相思藤生药学研究

2019-08-11 08:21张春花郭宏伟黄仁彬
中成药 2019年7期
关键词:腺毛薄层灰分

张春花, 郭宏伟, 黄仁彬, 朱 丹*

(1.广西壮族自治区卫生计生委生殖中心药剂科,广西南宁530021;2.广西医科大学药学院,广西南宁530021)

相思藤,中药大辞典记载其为豆科相思子属植物相思子Abrus precatorius L.的干燥茎叶[1],又名土甘草、相思子藤,主要分布于广西、广东、福建等地,其性凉,味甘,入肺、肝、肾三经,有清热解毒、消炎利尿、润肺护肝之功效,在民间主要用于咽喉肿痛、肝炎、肺热咳嗽、乳痈、疮疖等病症的治疗[2-3],是广东凉茶原料之一。相思子中富含三萜皂苷类成分,如相思子三萜苷A、B、C、D,相思子原酸,环菠萝蜜烷苷等,此外还富含黄酮类、皂苷类、生物碱类[4-7]。课题组前期研究发现,它对酒精性肝中毒具有一定保护作用[8-9]。

然而,市场上相思藤来源混乱,混淆品多,常见的有鸡骨草 (广州相思子) Abrus cantoniensis Hance、毛相思子Abrus mollis Hance、小叶三点金草Desmoidum microphyllum(Thunb.) DC.等[10]。目前,相思子全株中研究较多的为种子[11-12],对相思藤的关注甚少,目前尚未建立质量标准。为了保证用药安全,更好地辨别真伪,本研究对相思藤进行了较为系统的生药学研究,包括性状鉴别、显微鉴别、薄层色谱,以及水分、灰分和浸出物检查,并制订合理的限度,以期为其鉴定和质量评价提供依据。

1 材料

1.1 仪器 BH-2 生物显微镜(日本奥林巴斯公司);Leica RM 2245 轮转式切片机(德国徕卡公司);LY-HPCCD 万能视频成像装置(成都励扬精密机电有限公司);AK-400A 摇摆式粉碎机(浙江奥力集团有限公司); HD-330 系列摊片烤片机(湖北慧达仪器有限公司);YP2002 电子天平(上海越平科学仪器有限公司);HP25DHS 恒温恒湿箱(武汉瑞华仪器设备有限责任公司);马弗炉(上海沪载实验仪器有限公司);KQ-100DE 超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);RRH-200 粉碎机(上海缘沃工贸有限公司)。

1.2 试剂 β-谷甾醇对照品(中国食品药品检定研究院,批号110851-201206);无水乙醇(广东光华科技股份有限公司,批号20140425);甲醇(广东光华科技股份有限公司,批号20141219);石油醚 (广东光华科技股份有限公司, 批号20140504);乙酸乙酯(广东光华科技股份有限公司,批号20121224);环己烷(天津市博建化工有限公司,批号20140123);乙酸丁酯(广东光华科技股份有限公司,批号20130616);松节油(广东光华科技股份有限公司,批号20101206);其他试剂均为分析纯。

1.3 材料 12 批相思藤收集于广西灵山等地,具体见表1,经广西中医药研究院赖茂祥研究员鉴定为豆科植物相思子Abrus precatorius L.的干燥茎、叶。

表1 样品信息Tab.1 Information of samples

2 方法与结果

2.1 性状鉴别 茎枝呈圆柱形或类方柱形,直径0.1~0.3 cm;表面淡黄色至灰黄色,具细纵纹,体轻,质软,易折断,断面皮部薄,黄白色,木部浅黄白色,中心有宽广的髓部;叶互生,偶数羽状复叶,小叶片卵形,长3 ~5 cm,宽1 ~3 cm,全缘,叶端急尖,上表面黄绿色,较光滑,下表面淡黄绿色,有稀疏非腺毛;纸质;气微,味甘回凉。

2.2 显微鉴别

2.2.1 茎横切面 木栓层为数列扁平细胞;皮层较窄,细胞扁平形、类圆形,壁较薄;中柱鞘纤维3~5 列,与石细胞群相间呈环状分布;韧皮部由韧皮纤维和韧皮薄壁细胞组成,韧皮纤维细胞壁较薄,微木化;木质部约占茎的1/2,木射线细胞1~4 列,长方形,导管单个或几个相连呈放射状分布,直径36 ~156 μm;髓部薄壁细胞圆形或椭圆形,细胞壁较厚,木化;中柱鞘、木质部和髓部的薄壁细胞内含草酸钙方晶。见图1。

图1 茎横切面构造图(×400)Fig.1 Transection feature of stems(×400)

2.2.2 叶横切面 上下表皮细胞1 列,圆形或椭圆形,长短不一,上下表皮均有非腺毛,有的折断留下断痕,非腺毛单细胞,长约75 ~165 μm;栅栏组织细胞1 列,圆柱形,长约10 μm;海绵组织细胞不规则形,排列疏松;中脉维管束扇形,木质部导管放射状排列,韧皮部较薄,周围有1 ~6 列中柱鞘纤维围绕;上表皮中脉略有凸出,下表皮中脉凸出。见图2。

