软式支气管镜。所有患儿均需禁食4 h，术前30 min，先建立静脉通道，行气管插管麻醉，利用利多卡因（生产厂家：石药银湖制药有限公司，国药准字H14024045，规格：5 mL︰0.1 g）麻醉气道黏膜表面，支气管镜从鼻腔或口腔进入，到达患侧肺叶，在了解支气管情况后注入1 mL/kg的生理盐水来灌洗，最大灌洗量不超过20 mL，负压吸出后将标本保留，保证回收率在40%以上，反复灌洗2～4次[4]。若有患儿接受治疗后的效果不理想，则需利用甲泼尼龙琥珀酸钠（生产厂家：Pfizer Manufacturing Belegium NV，进口药品注册标准JX20000424，规格：40 mg），行静脉滴注，剂量为2 mg/kg，持续注射4 d，再停用3 d为一疗程，连续使用2个疗程。

1.3 观察指标 患儿入院后，抽取其4 mL的静脉血，用于血培养和血常规的检测，对婴幼儿患儿则采取无菌负压吸引法来获取痰标本，年长儿童则在早晨漱口时用力将痰咳出，再收集用于痰培养与呼吸道病原体的检测。抽取两组患者空腹状态下的静脉血，离心分离后将血液中的血清放置在-80 ℃的冰箱中冻存，采用双抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）法进行检测IL-8、IL-10、INF-γ水平，试剂盒来自法国Diaclone公司，具体操作严格按照说明书来执行。利用分析模型分析三种指标与治疗效果之间的关系。记录两组患者BALF中细胞总数与细胞学成分。

1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患儿一般资料比较 研究组患儿65例，男36例，女29例，年龄4～10岁，平均（6.8±1.5）岁。其中A组35例，男21例，女14例;年龄4～9岁，平均（6.1±1.4）岁。B组30例，男15例，女15例;年龄5～10岁，平均（7.1±1.5）岁。对照组患儿45例，男23例，女22例;年龄4～12岁，平均（7.5±1.7）岁。所有患儿一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组患儿细胞总数与分类计数对比 研究组患儿BALF中细胞总数、上皮细胞及中性粒细胞比例均显著高于对照组（P<0.05），但两组淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞比例比较差异均无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.3 两组患儿治疗前IL-8、IL-10、INF-γ水平对比 治疗前，研究组BALF中IL-8、INF-γ水平均高于对照组，IL-10水平低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.4 研究组中两组患儿治疗后IL-8、IL-10、INF-γ水平对比 治疗后，B组患儿IL-8、INF-γ水平均高于A组，IL-10水平低于A组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表3。

2.5 研究组BALF中的IL-8、IL-10、INF-γ水平与疗效的相关性分析 研究组患儿BALF中的IL-8、INF-γ水平与疗效呈负相关，而IL-10水平与疗效呈正相关，见表4。

3 讨论

肺炎支原體已成为小儿呼吸系统感染的一个重要病原菌，其急性期会出现某些浓度异常的细胞因子，导致患儿的细胞免疫力功能紊乱与低下。发生支原体肺炎时患者体内的炎症有轻、重程度之分，会引起许多肺外的并发症，由此导致多器官功能衰竭，甚至死亡[5-8]。国内对于RMPP的共识：（1）大环内酯类抗生素治疗是一种常规手段，但疗效并不明显，而且晚期容易引发闭塞性细支气管炎等并发症;（2）病程长，一般在3～4周;（3）病情严重，会伴随肺外多系统的损伤[9]。目前，许多研究专家发现，治疗前后BALF的多种细胞因子水平会有明显变化，并猜测这可能与病情的进展及治疗的效果有着紧密的关系。

