橡胶树枯萎病病原菌室内毒力测定

彭 昀，肖宇明，刘衍超，李增平，王 萌，梁晓宇，张 宇

(海南大学 植物保护学院，海口 570228)

橡胶树(Heveabrasiliensis)生产的乳胶是我国重要的战略资源，随着橡胶树种植年代增加及周边生态环境变化，一些新的病虫害逐渐显现出来[1]。2017年在对海南省琼中加钗农场橡胶树的病情调查中发现尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)引起了橡胶树枯萎病。该病导致橡胶幼树顶梢自上而下回枯变褐，呈现“半边死”症状。枯死枝条茎干木质部髓心变褐，木质部横切面有零散分布的蓝变症状。有的幼树基部茎干一侧的树皮爆裂溢胶，溢胶凝固变黑，削去表皮，韧皮部组织变黄褐色至黑褐色，木质组织有变黑褐色的纵向条纹。为预防这种橡胶树新病害的潜在威胁，笔者对橡胶树枯萎病进行室内药剂筛选，采用生长速率法测定了4种常用杀菌剂对该病原菌进行毒力测定[2]，并选择2种防效显著的药剂进行复配研究[3]，旨在为该病害防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料 供试菌种:供试尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)分离于海南省琼中加钗农场热研7-33-97橡胶树幼树枝条。供试药剂:97.3 %咪鲜胺(prochloraz)原药购自江苏辉丰农化股份有限公司；97 %异菌脲(iprodione)原药购自江苏快达农化股份有限公司；96 %百菌清(chlorothalonil)原药购自山东青岛奥迪斯生物科技有限公司；96%吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)购自海南正业中农高科股份有限公司；97.2 %多菌灵(carbendazim)原药购自江苏省太仓市农药厂；99 %水杨羟肟酸(SHAM)购自上海麦克林生化科技有限公司。将各原药配成10 000 mg·L-1的母液，4 ℃保存。 供试培养基:PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)培养基：马铃薯200 g，葡萄糖15 g，琼脂粉15 g，蒸馏水1 000 mL，灭菌备用。

1.2 方法

1.2.1 含药平板的制备 分别取各药剂母液加入到定量的PDA培养基中摇晃混匀，使培养基含咪鲜胺的浓度为 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1，含百菌清的浓度为 0，1，2，4，8，16 mg·L-1，含吡唑嘧菌酯的浓度为 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1(为降低旁路呼吸途径对药剂的影响, 供试培养基中加入终浓度为100 mg·L-1的水杨羟肟酸[4])，含多菌灵的浓度为 0，0.1，0.5，1，5，10 mg·L-1。将含药培养基倒入灭菌的培养皿中，每皿 20 mL，每个处理设置3个重复。

1.2.2 处理方式 取制作好的含药平板，空白对照为不加药剂的PDA平板。使用5 mm打孔器在PDA培养基上28 ℃培养2 d的病原菌菌落边缘取菌碟，分别接于处理培养基平板的中心位置上[5]，每个处理做3个重复，放置于28 ℃生化培养箱内培养，于对照组菌落生长6～7 cm时，用十字交叉法测量菌落直径并记录[6]。

1.2.3 药剂复配 选取2种药效作用较好的药剂进行复配，以EC50浓度按照不同比例配比，配比为1∶1，1∶3，1∶5，3∶1，5∶1。再在不同比例配比下设置5个浓度梯度，浓度稀释按照逐级稀释法稀释浓度，实验按照1.2.2和1.2.3中所述方法进行。

1.2.4 数据处理 使用EXCEL2016，DPS7.05数据处理软件对所得的数据进行统计分析，得出各药剂的毒力回归方程、EC50和相关系数。

复配增效系数(SR)[7]计算方法如下：

式中：a，b分别代表2种农药的含量比例。根据增效系数(SR)作出2种药的联合作用评价：当SR>1.5 时，药剂混用时毒力大于各单剂单用时毒力的总和，表现为增效作用；当SR在 0.5～1.5 时，表现为相加作用；当SR<0.5时，药剂混用毒力低于各单剂的毒力总和，表现为拮抗作用[8]。

2 结果与分析

2.1 4种杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果 4种杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果见表1。由表1可见，4种常见杀菌剂对尖孢镰刀菌丝的生长抑制效果为：咪鲜胺> 多菌灵>吡唑醚菌酯>百菌清。结果表明，麦角甾醇合成抑制剂类杀菌剂的咪鲜胺和有机杂环类(苯并咪唑类)杀菌剂的多菌灵对尖孢镰刀菌具有较高的抑制活性，故选择咪鲜胺和多菌灵作为单剂进行下一阶段的复配实验。

表1 供试4种杀菌剂对尖孢镰刀菌的抑制作用

2.2 复配杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果 复配杀菌剂对橡胶树枯萎病病原菌的抑制效果见表2，由表2可见，咪鲜胺和多菌灵1∶1，1∶3，1∶5，3∶1及5∶1复配条件下EC50值分别为0.96，0.71，0.17，0.87，1.01 mg·L-1，1∶5的复配效果最佳，5∶1的复配效果最差。

表2 复配药剂对菌丝的生长抑制结果

咪鲜胺和多菌灵的复配增效系数见表3，由表3可见，咪鲜胺和多菌灵1∶1，1∶3，3∶1及5:1复配条件下增效系数分别为 0.92，1.37，0.92，0.77，均在0.5～1.5之间，2者药效作用为相加作用，无拮抗作用。咪鲜胺和多菌灵配比在1∶5时，SR值为6.01，表现为增效作用。

表3 咪鲜胺和多菌灵的复配增效系数

3 讨 论

本研究对4种常见杀菌剂对橡胶树尖孢镰刀菌丝的生长抑制进行了测定，除百菌清外，咪鲜胺、多菌灵、吡唑醚菌酯抑制菌丝效果显著。其中麦角甾醇合成抑制剂类杀菌剂的咪鲜胺和有机杂环类(苯并咪唑)杀菌剂的多菌灵对橡胶树尖孢镰刀菌的抑菌效果尤为突出，故选择咪鲜胺和多菌灵进行复配实验，通过5种不同比例复配得出的抑菌效果来看，其中咪鲜胺：多菌灵为1∶5的复配效果最佳，表现为增效作用，并且EC50达到了0.17 mg·L-1，效果优于任何一种单剂。

综上所述，橡胶树枯萎病可由常用药剂进行防治，鉴于咪鲜胺与多菌灵的复配效果尤为突出，推荐在病害发生时采用，避免单一药剂的过度使用所导致病菌抗药性的增强。