图2 叶横切面构造图(×400)Fig.2 Transection feature of leaves(×400)

2.2.3 粉末特征 粉末为淡黄色,纤维成束或分离,纤维壁较薄,有些纤维细胞中含方晶,直径15~30 μm;非腺毛单细胞,长约100 ~170 μm;草酸钙方晶多面形,直径约15 μm;导管多为具缘孔纹导管,直径14~36 μm;叶上表皮细胞波状弯曲,叶下皮细胞波状弯曲,气孔平轴式,直径约20 μm。见图3。

图3 相思藤粉末特征(×400)Fig.3 Powder feature of A.precatorius(×400)

2.3 薄层鉴别

2.3.1 薄层条件优化[13-16]

2.3.1.1 提取溶剂 用甲醇、95%乙醇、氯仿作为提取溶剂,比较β-谷甾醇提取率。结果,确定甲醇为提取溶剂。

2.3.1.2 提取方法 比较分析超声法、回流法、索氏提取法对β-谷甾醇的提取率。结果,确定为超声法。

2.3.1.3 展开系统 采用石油醚-乙酸乙酯(3 ∶1)、环己烷-乙酸丁酯-石油醚(3 ∶1 ∶1)、环己烷-乙酸乙酯(8 ∶2) 作为展开系统。结果,确定为环己烷-乙酸乙酯(8 ∶2)。

2.3.1.4 薄层板 对比硅胶G 预制板、硅胶H 预制板、高效硅胶G 薄层板的分离效果,发现三者均可使主斑点得到有效的分离,但采用硅胶G 作为吸附剂时斑点无拖尾,更集中,颜色更清晰,故选择硅胶G 薄层板。

2.3.1.5 显色剂 以氨蒸气、10%硫酸乙醇溶液、1%磷钼酸乙醇溶液作为显色剂,通过对比显色效果发现三者均能显示主斑点,但1%磷钼酸乙醇溶液显色更清晰,斑点更集中,故选择该显色剂。

2.3.1.6 点样方式 比较圆点、条状的分离效果,结果表明圆点显示的主斑点更集中,大小适中,故选择该点样方式。

2.3.2 样品检测

2.3.2.1 对照品溶液制备 精密称定β-谷甾醇对照品4.8 mg,置于5 mL 量瓶中,加入甲醇至刻度,摇匀溶解,即得。

2.3.2.2 供试品溶液制备 取药材粉末(过3 号筛)1 g,置于锥形瓶中,加入20 mL 甲醇,超声处理1 h,滤过,滤液浓缩至1 mL,即得。

按2015 年版《中国药典》 四部薄层色谱法(通则0502)[13],取供试品、对照品溶液各5 μL,点于来自同一硅胶G 薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(8 ∶2) 作为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%磷钼酸乙醇溶液,晾干,显色,在日光下观察,发现供试品色谱中在与对照品相应位置上显相同颜色的斑点。按上述条件对12 批药材进行薄层鉴别,结果均能检出特征成分,斑点清晰,分离度较好,见图4。

图4 12 批样品薄层色谱图Fig.4 TCL chromatogram of twelve batches of samples

2.4 检查

2.4.1 水分 取药材粉末(过3 号筛) 约2 g,精密称定,按2015 年版《中国药典》 四部方法(通则0832 第四法)[17]测定。结果见表2。

表2 12 批样品水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物测定结果Tab.2 Determination results of water,total ash,acid insoluble ash and extractum of twelve batches of samples

2.4.2 总灰分、酸不溶性灰分 取药材粉末(过3 号筛) 约2 g,精密称定,按2015 年版《中国药典》 四部方法(通则2302)[17]测定。结果见表2。

2.4.3 浸出物 取药材粉末(过3 号筛) 约2 g,精密称定,以70%乙醇为溶剂,按2015 年版《中国药典》 四部方法(通则2201) 项下的热浸法[17]测定。结果见表2。

3 讨论

相思藤在两广地区为民间常用草药,容易与同属其他药材混淆[18],尽管使用广泛,但作为地方用药尚未建立质量标准,本实验通过对其进行生药学研究,以期为相关鉴别和质量标准的制订提供依据。在显微鉴别中发现,相思藤茎横切面中,中柱鞘纤维与石细胞群相间呈环状分布;叶横切面上下表皮均有非腺毛,非腺毛为单细胞;粉末中纤维成束或分离,有些纤维细胞中含方晶,非腺毛单细胞,草酸钙方晶多面形,气孔平轴式,以上特征可作为相思藤的显微鉴别依据。

本实验建立了相思藤中β-谷甾醇TLC 检测方法,比较了不同溶剂、提取方式、展开系统、薄层板、显色剂点样方式的检测结果,确定最佳色谱条件。在优化条件下,12 批样品均能很好地显色,并且斑点清晰,大小适中,表明该方法适用性良好。根据水分测定结果,参照2015 年版《中国药典》 四部(通则0832、2302、2201)[17],建议规定相思藤水分不超过15%,总灰分不超过5%,酸不溶性灰分不超过1%;按照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定,用70%乙醇作为溶剂时,浸出物不少于15%。

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