目前对RMPP的发病机制还没有确定的说法，但主流的说法有两个，一个是免疫异常说，另一个则是耐药菌感染[10]。有研究发现，与敏感株相比，耐药株感染的患儿其热程会长达1～3 d。更有研究发现，受耐药株感染的患儿，其胸部影像学的改变相当严重，并伴有肺外并发症，延长了住院时间。但经过大环内酯类抗菌药物的治疗后，病情稍有缓解，患儿的病情呈现轻症[11]。而免疫异常则是患儿表现出来和肺炎链球菌肺炎等其他肺炎不同的一个特征。发病时，支原体肺炎感染会使中性粒细胞聚集在患儿体内[12]。由于RMPP患儿存在病发部位，有溃疡形成，因此上皮细胞有增多的现象。此外，患儿感染后，短期之内存在较为复杂的免疫抑制的现象，这可能也是导致患儿淋巴细胞减少的原因[13]。在本次研究中，研究组患儿BALF中细胞总数，上皮细胞与中性粒细胞比例均显著高于对照组（P<0.05），但淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞比例和对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。

纤维支气管镜技术近年来不断成熟，能够应用小儿呼吸系统诊治中，能清晰全面地观察气道的通气效果以及病变部位，注入稀释过的药物或者生理盐水还能实现治疗的目的，因此通过对BALF的成分分析，能够有助于临床研究发病机制以及预后判断[14]。与普通支原体肺炎相比，RMPP的发展十分迅速，不仅会造成直接损伤，还会刺激机体的免疫反应，损害气道黏膜，这类免疫损伤在细胞因子水平中显得十分突出。糖皮质激素是抑制炎症的常用药物，能够将促炎因子转化为抑炎因子，从而实现抑制炎症的目的[15]。在患儿使用了抗菌药物的前提下，再加之合理的使用激素药物能够缓解患儿的病情。甲泼尼龙是具有代表性的药物，以静脉注射的形式进行治疗，对患儿的免疫应答及局部的炎症反应都能起到一个良好的治疗作用，再配合支气管肺泡灌洗术的应用，气道内的分泌物均能够有效清除，肺功能与氧合通气的效率均能得到极大改善[16]。INF-γ是Th1（1型辅助性T细胞）的分泌物，一旦表达过度，则会引发瀑布级的联反应，导致肺组织受到损害，抑制疾病转归。有研究认为，IL-8是介导受损纤维化的细胞因子，对气道黏膜表面胶原沉积有着直接的影响。杨丽娟等[7]认为，IL-10是一种抑炎因子，由2型辅助性T细胞（Th2）合制而成，调节炎症反应的强度。它能够抑制TNF、单核细胞INF-γ、IL-3、IL-2等多种细胞因子的分泌，同时刺激抗炎因子的分泌，起到抑制免疫应答的作用。IL-10水平不断上升，这表明气道内黏膜糜烂或肉芽组织增生等严重现象受到抑制[17]。有研究发现，被IL-10基因敲除的小鼠会有慢性肠炎的症状，由此来模拟人类的炎症性肠炎病，能够发现内源性的IL-10能够起到抑制炎症反应的作用[18]。若缺乏IL-10的分泌，炎症过程中会出现不可逆的损伤，受感染或遭受其他诱因刺激时，对中性粒细胞浸润至肺部这一过程起着重要的作用。在本次研究中，治疗前，研究组BALF中IL-8、INF-γ水平均高于对照组，IL-10水平低于对照组（P<0.05）;治疗后，B组患儿IL-8、INF-γ水平均高于A组，IL-10水平低于A组（P<0.05）。

由于BALF是直接由病变的肺组织产生，因此BALF中的细胞因子水平能够更为准确地反应MP感染后的肺部免疫功能的状况以及病变肺组织的炎症程度，能够发现RMPP存在的免疫损伤和免疫功能紊乱是治疗的难点之一[19]。在早期應用一些糖皮质激素或其他免疫抑制剂能够有效减轻咳嗽、发热等症状，阻碍炎症的发展进程以及并发症的发生[20]。根据分析细胞因子的水平，能够初步估计患儿的治疗效果，有助于简化后期的预测工作，有效指导治疗方案。在本次研究中，研究组患儿BALF中的IL-8、INF-γ水平与疗效呈负相关，而IL-10水平与疗效呈正相关。本研究样本数量较少，持续时间短，后续需进一步进行多中心、大样本的研究。

综上所述，难治性支原体肺炎患儿BALF中的IL-8、IL-10及INF-γ会出现异常表达，各指标水平与患儿的疗效有密切关系，值得推广和应用。

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（收稿日期：2018-12-04） （本文编辑：程旭然）